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CX43蛋白磷酸化在大鼠逼尿肌过度活动症中的作用

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CX43蛋白磷酸化在大鼠逼尿肌过度活动症中的作用

作者：朱景振第三军医大学

学位级别：硕士

目的:逼尿肌过度活动症(DO)是一种常见的临床疾病,其膀胱兴奋性通常高于正常膀胱。DO的主要症状是:尿急、尿频、伴有或者不伴有尿失禁。DO的发病机制仍不清楚,且治疗困难。膀胱出口部分梗阻(PBOO)是DO的主要病因,其机制可能涉及到神经... 详细信息

目的:逼尿肌过度活动症(DO)是一种常见的临床疾病,其膀胱兴奋性通常高于正常膀胱。DO的主要症状是:尿急、尿频、伴有或者不伴有尿失禁。DO的发病机制仍不清楚,且治疗困难。膀胱出口部分梗阻(PBOO)是DO的主要病因,其机制可能涉及到神经源性和肌源性的因素。最近一些研究表明,细胞间通讯的改变被认为是DO发病的机制之一,CX43蛋白可能在DO的发病过程中发挥着关键作用。与正常组相比较,DO组的细胞间通讯的功能(Gap junction intercellular communication,GJIC)和CX43蛋白的表达都明显增加。CX43蛋白是一种磷蛋白,其磷酸化的状态会影响细胞间通讯功能。但是CX43蛋白的磷酸化在DO的发病过程中的作用仍然不清楚。在我们的试验中,我们通过建立DO模型来评价CX43蛋白的磷酸化在大鼠DO中的作用,并且初步探索蛋白磷酸酶1(PP1)和蛋白磷酸酶2A(PP2A)在CX43蛋白磷酸化中的作用。方法:1.建立DO模型:实验动物为60只雌性大鼠(150克-180克)。大鼠采用腹腔注射戊巴比妥钠(2%)进行麻醉,其中40只进行膀胱出口梗阻的手术。6周后,通过尿动力学评估筛选合格的大鼠纳入到DO组。假手术组的大鼠被纳入到正常组。*** bloting:提取蛋白。然后蛋白(50ug)通过SDS-PAGE凝胶电泳分离并转移到纤维素膜上。用5%的BSA对膜进行封闭。孵育CX43多克隆抗体、PP1抗体、PP2抗体和β-actin的一抗。然后孵育结合有辣根过氧化酶的二抗。通过ChemiDoc XRS+Image系统显示标记过的蛋白。3.免疫荧光双染:将膀胱组织做冰冻切片,切好的组织粘附在防脱片载玻片上,4%的多聚甲醛(PH 7.4)固定30分钟。组织切片用1%胎牛血清白蛋白在室温情况下封闭2小时,然后4°C孵育CX43单克隆抗体、CX43多克隆抗体、PP1抗体和PP2A抗体12小时。PBS清洗后,室温下孵育结合有异硫氰酸四甲基罗丹明(Tetramethylrhodamine isothiocyanate,TRITC)和异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)的二抗1小时。PBS清洗切片。然后用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)室温下染核10分钟。最后组织切片用激光共聚焦显微镜检测。4.分离原代膀胱平滑肌细胞:将取出的膀胱放入37°C的消化酶(5ml)中,剪成约1毫米的碎块。消化酶的成分为:2.0mg/ml的胶原酶Ⅱ、2.0mg/ml的BSA,2.0mg/ml的胰酶抑制剂。碎块消化约35分钟,然后用含10%胎牛血清的培养基终止消化。离心5分钟(1200转/分钟),弃上清。加入含DMEM、10%胎牛血清和1%链霉素-青霉素的培养基。滴管吹打约300次.200目筛子(0.22um)过滤细胞,然后将滤液转入小培养皿中。细胞放入孵箱(37°C,95%O2和5%CO2)中培养。5.荧光漂白恢复实验(Fluorescent bleaching recovery experiments,FRAP):将贴壁好的细胞用PBS清洗一遍,然后把含有6-羧基二乙酸荧光素(6-Carboxyfluorescein diacetate,6-CFDA;10U/ml)的培养基加入到小皿中对细胞进行染色。孵箱中染色30分钟,而后PBS清洗三次。正常组和DO组加入正常的培养基,DO+AP组加入含碱性磷酸酶(AP)的培养基。选择合适的细胞进行淬灭。实时记录漂白前和漂白后5分钟的影像图片。结果:1.成功的建立了DO模型。共23只大鼠被纳入到了DO组;2.与正常组相比较,CX43蛋白的各个亚基的表达均明显增加,PP2A的表达降低,PP1的表达没有明显变化;***组细胞间通讯的功能明显强于正常组,DO+AP组的细胞间通讯的功能明显低于正常组和DO组。结论:***43蛋白磷酸化水平的增加在DO的发病过程中发挥着重要的作用;2.这种CX43蛋白的磷酸化水平的增加可能与PP2A表达的降低有关。

关键词： CX43 磷酸化逼尿肌过度活动蛋白磷酸酶1 蛋白磷酸酶2A

UGT2B15基因D85Y多态性和前列腺癌关系的Meta分析

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第三军医大学学报 2013年第24期35卷 2686-2691页

作者：朱景振董宗明李龙坤刘骞孙碧韶宋波第三军医大学西南医院:全军泌尿外科研究所重庆400038 第三军医大学西南医院:全军普通外科中心重庆400038 第三军医大学新桥医院泌尿外科重庆400037

目的评价UGT2B15基因D85Y(D85 to Y85)多态性和前列腺癌之间的相关性。方法通过检索Pubmed、Embase、CBM数据库,对符合纳入标准的文章,使用优势比(ORs)和95%的可信区间(95%CI)进行相关性评价。采用Begg检验和Egger检验对各项研究的发表... 详细信息

目的评价UGT2B15基因D85Y(D85 to Y85)多态性和前列腺癌之间的相关性。方法通过检索Pubmed、Embase、CBM数据库,对符合纳入标准的文章,使用优势比(ORs)和95%的可信区间(95%CI)进行相关性评价。采用Begg检验和Egger检验对各项研究的发表偏倚进行分析。结果 Meta分析中共纳入6篇文章(病例组817例,对照组1 000例),检测显示UGT2B15基因D85Y多态性和前列腺癌具有显著的相关性(Additive模型:OR=0.72,95%CI=0.58-0.89;Dominant模型:OR=0.53,95%CI=0.35-0.81;Recessive模型:OR=0.77,95%CI=0.61-0.98;YY vs DD基因型:OR=0.53,95%CI=0.32-0.88;YD vs DD基因型:OR=0.55,95%CI=0.35-0.86)。结论 UGT2B15基因Y85可能是前列腺癌的保护因素。

关键词：葡糖醛酸转移酶2家族B15基因 UGT2B15 前列腺癌单核苷酸多态. Meta分析

二甲基亚砜通过降低炎症和氧化应激改善鱼精蛋白诱导的大鼠膀胱炎

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第三军医大学学报 2015年第6期37卷 505-509页

作者：林斌董兴有赵江王亮龙州朱景振丁国林李龙坤第三军医大学新桥医院泌尿外科重庆400037

目的探讨二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对鱼精蛋白(protamine sulfate,PS)诱导的大鼠间质性膀胱炎(interstitial cystitis,IC)治疗作用。方法 SD雌性大鼠48只,按随机数字表法分为正常组、PS灌注组、PS+DMSO组、盐水灌注组(NS组),每组12只大鼠。正常组大鼠未给予任何处理;PS组用0.5 m L,30 mg/m L的PS膀胱内灌注并在膀胱内保留30 min;PS+DMSO组使用50%DMSO溶解PS,按照0.5 m L,30 mg/m L的PS膀胱内灌注并在膀胱内保留30 min;NS组用0.5 m L生理盐水膀胱灌注并保留30 min,各组大鼠每周处理1次,连续处理4周。4周后,HE和甲苯胺蓝染色用于病理学评分和肥大细胞计数;尿动力学和肌条实验被用于评价大鼠膀胱功能和肌肉收缩性改变;Western blot检测SOD2、GSH-Px、IL-6、IL-1B、TNF-α的表达量。结果与PS组相比,PS+DMSO组大鼠膀胱病理学评分[(3.00±0.00)vs(0.83±0.40),P<0.05]、肥大细胞计数[(19.66±2.16)vs(6.16±1.16),P<0.05]以及炎症因子IL-6、IL-1B和TNF-α表达(P<0.05)显著降低,而抗氧化应激酶(SOD2和GSH)显著恢复(P<0.05);在膀胱功能学上,与PS组相比,PS+DMSO组大鼠膀胱排尿频率[(24.83±3.06)vs(9.83±1.47),P<0.05]显著降低,排尿间隔[(2.42±0.37)vs(6.40±0.57),P<0.05]显著延长,肌肉收缩频率[(6.93±0.97)vs(4.94±0.73),P<0.05]显著降低。结论 DMSO可能通过降低炎症和氧化应激改善鱼精蛋白诱导的大鼠膀胱炎。

关键词：二甲基亚砜间质性膀胱炎鱼精蛋白膀胱炎

CX43蛋白磷酸化在大鼠逼尿肌过度活动症中的作用

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第三军医大学学报 2015年第6期37卷 495-499页

作者：朱景振刘骞董兴有龙州李龙坤宋波第三军医大学西南医院全军泌尿外科重庆400038 第三军医大学新桥医院泌尿外科重庆400037

目的评价CX43蛋白磷酸化在大鼠逼尿肌过度活动症(detrusor overactivity,DO)中的作用,并初步探讨PP1和PP2A对CX43蛋白磷酸化修饰状态的影响。方法建立大鼠DO模型作为实验组,假手术组作为对照组,Western blot检测CX43蛋白磷酸化水平、PP1... 详细信息

目的评价CX43蛋白磷酸化在大鼠逼尿肌过度活动症(detrusor overactivity,DO)中的作用,并初步探讨PP1和PP2A对CX43蛋白磷酸化修饰状态的影响。方法建立大鼠DO模型作为实验组,假手术组作为对照组,Western blot检测CX43蛋白磷酸化水平、PP1及PP2A的表达变化,免疫荧光双染对CX43与PP1、PP2A的定位及表达变化进行检测,荧光漂白恢复实验(FRAP)比较正常组、DO组、DO+碱性磷酸酶(AP)组的细胞间通讯功能(gap junction intercellular communication,GJIC)的差异。结果与正常组相比,DO组膀胱中的CX43蛋白的不同磷酸化修饰状态(P0、P1、P2)的表达水平均明显升高(P0.05)。DO组的GJIC较正常组明显增加(P<0.05),DO+AP组的GJIC较正常组和DO组明显降低(P<0.05)。结论CX43蛋白的磷酸化水平上调可能在DO的发病过程中发挥着重要的作用,这种磷酸化水平的上调可能与PP2A的表达减少相关。

关键词： CX43蛋白磷酸化逼尿肌过度活动症

过表达精子相关抗原9对前列腺癌细胞PC3生物学行为的影响

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第三军医大学学报 2015年第10期37卷 1012-1016页

作者：龙洲刘骞朱景振赵江董兴有冯观贵丁国林李龙坤第三军医大学新桥医院泌尿外科重庆400037

目的研究精子相关抗原9(sperm-associated antigen 9,SPAG9)对前列腺癌细胞增殖、细胞周期、侵袭转移等生物学行为的影响,探讨可能的分子机制。方法前列腺细胞PC3中转染SPAG9后,qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞SPAG9的表达变化;CC... 详细信息

目的研究精子相关抗原9(sperm-associated antigen 9,SPAG9)对前列腺癌细胞增殖、细胞周期、侵袭转移等生物学行为的影响,探讨可能的分子机制。方法前列腺细胞PC3中转染SPAG9后,qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞SPAG9的表达变化;CCK-8检测SPAG9对PC3细胞增殖的影响;流式细胞术检测SPAG9对PC3细胞周期的作用;Transwell实验检测转染SPAG9对PC3细胞体外迁移能力的影响。结果 qRT-PCR检测结果表明SPAG9组的SPAG9的相对表达量(20.776 3±3.080 9)明显高于对照组(1.010 2±0.178 4)(P<0.01)。Western blot结果显示在前列腺癌细胞PC3中过表达SPAG9后成功。CCK-8实验表明SPAG9促进细胞增殖;流式细胞术检测结果表明过表达SPAG9使PC3细胞周期加快;在Transwell迁移实验中,SPAG9转染细胞后,SPAG9组穿膜细胞数为(88.078±4.509)/视野,对照组穿膜细胞数为(54.333±4.582)/视野,SPAG9组细胞迁移能力明显高于对照组(P<0.05)。结论 SPAG9促进前列腺癌细胞PC3的增殖、细胞周期及侵袭转移等生物学行为,并可能通过ERK和JNK信号通路发挥这些作用。

关键词： SPAG9 前列腺癌增殖细胞周期

基于LMS自适应陷波器和最小二乘的超低频正弦扫频信号幅值识别方法

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基于LMS自适应陷波器和最小二乘的超低频正弦扫频信号幅值识别方法

HCN1通道基因敲除下调小鼠膀胱Cajal间质细胞中BK通道的表达及功能

第二十七届全国振动与噪声应用学术会议

作者：朱景振蒋瑜陶俊勇国防科技大学装备综合保障技术重点实验室国防科技大学机电工程与自动化学院

针对振动台超低频(0.1

关键词：超低频正弦扫频 LMS自适应陷波器最小二乘幅值识别

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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第三军医大学学报 2015年第12期37卷 1281-1287页

作者：孙碧韶刘骞朱景振龙洲冯观贵李龙坤宋波第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038 第三军医大学新桥医院泌尿外科重庆400037

目的观察小鼠HCN1通道基因敲除对其膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)中BK通道的表达和功能的影响,探讨这种影响对膀胱兴奋性调控的意义。方法健康清洁成年的野生型C57BL/6J小鼠和HCN1通道基因敲除的C57BL/6J小鼠各4... 详细信息

目的观察小鼠HCN1通道基因敲除对其膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)中BK通道的表达和功能的影响,探讨这种影响对膀胱兴奋性调控的意义。方法健康清洁成年的野生型C57BL/6J小鼠和HCN1通道基因敲除的C57BL/6J小鼠各48只(雌雄各半)分别记为正常组和敲基因组,反转录PCR(RT-PCR)、荧光定量PCR(Q-PCR)、Western blot和免疫荧光双标检测其膀胱ICCs中BK通道各亚基的表达变化,离体逼尿肌肌条实验检测加入BK通道阻滞剂IBTX前后肌条收缩的变化,激光共聚焦显微镜下检测分别加入BK通道激动剂NS1619、阻滞剂IBTX前后小鼠膀胱ICCs内钙荧光的变化。结果 Q-PCR显示敲基因组小鼠膀胱中BK通道α、β1、β2、β3、β4各亚基表达均降低(P<0.01);Western blot显示敲基因组小鼠膀胱中BK通道α、β1、β2、β3、β4亚基表达均降低(其中α、β3、β4:P<0.01;β1、β2:P<0.05);免疫荧光双标显示敲基因组小鼠膀胱ICCs中BK通道α亚基表达降低(P<0.01);离体逼尿肌肌条实验显示加入IBTX后敲基因组和正常组肌条收缩幅度均变大(P<0.01,P<0.05),且敲基因组肌条收缩幅度的变化值小于正常组(P<0.05);激光共聚焦显微镜下可见加入NS1619后两组ICCs内钙荧光均降低(P<0.05)、加入IBTX后两组ICCs内钙荧光均增强(P<0.01),且不论加入激动剂或阻滞剂,敲基因组加药前后ICCs内钙荧光的变化值均小于正常组(P<0.01)。结论小鼠HCN1通道基因敲除下调了其膀胱ICCs中BK通道的表达及功能,这种下调可能是对HCN1通道基因敲除后膀胱收缩减弱的一种代偿。

关键词： ICCs 超极化激活环核苷酸门控阳离子通道大电导钙激活钾通道小鼠,基因敲除膀胱

单孔与传统腹腔镜治疗精索静脉曲张随机对照研究的Meta分析

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微创泌尿外科杂志 2016年第6期5卷 336-342页

作者：林斌朱景振李龙坤四川省金堂县第一人民医院泌尿外科成都610400 第三军医大学附属新桥医院泌尿外科

目的:基于随机对照试验,评价单孔腹腔镜和传统腹腔镜治疗精索静脉曲张的疗效。方法:通过电子检索PubMed、Embase、Cochrone图书馆、中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知网数据库(CNKI),并根据制定的纳入和排除标准对文章进行筛选,采用C... 详细信息

目的:基于随机对照试验,评价单孔腹腔镜和传统腹腔镜治疗精索静脉曲张的疗效。方法:通过电子检索PubMed、Embase、Cochrone图书馆、中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知网数据库(CNKI),并根据制定的纳入和排除标准对文章进行筛选,采用Cochrone系统评价手册推荐的随机对照试验的评估方法对文章的偏倚风险进行评估,通过RevMan 5.2软件对各项观察指标(手术时间、术中出血量、24h疼痛评分、住院时间、住院费用、精子数量、精子活力、精子形态)进行统计学分析。结果:共12项研究纳入到本次的Meta分析中(单孔组325例,传统组326例)。单孔腹腔镜组的手术时间长于传统腹腔镜组(SMD:0.70[0.05,1.34];P=0.03);而单孔腹腔镜组的术中出血量(SMD:-0.26[-0.49,-0.03];P=0.0.02)及24h疼痛评分(SMD:-1.15[-2.10,-0.20];P=0.02)则低于传统腹腔镜组;两组间的住院时间(SMD:-0.37[-0.76,0.03];P=0.07)、住院费用(SMD:0.02[-0.64,0.68];P=0.94)、精子数量(SMD:-0.24[-0.49,0.01];P=0.06)、精子活力(SMD:0.06[-0.94,1.05];P=0.91)、精子形态(SMD:0.48[-0.08,1.03];P=0.10)没有明显差异。结论:和传统腹腔镜治疗精索静脉曲张相比较,单孔腹腔镜是一种安全、有效、创伤更小、美观效果更佳的手术方式。

关键词：单孔腹腔镜传统腹腔镜精索静脉曲张 Meta分析

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后腹腔镜肾癌根治术对肾癌患者的疗效观察

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2021年第7期 8-9页

作者：白佳鑫刘型刘灿朱景振陆军军医大学第二附属医院泌尿外科中心重庆400037

探讨后腹腔镜肾癌根治术对肾癌患者的疗效。方法:选取我院2018年1月至2020年12月120例肾癌患者,随机分为对照组和观察组,各60例,对照组采用开放性肾癌根治术,观察组采用后腹腔镜肾癌根治术。比较两组各项手术指标、手术并发症发生率以... 详细信息

探讨后腹腔镜肾癌根治术对肾癌患者的疗效。方法:选取我院2018年1月至2020年12月120例肾癌患者,随机分为对照组和观察组,各60例,对照组采用开放性肾癌根治术,观察组采用后腹腔镜肾癌根治术。比较两组各项手术指标、手术并发症发生率以及手术前后血清因子水平。结果:观察组各手术指标均优于对照组;与手术前比较,手术后72h两组血清皮质醇(COR)、C反应蛋白(CRP)及血肌酐(Cr)水平均降低,且观察组低于对照组;观察组并发症总发生率低于对照组(均P<0.05)。结论:后腹腔镜肾癌根治术手术损伤小,并可减轻肾癌患者炎性反应,改善肾功能,且并发症少,安全可靠。

关键词：肾癌后腹腔镜肾癌根治术疗效