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细胞内生物硫/H2S检测的新型荧光纳米探针构建研究

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细胞内生物硫/H2S检测的新型荧光纳米探针构建研究

作者：李娟萍湖南大学

学位级别：硕士

生命活动是各种生物活性物质参与的各种复杂化学反应的总结果。随着化学生物学和生物传感技术的发展，生物体内的生物化学反应过程逐步得到阐明，达到对生命过程和生命现象的更深层次的认识。生物活性物质具有特殊的生理功能，在生物体... 详细信息

生命活动是各种生物活性物质参与的各种复杂化学反应的总结果。随着化学生物学和生物传感技术的发展，生物体内的生物化学反应过程逐步得到阐明，达到对生命过程和生命现象的更深层次的认识。生物活性物质具有特殊的生理功能，在生物体内发挥着重要的生物学作用，而且与各种疾病和癌症的发生有着紧密联系，因此，实现生物活性物质的检测具有极其重要的意义。荧光法具有灵敏度高、选择性好、操作简单易行等显著优势。尤其突出的是荧光探针分子能够在不损伤生物组织的情况下进入细胞，与活细胞内的目标物作用，导致荧光发生变化。并可借助于荧光成像技术，实现细胞内目标物的可视化、实时监控。因此在生物活性分子检测和生物医学领域应用等方面受到了越来越多的重视。近年来，纳米技术发展迅速，纳米材料因其独特的性质而呈现出优良的光学、电学特性且具有良好的生物亲合性和生物相容性等特性，在分析检测、生物传感等方面得到广泛应用。基于生物活性小分子检测的重要意义，结合荧光法的优势以及纳米材料的独特性质，本论文的研究工作主要包括以下几个方面： (1)基于汞离子与DNA碱基胸腺嘧啶T的特异性作用及荧光团与金纳米颗粒的荧光共振能量转移特性，设计了一种新型DNA荧光纳米探针用于生物硫醇的检测。Hg首先与T碱基形成T-Hg-T结构，由于荧光团靠近纳米金表面而导致其荧光被猝灭。Hg与硫醇的结合力强于与碱基T的结合力，将Hg从T-Hg-T中竞争下来，伴随着发卡结构的打开，荧光团远离金纳米颗粒，荧光增强，从而实现生物硫醇的灵敏检测并成功地应用于细胞成像研究。 (2)基于硫化氢强亲核力且能二次进攻，结合双光子染料和石墨烯独特的光学特性，发展了一种以α,β-不饱和醛酮为识别位点的双光子荧光纳米探针用于细胞内HS的检测与成像。通过金刚烷与环糊精主客体作用将双光子探针修饰到氧化石墨烯纳米材料上。由于分子内存在双键，双光子探针的荧光低。当HS与双键发生亲核进攻后，再与邻位的迈克尔受体发生迈克尔加成反应，将双光子分子释放出来，荧光恢复。环糊精修饰的氧化石墨烯的水溶性好，细胞膜穿透能力强。本探针有望用于活体细胞和组织内HS实时监控与成像。 (3)基于金属纳米颗粒离子释放催化罗丹明酰肼探针水解反应，发展了一种新型荧光增强信号放大免疫分析方法。 IgG存在时，通过抗原-抗体之间的特异性结合，形成夹心型复合物。一抗修饰在磁性纳米颗粒上便于分离，二抗标记上CuO纳米颗粒。在酸的作用下释放出大量的Cu，导致探针分子发生水解，荧光增强，实现对IgG的灵敏检测。

关键词：纳米荧光探针纳米载体双光子生物硫醇 H2S 细胞成像

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酸奶中多肽物质的初探

食品工业科技 2007年第1期28卷 80-81页

作者：李娟萍吕嘉枥陕西科技大学生命科学与工程学院陕西咸阳712081

国外已有报道发酵乳品中也存在由乳酸菌的发酵作用而产生的多肽类物质。本文主要对酸奶中的水溶性肽类做初步的研究:6种市售酸奶各50mL,8000r/min离心20min,上清液于1000Da透析,再用聚乙二醇6000浓缩,最后Tricine-SDS-PAGE电泳。结果表... 详细信息

国外已有报道发酵乳品中也存在由乳酸菌的发酵作用而产生的多肽类物质。本文主要对酸奶中的水溶性肽类做初步的研究:6种市售酸奶各50mL,8000r/min离心20min,上清液于1000Da透析,再用聚乙二醇6000浓缩,最后Tricine-SDS-PAGE电泳。结果表明,不同菌种产生不同的多肽,且发酵条件不同产生的肽类物质也不同。

关键词：酸奶多肽

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机械制造业油漆工苯接触与健康效应的调查

工业卫生与职业病 2011年第5期37卷 296-298页

作者：李继猛朱洁李娟萍长沙市疾病预防控制中心湖南长沙410001

为了解油漆对机械制造工人健康的影响,探讨油漆作业防护重点人群与措施,对6家机械制造企业690名油漆作业工人健康进行调查分析。结果显示,接触组作业场所苯浓度为0.5~10.5 mg/m3,平均浓度为（2.0±2.3）mg/m3;甲苯浓度为1.2~1928.7 mg/... 详细信息

为了解油漆对机械制造工人健康的影响,探讨油漆作业防护重点人群与措施,对6家机械制造企业690名油漆作业工人健康进行调查分析。结果显示,接触组作业场所苯浓度为0.5~10.5 mg/m3,平均浓度为（2.0±2.3）mg/m3;甲苯浓度为1.2~1928.7 mg/m3,平均浓度为（104.7±286.9）mg/m3;二甲苯浓度为2.0~901.2 mg/m3,平均浓度为（79.5±171.6）mg/m3,工人WBC减少、沙眼、咽炎、心电图异常检出率分别为17.8%、18.4%、5.2%、23.0%,明显高于对照组（P〈0.01）,检出率随工龄增长而增加;WBC减少、沙眼检出率随甲苯浓度增加而升高（P〈0.05）。提示,机械制造业油漆工多项健康效应指标与苯接触有关,且呈剂量-效应关系。接触甲苯似乎仍可导致WBC减少,大型机械制造底漆和面漆作业工是防护重点人群,应采取管理、远距离操作及综合性工艺措施防治油漆危害。

关键词：油漆机械制造健康效应

筛查视角下上海市某中心医院结直肠镜检查结果分析

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上海预防医学 2023年第4期35卷 326-331页

作者：李娟萍刘峥杨郗浦东新区东明社区卫生服务中心上海200123 浦东新区南码头社区卫生服务中心上海200125

【目的】分析居民参与社区结直肠癌筛查情况及采用结直肠镜检查结果的差异,并探讨其原因。【方法】以2017—2020年在上海市某中心医院参加结直肠镜检查的居民为研究对象,按是否经社区筛查分组,采用t检验和χ^(2)检验比较不同年龄、性别... 详细信息

【目的】分析居民参与社区结直肠癌筛查情况及采用结直肠镜检查结果的差异,并探讨其原因。【方法】以2017—2020年在上海市某中心医院参加结直肠镜检查的居民为研究对象,按是否经社区筛查分组,采用t检验和χ^(2)检验比较不同年龄、性别、是否有结直肠癌病史、是否经社区筛查的受检者的结直肠镜检查结果(病变检出情况),并通过多因素logistic回归模型分析是否参与社区初筛与病灶检出之间的相关性。【结果】2017—2020年该院共完成结直肠镜检查6389人,检出3623例病变,病变检出率为56.71%;经社区初筛的居民413人,占结直肠镜检查总量的6.46%,病变检出243例,病变检出率为58.84%。与未参与社区筛查的居民比较,参与社区初筛的居民检出腺瘤和息肉的比例较高(χ^(2)=50.44,P<0.001);无结直肠癌病史的居民中,参与社区初筛的居民检出腺瘤和息肉的比例较高(χ^(2)=51.86,P<0.001);未参与社区初筛的居民中,有结直肠癌史的居民息肉比例较高(χ^(2)=74.33,P<0.001)。多因素logistic回归分析结果表明,是否参与社区初筛与结直肠镜全部病变检出(OR=0.905,95%CI:0.734~1.117)或结直肠癌相关病变检出(OR=1.113,95%CI:0.901~1.375)均无相关关系。【结论】医院结直肠镜检查中社区筛查居民比例较低,但经社区初筛出的无症状人群和未经社区初筛到医院检查的有症状人群有同质性,且腺瘤和息肉等癌前期病变检出率较高。提示应采取措施提高居民结直肠镜应答率,从而获得更好的筛查效益。

关键词：结直肠癌社区筛查结直肠镜策略优化

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市售酸乳中乳酸菌的检测

食品科技 2009年第2期34卷 22-23,44页

作者：吕嘉枥肖平李娟萍陕西科技大学生命科学与工程学院西安710021

根据不同乳酸菌发酵酸乳时产生的活性多肽有差异,采用Tricine-SDS-PAGE对酸乳中多肽物质进行测定、分析与比较,找出活性多肽的特异性,从而鉴定酸乳中含有的乳酸菌种类,并用该法对6种市售酸乳中所含乳酸菌进行鉴定。结果表明:6种市售酸... 详细信息

根据不同乳酸菌发酵酸乳时产生的活性多肽有差异,采用Tricine-SDS-PAGE对酸乳中多肽物质进行测定、分析与比较,找出活性多肽的特异性,从而鉴定酸乳中含有的乳酸菌种类,并用该法对6种市售酸乳中所含乳酸菌进行鉴定。结果表明:6种市售酸乳中活性多肽的Tricine-SDS-PAGE图谱在保加利亚乳杆菌和嗜热乳链球菌的特征谱带处均有谱带,即该6种市售酸乳中均含有保加利亚乳杆菌和嗜热乳链球菌,与其配料中所添加菌种一致。

关键词：酸乳乳酸菌检测电泳

Affinity and fluorescent detection of surfactants/ssDNA and single-walled carbon nanotube

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Transactions of Nonferrous Metals Society of China 2013年第2期23卷 456-461页

作者：周姣李娟萍聂钰洪李继山杨金凤湖南大学化学化工学院化学生物传感与计量学国家重点实验室长沙410082 中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院麻醉科长沙410013

A new biosensor platform was explored for detection of surfactant based on fluorescence changes from single strand DNA （ssDNA） and single-walled carbon nanotubes （SWNTs）. Thermodynamics assay was performed to value the stability of probe. The affinities of SWNT to five common surfactants （SDS, DBS, Triton X-100, Tween-20 and Tween-80） were investigated by real-time fluorescence method. The effects of Mg^2＋ and pH on the fluorescence intensity of self-assembled quenched sensor were performed. The fluorescent emission spectra were used to measure the responses of self-assembled quenched fluorescent of ssDNA/SWNTs to different concentration surfactant（Triton X-100）. The FAM-DNA wrapped SWNTs probe was stable in a wide temperature range （5 ℃ to 80℃）. The binding strength of surfactants and single-stranded DNA （ssDNA） on SWNTs surfaces was shown as follows： Triton X-100〉DBS〉Tween-20〉Tween-80〉ssDNA〉SDS, and the optimized reaction conditions included pH 7.4 and 10 mmol/L Mg2＋. The fluorescence of FAM-ssDNA wrapped SWNTs was proportionally recovered as a result of adding different concentrations of Triton X- 100, which realizes the quantitative detection of Triton X- 100.

关键词： single-stranded DNA single-walled carbon nanotubes surfactant fluorescent sensor affinity