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DNA与有机试剂的共振光散射光谱研究与应用

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DNA与有机试剂的共振光散射光谱研究与应用

作者：曾金祥湘潭大学

学位级别：硕士

本论文在查阅大量文献的基础上,结合实验室的实验条件,选择共振光散射光谱法研究了DNA与一些有机小分子之间相互作用的共振光散射光谱特征,并根据共振光散射光谱信号改变值与DNA浓度呈正比的特点,建立了四种测定DNA的新方法。这些方法... 详细信息

本论文在查阅大量文献的基础上,结合实验室的实验条件,选择共振光散射光谱法研究了DNA与一些有机小分子之间相互作用的共振光散射光谱特征,并根据共振光散射光谱信号改变值与DNA浓度呈正比的特点,建立了四种测定DNA的新方法。这些方法具有快速、灵敏等特点,应用于鱼精及酵母DNA含量的测定,结果令人满意。本论文共分为四章。第一章研究了甲基绿与脱氧核糖核酸在碱性条件下的共振光散射光谱特征,考察了影响因素和最佳反应条件。研究表明,甲基绿在pH=10.0的三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲溶液中与鱼精DNA反应后在339nm处其共振光散射强度显著增强,且共振光散射强度增加值与加入的DNA的浓度呈良好的线性关系,据此建立了一种测定DNA的新方法。在pH=10.0的三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲溶液中,线性范围为400～1800μg/L,线性回归方程为:△I =-22.6602+56.1966C(C: μg/mL),相关系数为0.9990,最低检出限可达20.6μg/L,应用于鱼精DNA的测定结果令人满意。第二章研究了P-氯化蔷薇苯胺与脱氧核糖核酸的最佳反应条件,研究了它们之间相互作用的共振光散射特征,考察了体系的影响因素,建立了一种测定DNA的新方法。研究表明,在pH=7.0的三羟甲基氨基甲烷—盐酸(Tris-HCl)缓冲溶液中,在594nm处P-氯化蔷薇苯胺与脱氧核糖核酸相互作用后产生共振光散射强度增强,共振光散射强度增强值与加入的DNA的浓度呈良好的线性关系,线性范围为200～1600μg/L,线性回归方程为: ΔI= -21.99 +236.5C(C:μg/mL),相关系数为0.9997,检出限为26.5μg/L,应用于酵母DNA的测定,结果令人满意。第三章研究了混合有机染料天青Ⅰ与脱氧核糖核酸的最佳反应条件,探索了体系在pH=10.0的三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲溶液中的共振光散射特征,并考察了体系的影响因素,建立了一种测定DNA的新方法。方法的线性范围为200～600μg/L,线性回归方程为ΔI= -96.62+606.6C (C:μg/mL),相关系数为0.9998,检出限为11.2μg/L,应用于酵母DNA的测定结果令人满意。第四章研究了阴离子染料茜素红S(ARS)-十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)-脱氧核糖核酸(DNA)体系的共振光散射(RLS)及其分析应用。研究了体系RLS的光谱特征、影响因素和最佳反应条件,同时讨论了ARS- CTMAB- DNA相互作用的可能机理。在六次甲基四铵(HMTA)-HCl缓冲溶液(pH=8.0)中,ARS通过CTMAB的桥梁协同作用与DNA反应形成了大的分子聚集体,使体系的RLS增强。在最佳条件下,体系的△IRLS与yDNA在25-800μg/L范围内呈线性关系,其线性回归方程为ΔI=57.632+412.76C(C:μg/mL),相关系数r=0.9991,DNA检测限为11.3μg/L。该方法简便、快速、具有较高的灵敏度和准确度,应用于合成样品中DNA的测定,结果令人满意。

关键词：脱氧核糖核酸,共振光散射光谱,甲基绿,P-氯化蔷薇苯胺,天青Ⅰ,十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB),茜素红S(ARS)

柠檬酸盐在羟基磷灰石表面介导生物矿化的计算机模拟研究

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柠檬酸盐在羟基磷灰石表面介导生物矿化的计算机模拟研究

作者：曾金祥华南理工大学

学位级别：硕士

作为人体骨骼和牙齿中的主要矿物成分,羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HAP)具有良好的生物相容性和机械性能,是优良的骨骼或牙齿修复材料,因此如何调控HAP的晶体生长备受关注。此外,人体中的柠檬酸根离子(Citrate ion,CIT)会富集在骨骼及牙... 详细信息

作为人体骨骼和牙齿中的主要矿物成分,羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HAP)具有良好的生物相容性和机械性能,是优良的骨骼或牙齿修复材料,因此如何调控HAP的晶体生长备受关注。此外,人体中的柠檬酸根离子(Citrate ion,CIT)会富集在骨骼及牙齿处,在生物矿化过程中发挥着重要的辅助功能。因此,本文采用分子动力学(Molecular dynamics,MD)模拟方法研究多种与生物矿化相关的多肽在HAP表面的吸附行为及构象等,主要研究内容如下:1.采用MD模拟研究了CIT如何调控聚天冬氨酸(PASP)在磷酸钙溶液中的HAP表面的吸附行为。结果表明,归功于羧基基团和α螺旋结构,PASP可以作为离子螯合剂结合Ca并成为HAP矿化的模板。加入CIT后,所有体系的PASP的取向分布更窄并以“平躺”的取向吸附在HAP表面。这表明CIT可以作为桥接剂介导并稳定酸性多肽在HAP表面上的吸附。2.结合MD和拉伸分子动力学模拟方法揭示了在HAP层中的骨钙素多肽(Osteocalcin,OCN)的力学行为。模拟结果表明,HAP间隙的减小会使OCN在HAP表面不断发生界面键的形成与破坏,进而导致粘滑型运动。加入CIT后会显著增大牵引拉力,这是因为柠檬酸钙团簇的空间位阻效应及其钙离子与OCN的酸性氨基酸残基的结合。以上结果都导致了在HAP层中拉动OCN时的能量耗散更高。3.采用MD模拟并结合并行回火和准动力学算法探索了骨桥蛋白多肽(Osteopontin,OPN)在HAP表面的吸附行为。结果表明,组合算法可以极大地增加采样效率。其中OPNA因其净电荷为0而不能有效吸附到HAP表面,所以会在水溶液中保持较为紧凑的结构。而OPNB-OPNG的净负电荷较多,所以能更稳定地吸附到HAP表面。随着OPNB-OPNG中磷酸化丝氨酸(Sep)残基的个数的增减(由0增加到5),其回旋半径和构象变化也逐渐增大。此外,在蛋白或多肽的柔性部分修饰Sep能够维持其α螺旋结构;而适当增加Sep的个数则能显著增大当前片段的回旋半径与构象变化。本文从分子尺度揭示了生物矿化过程中柠檬酸盐与有机基质对HAP矿化的调节机理,能够为材料的仿生矿化及相关医学研究的发展提供理论指导。

关键词：蛋白质吸附分子模拟羟基磷灰石聚天冬氨酸骨钙素骨桥蛋白

吴茱萸脂溶性成分指纹图谱及化学模式识别研究

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中药材 2013年第10期36卷 1588-1594页

作者：唐琍萍魏娟曾金祥毕莹罗光明张寿文江西中医药大学附属医院江西南昌330006 江西中医药大学中药资源与民族药研究中心江西南昌330004

目的:建立吴茱萸药材脂溶性成分HPLC指纹图谱的分析方法,并采用主成分分析与聚类分析方法进行化学模式识别,以期为吴茱萸药材质量控制与品质评价提供参考。方法:采用高效液相色谱法,Venusil MP-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:... 详细信息

目的:建立吴茱萸药材脂溶性成分HPLC指纹图谱的分析方法,并采用主成分分析与聚类分析方法进行化学模式识别,以期为吴茱萸药材质量控制与品质评价提供参考。方法:采用高效液相色谱法,Venusil MP-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.5%乙酸水溶液梯度洗脱;流速:1 mL/min;检测波长为249nm;柱温:30℃。结果:建立了吴茱萸药材脂溶性成分HPLC指纹图谱,34批吴茱萸药材确定了9个共有峰。主成分分析及聚类分析首次表明石虎与疏毛吴茱萸在脂溶性化学成分上更为相似,品质受环境、气候等因素影响较大,与品种关系并不明显。但吴茱萸与石虎及疏毛吴茱萸这2个品种在脂溶性化学成分上具有相对较大的差异。结论:研究为中国药典规定吴茱萸药材来源于吴茱萸、疏毛吴茱萸及石虎提供了理论与实验依据,也为制定新的吴茱萸质量控制与品质评价模式提供了参考依据。

关键词：吴茱萸脂溶性成分化学模式识别 HPLC指纹图谱

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车前子综合化学模式识别研究

中国中药杂志 2012年第8期37卷 1148-1151页

作者：罗光明曾金祥朱继孝江西中医学院药学院江西南昌330004

目的:运用高效液相色谱指纹图谱相似度评价法、系统聚类分析法和主成分分析法建立车前子药材的综合化学模式识别方法。方法:采用反相高效液相法,紫外检测器,Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.5%乙酸水溶液为流动相梯度洗脱... 详细信息

目的:运用高效液相色谱指纹图谱相似度评价法、系统聚类分析法和主成分分析法建立车前子药材的综合化学模式识别方法。方法:采用反相高效液相法,紫外检测器,Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.5%乙酸水溶液为流动相梯度洗脱,建立车前子的HPLC-UV指纹图谱,并以24批药材共有色谱峰峰面积为依据,建立其系统聚类分析方法及主成分分析方法。结果:指纹图谱法可以区别不同品种及产地车前子,系统聚类分析法和主成分分析法分析结果基本一致,但稍有差异。结论:所建立的综合化学模式识别方法可用于车前子的质量控制及品种评价。

关键词：车前子综合化学模式识别质量控制与评价

右美托咪定对腹腔镜卵巢囊肿切除术患者心钠素和去甲肾上腺素的影响

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中国内镜杂志 2012年第12期18卷 1273-1276页

作者：曾志文曾金祥林升广东省梅州市人民医院麻醉科广东梅州514031

目的研究右美托咪定对腹腔镜卵巢囊肿切除术患者应激反应的影响。方法 30例择期全麻下行腹腔镜卵巢囊肿切除术患者随机分为两组:右美托咪定组(A组):麻醉诱导时静脉输注右美托咪定1μg/kg,并以静脉输注右美托咪定0.5μg/(kg·h)维持;对照... 详细信息

目的研究右美托咪定对腹腔镜卵巢囊肿切除术患者应激反应的影响。方法 30例择期全麻下行腹腔镜卵巢囊肿切除术患者随机分为两组:右美托咪定组(A组):麻醉诱导时静脉输注右美托咪定1μg/kg,并以静脉输注右美托咪定0.5μg/(kg·h)维持;对照组(B组)不用右美托咪定。观察麻醉前、麻醉诱导后插管前、插管后5min、肿瘤切除时和术毕时的MAP,HR和BIS值。同时抽取静脉血供检测去甲肾上腺素和心钠素用。结果与T0比较,两组患者去甲肾上腺(NA)在T1、T2、T3及T4增高(P0.05),T2、T3、T4时点ANP均增高(P<0.05),但B组显著高于A组(P<0.05)。结论腹腔镜卵巢囊肿切除术患者术中使用右美托咪定可显著减轻患者的应激反应,有利于内环境稳定。

关键词：腹腔镜卵巢囊肿切除术全身麻醉应激反应心钠素右美托咪定

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樟帮栀子饮片HPLC指纹图谱研究

中国实验方剂学杂志 2014年第4期20卷 54-57页

作者：周强彭红罗光明曾金祥江西中医学院南昌330004

目的：建立樟帮栀子饮片的HPLC特征指纹图谱，为其质量控制提供参考。方法：采用RP—HPLC，AgilentZorbaXEclipseXBD—C18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，乙腈一水梯度洗脱，流速1．0mL·min-1，柱温30℃，进样量20μL，检测波长... 详细信息

目的：建立樟帮栀子饮片的HPLC特征指纹图谱，为其质量控制提供参考。方法：采用RP—HPLC，AgilentZorbaXEclipseXBD—C18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，乙腈一水梯度洗脱，流速1．0mL·min-1，柱温30℃，进样量20μL，检测波长238nm（0-20min），440nm（20～40min）。结果：初步建立了樟帮栀子饮片HPLC指纹图谱，确定共有峰9个。将11批不同产地、相同炮制方法的栀子饮片指纹图谱与樟帮栀子饮片对照指纹图谱进行相似度比较，相似度在0．495～0．952。结论：用于建立樟帮栀子饮片指纹图谱的10批天齐堂饮片厂提供的栀子饮片相似度理想，而收集于不同产地、采用相同的炮制方法炮制的栀子饮片内在质量具有较大差异性。

关键词：栀子樟帮法高效液相指纹图谱

吴茱萸水溶性成分HPLC指纹图谱与化学模式识别研究

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中草药 2013年第23期44卷 3400-3405页

作者：魏娟曾金祥毕莹张寿文张忠立吴波韦国兵江西中医药大学江西省中药资源与民族药研究中心江西南昌330004

目的研究吴茱萸药材水溶性化学成分的HPLC指纹图谱,并应用系统聚类分析和主成分分析建立吴茱萸药材的化学模式识别方法,以期为吴茱萸药材质量控制与品质评价提供参考。方法色谱柱为Ultimate XB-C18色谱柱(150.0 mm×4.6 mm,3μm);流动... 详细信息

目的研究吴茱萸药材水溶性化学成分的HPLC指纹图谱,并应用系统聚类分析和主成分分析建立吴茱萸药材的化学模式识别方法,以期为吴茱萸药材质量控制与品质评价提供参考。方法色谱柱为Ultimate XB-C18色谱柱(150.0 mm×4.6 mm,3μm);流动相为乙腈-水(含0.5%醋酸和0.04%磷酸)混合溶液,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;检测波长为327 nm;进样量10μL;柱温:25℃。结果 34批吴茱萸药材有27个共有峰,相似度在0.945～0.997。聚类分析能对《中国药典》2010年版规定的3种吴茱萸药材进行有效识别,并且从水溶性化学成分上揭示吴茱萸药材的种质远近关系,主成分分析结果与聚类分析结果类似。结论建立的方法能够成功应用于吴茱萸药材的质量评价与控制及品种识别,可为制定吴茱萸质量评价与控制模式提供新的参考依据。

关键词：吴茱萸化学模式识别品质评价聚类分析主成分分析

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天青Ⅰ共振光散射法测定DNA

分析试验室 2004年第12期23卷 35-38页

作者：曾金祥陈小明罗和安蔡昌群张丽湘潭大学化学学院湘潭411105

基于脱氧核糖核酸(DNA)对混合有机染料天青Ⅰ的共振光散射增强效应,拟定了一种测定DNA的共振光散射法。在pH9.5～10.5的范围内,天青Ⅰ在299、355、400、570、630nm附近均有较弱的共振光散射信号,随着DNA的加入,共振光散射信号大大增强。... 详细信息

基于脱氧核糖核酸(DNA)对混合有机染料天青Ⅰ的共振光散射增强效应,拟定了一种测定DNA的共振光散射法。在pH9.5～10.5的范围内,天青Ⅰ在299、355、400、570、630nm附近均有较弱的共振光散射信号,随着DNA的加入,共振光散射信号大大增强。在355nm处,其散射光增强强度与DNA质量浓度呈线性关系。其线性回归方程为ΔI=-96.62+606.6ρ,线性范围为0 20～0.60μg mL,相关系数r=0.9998,检出限为11.2μg L。该方法可应用于合成样品中DNA的测定。

关键词：脱氧核糖核酸天青Ⅰ 共振光散射法

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鲍高效养殖模式的研究

海洋湖沼通报 1998年第3期 43-50页

作者：郭新堂冯敬利荆世锡曾金祥青岛市渔业技术推广站中国盐业总公司黄岛区渔业技术推广站

本研究采取苗种强化培育、坑道培育大规格苗种、湖间带鲍参混养等相结合，并配套适当技术措施，促进鲍快速生长，缩短养殖周期一年左右，提高成活率15％以上，增加经济效益200％左右，形成鲍高效养殖的较理想模式。

关键词：鲍坑道潮间带养殖模式海参