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小米蛋白提取方法比较研究

食品工业 2009年第3期30卷 30-31页

作者：刘剑利曹向宇李其久辽宁大学生命科学院沈阳110036

利用碱法和盐法分别从小米中提取蛋白质,采用微量凯氏定氮法测定总蛋白含量,考马斯亮蓝G250测定可溶蛋白含量。以提取率为指标,通过正交试验优化提取工艺条件,结果表明:碱法优于盐法,是提取小米蛋白的较好方法,最佳提取条件为pH 10、温... 详细信息

利用碱法和盐法分别从小米中提取蛋白质,采用微量凯氏定氮法测定总蛋白含量,考马斯亮蓝G250测定可溶蛋白含量。以提取率为指标,通过正交试验优化提取工艺条件,结果表明:碱法优于盐法,是提取小米蛋白的较好方法,最佳提取条件为pH 10、温度30℃、时间3 h、料液比1∶8。蛋白质的提取率可达38.79%。

关键词：小米蛋白含量提取方法

果蝇硒蛋白D-SelK原核表达及多克隆抗体制备

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第8期28卷 844-846,850页

作者：李其久崔剑孟宪军陈长兰贲松彬沈阳农业大学食品学院辽宁沈阳110161 辽宁大学生命科学院辽宁大学药学院辽宁沈阳110036

目的:克隆编码果蝇硒蛋白D-SelK结构基因并在大肠杆菌中表达,纯化后制备兔抗D-SelK的抗体。方法:利用PCR从pGM-T-D-SelK质粒中扩增D-SelK基因,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-D-SelK,以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG诱... 详细信息

目的:克隆编码果蝇硒蛋白D-SelK结构基因并在大肠杆菌中表达,纯化后制备兔抗D-SelK的抗体。方法:利用PCR从pGM-T-D-SelK质粒中扩增D-SelK基因,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-D-SelK,以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,通过变性、电泳纯化D-SelK蛋白,SDS-PAGE和Westem blot方法鉴定目的蛋白的表达;以表达的D-SelK蛋白免疫家兔,制备抗D-SelK的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定。结果:扩增了D-SelK基因,克隆于表达载体pGEX-6p-1中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确。经诱导在大肠杆菌中表达出目的蛋白,纯化后免疫家兔,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达到1∶51 200以上,且具有良好的特异性。结论:已成功构建D-SelK基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;制备出兔抗D-SelK抗体,效价及特异性均良好,这为进一步研究功能特异性的D-SelK提供了有效的手段。

关键词：果蝇硒蛋白 D-SelK 原核表达多克隆抗体

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苦瓜水提取物对诱变剂致突变拮抗作用

中国公共卫生 2009年第6期25卷 658-659页

作者：曹向宇曾猛刘剑利李其久常浩辽宁大学生命科学院生物化学教研室沈阳110036 天津市环境保护研究院沈阳三生制药有限责任公司

目的探讨苦瓜水提取物的抗突变作用。方法应用彗星实验及Ames实验对苦瓜水提取物进行抗突变研究。结果彗星试验2.5,5.0,10.0g/(***)3个剂量组与阳性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),减少环磷酰胺(CP)引起的细胞DNA损伤;Ames试验500... 详细信息

目的探讨苦瓜水提取物的抗突变作用。方法应用彗星实验及Ames实验对苦瓜水提取物进行抗突变研究。结果彗星试验2.5,5.0,10.0g/(***)3个剂量组与阳性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),减少环磷酰胺(CP)引起的细胞DNA损伤;Ames试验5000,1667,556μg/皿3个剂量组在+/-S9的条件下,均能不同程度地抑制二氨基芴(2-AF)、敌克松(Dexon)引起的TA98、TA100回变菌落数的增加。结论在本实验条件下,苦瓜水提取物具有明显的抗突变作用。

关键词：苦瓜水提取物抗突变作用彗星实验 Ames实验

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小米多肽对小鼠免疫调节作用

中国公共卫生 2012年第1期28卷 44-45页

作者：刘剑利曹向宇李其久候潇辽宁大学生命科学院生物化学教研室辽宁沈阳110036

目的研究小米多肽对小鼠的免疫调节作用。方法小米多肽分为高、中、低剂量组,分别为250、500、1 000 mg/(kg.d)喂饲小鼠30 d,通过淋巴细胞转化试验、半数溶血值(HC50)、腹腔巨噬细胞吞噬功能、免疫器官指数的测定,研究小米多肽对小鼠免... 详细信息

目的研究小米多肽对小鼠的免疫调节作用。方法小米多肽分为高、中、低剂量组,分别为250、500、1 000 mg/(kg.d)喂饲小鼠30 d,通过淋巴细胞转化试验、半数溶血值(HC50)、腹腔巨噬细胞吞噬功能、免疫器官指数的测定,研究小米多肽对小鼠免疫调节作用。结果不同剂量的小米多肽有明显的刺激淋巴细胞转化作用;500、1 000 mg/(kg.d)小米多肽剂量组HC50分别为(171.33±8.77)、(175.91±9.22),吞噬率分别为(59.45±5.16)%、(65.7±4.31)%;吞噬指数分别为(0.83±0.11)、(0.88±0.09),与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),脾脏指数和胸腺指数均明显增加(P<0.01)。结论小米多肽具有明显的免疫调节作用。

关键词：小米多肽免疫调节小鼠

稠李花色苷酶法制备及对H_2O_2诱导大鼠胰岛素瘤细胞损伤的保护作用

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食品科学 2016年第6期37卷 7-12页

作者：刘晓曹向宇李其久孙宇航杨思敏于慧王纬宇刘剑利辽宁大学生命科学院辽宁沈阳110036

目的:探究纤维素酶酶法制备稠李花色苷的最佳条件,并研究制备的稠李花色苷对H_2O_2诱导的大鼠胰岛素瘤(Ins-1)细胞损伤的保护作用。方法:通过单因素试验和正交试验,优化得到酶法制备稠李花色苷的最佳条件;稠李花色苷处理大鼠Ins-1细胞,... 详细信息

目的:探究纤维素酶酶法制备稠李花色苷的最佳条件,并研究制备的稠李花色苷对H_2O_2诱导的大鼠胰岛素瘤(Ins-1)细胞损伤的保护作用。方法:通过单因素试验和正交试验,优化得到酶法制备稠李花色苷的最佳条件;稠李花色苷处理大鼠Ins-1细胞,进行形态学观察、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]细胞活力实验、2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichloro dihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧实验研究稠李花色苷对H_2O_2诱导损伤的Ins-1细胞保护作用。结果:纤维素酶法提取稠李花色苷的最佳条件为:温度60℃、纤维素酶添加量9 mg/g、料液比1∶35(g/m L)、p H 3.5,此条件下稠李花色苷得率为(0.956±0.027)mg/g;形态学观察及MTT细胞活力实验显示,稠李花色苷对H_2O_2诱导损伤的Ins-1细胞具有较强的保护作用,DCFH-DA法检测细胞内活性氧实验说明,稠李花色苷能够显著地清除Ins-1细胞内的活性氧。结论:纤维素酶法制备稠李花色苷是一种有效的方法,制备的稠李花色苷对H_2O_2诱导的大鼠Ins-1细胞损伤具有较强的保护作用。

关键词：花色苷酶法氧化损伤保护大鼠胰岛素瘤(Ins-1)细胞

人工巢箱条件下杂色山雀的巢位选择及其对繁殖成功率的影响

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生态学报 2011年第24期31卷 7492-7499页

作者：李乐万冬梅刘鹤殷江霞李其久霍雅鹏辽宁大学生命科学院辽宁省动物资源与疫病防治重点实验室沈阳110036

杂色山雀(Parus varius)是一种分布区域极其狭窄的小型森林洞巢鸟类,种群数量稀少,在中国大陆仅见繁殖于辽宁省的东南部山区和毗邻辽宁的吉林省西南部山区,为当地留鸟。为了探讨巢址选择对杂色山雀繁殖的影响,找出影响杂色山雀繁殖成功... 详细信息

杂色山雀(Parus varius)是一种分布区域极其狭窄的小型森林洞巢鸟类,种群数量稀少,在中国大陆仅见繁殖于辽宁省的东南部山区和毗邻辽宁的吉林省西南部山区,为当地留鸟。为了探讨巢址选择对杂色山雀繁殖的影响,找出影响杂色山雀繁殖成功率的巢址选择方面的主要因子,于2009—2011年3—7月,在辽宁省仙人洞国家级自然保护区通过悬挂人工巢箱,进行杂色山雀对人工巢箱的巢址选择以及不同的巢址对杂色山雀繁殖成功率的影响研究。研究表明:杂色山雀多在针阔混交林中活动和繁殖,对位于赤松与蒙古栎混交林中的巢箱有一定偏好。野外共发现24巢杂色山雀在人工巢箱中繁殖,其中15巢繁殖成功,9巢繁殖失败。对杂色山雀利用的巢址样方主成分分析表明,巢位因子(19.826%)、乔木因子(17.571%)、灌木因子(13.11%)、光照因子(11.587%)、隐蔽因子(10.562%)和边缘效应因子(7.572%)是影响杂色山雀对人工巢箱选择的重要因子。利用巢箱与对照巢箱相比,两者在距水源距离、距路距离、乔木平均高度、灌木平均高度和植被类型这5个环境变量上存在显著差异。繁殖成功巢与繁殖失败巢相比,繁殖成功的巢箱所在位置距路稍远,坡度较高,乔木最大高度较高,灌木盖度略低于繁殖失败巢箱。人为干扰和天敌捕食是造成杂色山雀繁殖失败的主要原因。以上研究结果表明,巢向偏南、距地面2 m以上、周围乔木高大、灌木平均高度大于1.5 m、盖度在45%—55%之间、距水源20 m左右、距路20 m以外的位于针阔混交林边缘的巢箱是杂色山雀繁殖的最优巢址。目前杂色山雀的种群数量还很稀少,希望本研究能对这一珍稀鸟类的保护提供重要参考。

关键词：杂色山雀巢址选择人工巢箱主成分分析

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小米多肽对小鼠抗疲劳作用

中国公共卫生 2011年第9期27卷 1153-1154页

作者：曹向宇朱昱刘剑利芦秀丽李其久辽宁大学生命科学院生物化学教研室辽宁沈阳110036 沈阳军区第202医院药剂科

目的研究小米多肽对小鼠的抗疲劳作用。方法小米多肽分为0.2、0.4、0.8 g/(kg.d)高、中、低剂量组,喂饲小鼠30 d,观察小鼠负重游泳时间,测定肝糖原和血清尿素氮含量。结果 0.4、0.8 g/(kg.d)小米多肽剂量组小鼠负重游泳时间与阴性对照... 详细信息

目的研究小米多肽对小鼠的抗疲劳作用。方法小米多肽分为0.2、0.4、0.8 g/(kg.d)高、中、低剂量组,喂饲小鼠30 d,观察小鼠负重游泳时间,测定肝糖原和血清尿素氮含量。结果 0.4、0.8 g/(kg.d)小米多肽剂量组小鼠负重游泳时间与阴性对照组比较分别增加4.45和10.51 min(P<0.01),小鼠运动过程中肝糖原含量分别为(9.83±0.10),(10.15±0.21)mg/g,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),血清尿素氮的含量明显减少(P<0.01)。结论小米多肽对小鼠有明显的抗疲劳作用。

关键词：小米多肽抗疲劳小鼠

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杂色山雀繁殖期与非繁殖期食物组成及利用

动物学杂志 2014年第6期49卷 811-819页

作者：蔡玥李东来李其久万冬梅辽宁大学生命科学院辽宁省动物资源与疾病防治重点实验室沈阳110036

食物是动物能量和营养的来源,而可利用的食物资源是赖以生存的基础。研究鸟类不同时期的食物选择和利用对于了解该物种取食行为的可塑性和生态适应性将具有重要意义。本文于2012年4月至2013年10月,通过取食行为观察、育雏分析和投食实... 详细信息

食物是动物能量和营养的来源,而可利用的食物资源是赖以生存的基础。研究鸟类不同时期的食物选择和利用对于了解该物种取食行为的可塑性和生态适应性将具有重要意义。本文于2012年4月至2013年10月,通过取食行为观察、育雏分析和投食实验来研究杂色山雀（Parus varius）繁殖期与非繁殖的食物组成及利用的差别。整个研究中观察距离一般在0.5~5.0 m之间,同时辅助于一些食物残骸进行鉴定,动物性食物鉴定到目。研究结果表明,杂色山雀繁殖期与非繁殖期取食的食物存在显著差别。（1）繁殖期完全取食动物性食物,成鸟取食和育雏的食物存在较大的区别,成鸟取食的食物主要为鳞翅目（42.31%）、蜘蛛目（27.56%）、鞘翅目、双翅目以及少量的直翅目、半翅目和膜翅目动物;育雏的食物主要为鳞翅目幼虫（67.86%）,其次为蜘蛛（11.83%）、鳞翅目成虫、膜翅目幼虫、鞘翅目幼虫和少量直翅目昆虫;（2）非繁殖期自然状态下主要取食植物性食物,兼食少量昆虫,杂色山雀对于浆果（22.12%）的利用率要高于植物种子（21.17%）;（3）非繁殖期对于人为提供的16种潜在食物资源的取食选择也证明杂色山雀对浆果类食物具有较明显的偏爱。杂色山雀不同时期的食物组成存在一定的差异性,而这种食性的可塑性很大程度取决于食物供给和能量需求的季节性变化。

关键词：杂色山雀食物利用繁殖期非繁殖期

基因PimM在金褐链霉菌SYAU0709中的表达

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食品科学 2009年第15期30卷 193-195页

作者：魏杰孟宪军李其久邹志远李辉辽宁大学生命科学院辽宁沈阳110036 沈阳农业大学食品学院辽宁沈阳110161

将纳他霉素生物合成基因簇中的基因PimM置于PermE之下进行整合性表达,克隆至大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒载体pSET152中,构建表达载体PBJPIM,将PBJPIM接合、转移、转化金褐霉素产生菌——金褐链霉菌SYAU0709,通过摇瓶发酵和HPLC检测分析发现... 详细信息

将纳他霉素生物合成基因簇中的基因PimM置于PermE之下进行整合性表达,克隆至大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒载体pSET152中,构建表达载体PBJPIM,将PBJPIM接合、转移、转化金褐霉素产生菌——金褐链霉菌SYAU0709,通过摇瓶发酵和HPLC检测分析发现,有些转化子的金褐霉素产量比野生型菌株提高3～4倍,说明PimM基因在金褐链霉菌中有促进金褐霉素合成的作用,并且遗传性能稳定。

关键词：金褐链霉菌金褐霉素 PimM基因