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小麦叶片温度遗传规律以及与叶片结构相关性的研究

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小麦叶片温度遗传规律以及与叶片结构相关性的研究

作者：李京敬西北农林科技大学

学位级别：硕士

为探求导致小麦品种冠层温度多态性的叶片结构差异,通过冷型品种（RB6和小偃6号）和暖型品种（9430和NR9405）的杂交,构建了两个F2代群体。研究了F2代小麦个体旗叶温度（FLT）的分布特征,并估计了旗叶温度的遗传力。分析了FLT和多个旗... 详细信息

为探求导致小麦品种冠层温度多态性的叶片结构差异,通过冷型品种（RB6和小偃6号）和暖型品种（9430和NR9405）的杂交,构建了两个F2代群体。研究了F2代小麦个体旗叶温度（FLT）的分布特征,并估计了旗叶温度的遗传力。分析了FLT和多个旗叶叶片结构（叶片厚度、维管束横截面积、维管束间距）的相关性,以及FLT和不同生长阶段主茎绿叶数（NGL）的相关性。并且研究了FLT、NGL对个体百粒重的影响。结果证明FLT在两群体中均呈连续分布,具有较高的广义遗传力。FLT与叶片厚度、维管束横截面积紧密相关,与维管束直径相关性不显著。个体百粒重明显受FLT和生殖生长后期NGL的影响。为了提高RAPD分析中10bp primer的效率,本研究首次对RAPD实验中引物结合位点数与扩增条带数的分布特征做出理论上的阐述。并利用现有的模式生物序列,设计程序模拟了生物染色体组RAPD-PCR过程。首先,证明了生物序列对RAPD引物存在偏好性,并且不同物种对引物的偏好性不存在显著的相关性。其次,推导出引物扩增条带数与结合位点数的回归方程,并通过计算机模拟证明了这一方程的正确性。最后从理论上证明了利用生物序列信息进行引物筛选可以大幅度提高工作效率。最后摸索了小麦RAPD-PCR的条件,为进一步分子标记筛选,基因定位以及相关基因的克隆奠定了基础。

关键词：冷型小麦冠层温度旗叶 RAPD 引物筛选

酵母双杂交报告基因β-半乳糖苷酶活性测定方法的研究

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上海交通大学学报（医学版） 2009年第2期29卷 236-240页

作者：郜尽王海侠李京敬俞雁上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 安徽科技学院理学院凤阳233100

目的建立标准的酵母双杂交系统报告基因表达的β-半乳糖苷酶活性测定方法。方法采用o-硝基-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物,以液氮反复冻融破碎酵母细胞壁,通过比较不同测定时间、接种阳性克隆数目、转化方法以及酵母株对β-半乳糖苷酶酶活... 详细信息

目的建立标准的酵母双杂交系统报告基因表达的β-半乳糖苷酶活性测定方法。方法采用o-硝基-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物,以液氮反复冻融破碎酵母细胞壁,通过比较不同测定时间、接种阳性克隆数目、转化方法以及酵母株对β-半乳糖苷酶酶活的影响,确定最佳酶活测定条件。结果相同条件下,单个克隆之间的酶活有差异,相对标准偏差(RSD)>8%;相同条件下,Y187酵母株比AH109酵母株酶活高18～20倍,并且本底水平很低甚至没有;双倍体酵母的酶活介于两个单倍体酵母之间,同预计一致;质粒顺序转化与共转化在AH109中差异有统计学意义(P0.05)。结论测定酵母双杂交报告基因β-半乳糖苷酶的活性宜采用Y187酵母株,酶活变化范围大,本底小,受转化方法影响小,测定时选取5个以上阳性克隆混合培养更有利于酶活的准确测定。

关键词：酵母双杂交 β-半乳糖苷酶蛋白互作酶活测定

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人CXCL4蛋白原核表达与纯化

中国生物工程杂志 2016年第1期36卷 7-13页

作者：周亮叶浩周瓅关文李京敬郜尽韩伟俞雁上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 上海交通大学药学院再生组学课题组上海200240

CXCL4又名血小板因子4(PF4),属于CXC趋化因子亚家族,能够广谱的作用于多种细胞,在炎症,凝血等众多生理及病理反应中发挥重要作用。将CXCL4全长基因构建到原核表达载体p ET43.1a(+),利用大肠杆菌系统表达,继而纯化获得高纯度的目的蛋白... 详细信息

CXCL4又名血小板因子4(PF4),属于CXC趋化因子亚家族,能够广谱的作用于多种细胞,在炎症,凝血等众多生理及病理反应中发挥重要作用。将CXCL4全长基因构建到原核表达载体p ET43.1a(+),利用大肠杆菌系统表达,继而纯化获得高纯度的目的蛋白。实验表明重组人CXCL4蛋白可以有效抑制人肾癌细胞增殖,具有生物学活性。重组人CXCL4原核表达与纯化方法的建立将有助于其生物学结构与功能的研究,并且对趋化因子家族其它蛋白质的表达与纯化具有参考价值。

关键词： CXCL4 原核表达纯化蛋白质活性

S100A4原核表达载体的构建以及蛋白的表达和纯化

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基因组学与应用生物学 2013年第2期32卷 142-148页

作者：韩雷何虹霖关文李京敬袁运生俞雁上海交通大学农业与生物学院上海200240

S100A4是S100蛋白家族的成员,在细胞的增殖、分化、损伤修复以及肿瘤细胞转移等方面发挥重要的调控作用。本研究将S100A4全长基因构建到pET28a原核表达载体上,利用大肠杆菌表达系统表达和纯化出高纯度的重组人S100A4。通过试验证明,重组... 详细信息

S100A4是S100蛋白家族的成员,在细胞的增殖、分化、损伤修复以及肿瘤细胞转移等方面发挥重要的调控作用。本研究将S100A4全长基因构建到pET28a原核表达载体上,利用大肠杆菌表达系统表达和纯化出高纯度的重组人S100A4。通过试验证明,重组人S100A4蛋白在体外可以有效地增强黑色素瘤细胞A375-S2的增殖。重组人S100A4原核表达与纯化方法的建立将促进其结构和生物学功能研究,并且对于S100蛋白家族其它蛋白的表达与纯化具有重要的参考意义。

关键词： S100A4 原核表达蛋白纯化蛋白活性

冷暖型小麦基因差异的最佳RAPD反应体系研究

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安徽农业科学 2006年第13期34卷 2993-2995页

作者：裴国亮李京敬王长发陶士珩西北农林科技大学生物信息中心陕西杨凌712100

为了建立小麦RAPD反应的最佳体系,保证反应结果的稳定性和可靠性,寻找小麦冷暖型基因差异,降低试验成本,在相同PCR扩增程序(94℃预变性5 min,94℃变性45 s,38℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,40个循环,72℃延伸10 min,4℃保存)下,对冷暖型... 详细信息

为了建立小麦RAPD反应的最佳体系,保证反应结果的稳定性和可靠性,寻找小麦冷暖型基因差异,降低试验成本,在相同PCR扩增程序(94℃预变性5 min,94℃变性45 s,38℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,40个循环,72℃延伸10 min,4℃保存)下,对冷暖型小麦基因组DNA的RAPD扩增体系各参数进行比较筛选,创建其最佳反应体系为:25μl反应体系中,模板DNA 20 ng,10×PCR缓冲液2.5μl,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq酶1 U,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,ddH2O 12μl,随机引物10 ng。

关键词：冷型小麦 RAPD反应体系稳定性可靠性

Matrix蛋白和G蛋白双位点突变型水泡性口炎病毒的构建及生物学活性观察

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畜牧兽医学报 2011年第6期42卷 823-829页

作者：方心葵李京敬王欣孙涛上海交通大学农业与生物学院上海200240 上海市兽医生物技术重点实验室上海200240

重组水泡性口炎病毒(Vesiclar stomatitis virs,VSV)是一种具有良好应用前景的病毒载体,可应用于制备疫苗和治疗肿瘤,但该载体仍存在安全性问题,高剂量注射实验动物可导致产生神经毒性。为减低乃至去除野生型VSV的致病性,作者针对VSV毒... 详细信息

重组水泡性口炎病毒(Vesiclar stomatitis virs,VSV)是一种具有良好应用前景的病毒载体,可应用于制备疫苗和治疗肿瘤,但该载体仍存在安全性问题,高剂量注射实验动物可导致产生神经毒性。为减低乃至去除野生型VSV的致病性,作者针对VSV毒力因子,构建了Matrix蛋白和G蛋白双位点突变型重组VSV,该病毒敲除了原来Matrix蛋白的第51位精氨酸和G蛋白C末端的28个氨基酸。相比野生型VSV,新病毒的致病性显著降低。试验也证实这个致弱的病毒是由于2种不同弱化机理共同作用所致,即I型干扰素作用和复制能力减低。新型VSV病毒载体有希望成为一个更安全、有效的疫苗载体。

关键词：水泡性口炎病毒病毒载体致病性

小鼠S100A3蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备

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基因组学与应用生物学 2015年第8期34卷 1705-1711页

作者：关文李京敬邓晴余晓岚郜尽周亮夏鹏韩伟俞雁上海交通大学农业与生物学院上海200240 上海交通大学药学院上海200240

富含半胱氨酸的S100A3是S100蛋白家族成员,其表达具有组织和细胞特异性。本研究利用基因克隆技术将小鼠S100A3克隆到原核表达载体p ET28a(+)上,经过原核表达纯化获得了高纯度的目的蛋白,制备了高效价的兔多克隆抗体。重组小鼠S100A3蛋... 详细信息

富含半胱氨酸的S100A3是S100蛋白家族成员,其表达具有组织和细胞特异性。本研究利用基因克隆技术将小鼠S100A3克隆到原核表达载体p ET28a(+)上,经过原核表达纯化获得了高纯度的目的蛋白,制备了高效价的兔多克隆抗体。重组小鼠S100A3蛋白原核表达和纯化方法的建立及多克隆抗体的制备为其生物学功能研究提供了材料,并对其它S100蛋白家族的表达纯化具有一定的参考意义。

关键词： S100A3 蛋白表达纯化多克隆抗体

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细胞因子与膜受体蛋白相互作用的研究方法

生命的化学 2011年第2期31卷 303-308页

作者：李京敬毕引歌朱润芝兰天俞雁上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 上海交通大学药学院上海200240

细胞因子与膜受体的相互作用是生命活动中的重要环节。癌症、自身免疫疾病、代谢紊乱等疾病的发生都和细胞因子失调有着密切的关系,研究细胞因子和受体的相互作用成为治疗上述疾病的基石。本文综述了现今常用的研究方法,包括从最经典的... 详细信息

细胞因子与膜受体的相互作用是生命活动中的重要环节。癌症、自身免疫疾病、代谢紊乱等疾病的发生都和细胞因子失调有着密切的关系,研究细胞因子和受体的相互作用成为治疗上述疾病的基石。本文综述了现今常用的研究方法,包括从最经典的同位素标记直接检测受体与配体的结合,到生化通路下游信号检测,再到生物物理高通量检测方法。

关键词：细胞因子受体蛋白相互作用

重组人Midkine真核表达载体的构建以及蛋白表达和纯化

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基因组学与应用生物学 2014年第2期33卷 228-233页

作者：徐杨琪李京敬关文郜尽贾世香屠平韩伟俞雁上海交通大学农业与生物学院上海200240 上海交通大学药学院上海200240 交晨生物医药技术(上海)有限公司上海200240

Midkine(MK)是一种肝素结合型生长因子,在胚胎早期的分化发育、肿瘤、炎症、再生等方面发挥着重要的调控作用。本研究将人MK(hMK)全长基因构建到pPICZa(B)表达载体上,通过化学转染方法,转染质粒至不同酵母菌株中进行筛选,利用毕赤酵母... 详细信息

Midkine(MK)是一种肝素结合型生长因子,在胚胎早期的分化发育、肿瘤、炎症、再生等方面发挥着重要的调控作用。本研究将人MK(hMK)全长基因构建到pPICZa(B)表达载体上,通过化学转染方法,转染质粒至不同酵母菌株中进行筛选,利用毕赤酵母的高密度发酵进行表达,纯化出高纯度的重组人Midkine(rhMK),并通过试验证明,纯化的rhMK具有趋化UMR106细胞的活性。rhMK的真核表达与纯化方法的建立为后续的药效学试验奠定了基础,并对其它蛋白的真核表达、纯化也有一定的参考意义。

关键词：中期因子毕赤酵母发酵离子交换层析高效液相色谱