敲除牙龈卟啉单胞菌菌毛次要组分FimCDE的载体构建

作     者：黎景景 高鑫 李宽钰 王文梅 

作者机构：南京大学医学院附属口腔医院口腔黏膜病科江苏南京210008 南京大学医学院江苏省医学分子技术重点实验室.江苏南京210093 

出 版 物：《上海口腔医学》 (Shanghai Journal of Stomatology)

年 卷 期：2013年第22卷第6期

页      面：623-627页

学科分类：1003[医学-口腔医学] 1002[医学-临床医学] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81070839) 江苏省医学领军人才与创新团队项目(LJ201110) 南京市科技发展计划项目(YKK06115) 南京市医学科技发展重点项目(ZKX1030)~~ 

主　　题：牙龈卟啉单胞菌 菌毛蛋白次要组分FimCDE突变体 载体构建 

摘      要：目的:构建重组质粒pPHU281-C-Spec-E,用于敲除菌毛蛋白次要组分基因fimCDE。构建fimCDE缺陷的牙龈卟啉单胞菌,为进一步研究FimCDE在感染中的作用奠定基础。方法:厌氧罐培养牙龈卟啉单胞菌菌株ATCC33277,提取基因组DNA后,PCR扩增获得含有人工设计的酶切位点的fimC基因的上游片段及fimE的下游片段,将其克隆到自杀质粒pPHU281内,命名为pPHU281-C-E;再将抗大观霉素的抗性基因插入到C及E片段之间,最终获得重组质粒pPHU281-C-Spec-E。结果:酶切及DNA序列分析验证重组质粒pPHU281-C-Spec-E构建成功。结论:成功构建了含有牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白次要组分基因fimC上游及fimE下游片段的重组质粒pPHU281-CSpec-E,可用于构建菌毛蛋白次要组分FimCDE缺陷的的突变体。