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橡胶树膜系统酵母双杂交cDNA文库构建及HbSRPP7互作蛋白筛选

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热带作物学报 2023年第9期44卷 1735-1744页

作者：聂智毅康桂娟覃怀德曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所/农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101

橡胶树橡胶粒子上的蛋白质在橡胶生物合成一系列反应过程中起着关键作用,它们直接决定着橡胶烃分子的数量和大小,影响天然橡胶的产量和质量。小橡胶粒子蛋白(small rubber particle protein,SRPP)是丰度仅次于橡胶延伸因子(rubber elong... 详细信息

橡胶树橡胶粒子上的蛋白质在橡胶生物合成一系列反应过程中起着关键作用,它们直接决定着橡胶烃分子的数量和大小,影响天然橡胶的产量和质量。小橡胶粒子蛋白(small rubber particle protein,SRPP)是丰度仅次于橡胶延伸因子(rubber elongation factor,REF)的橡胶粒子蛋白组分,与橡胶粒子发育和橡胶生物合成密切相关。目前已知橡胶粒子上存在多种SRPP家族蛋白,但大部分成员的功能尚不清楚。SRPP可能通过与其他橡胶粒子蛋白相互作用发挥功能。为了筛选SRPP蛋白家族成员之一Hb SRPP7的互作蛋白,本研究利用位点特异性重组技术构建了原始库容为1.5×10^(7)CFU的均一化橡胶树胶乳膜蛋白酵母双杂交系统(membrane yeast two-hybrid system,MYTH)cDNA文库,该文库插入片段平均长度大于1500 bp,重组率约为100%。构建了用于MYTH系统筛选HbSRPP7互作蛋白的pBT3STE-SRPP7和pBT3SUC-SRPP7诱饵载体并确认其能在NMY32酵母菌株中正确表达,无自激活活性。使用pBT3STE-SRPP7诱饵质粒对胶乳MYTHcDNA文库进行筛选,获得21个HbSRPP7候选互作的蛋白,包括3个REF家族蛋白(HbREF1、HbREF3和HbREF8)、2个SRPP家族蛋白(HbSRPP1、HbSRPP2)、2个活性氧清除相关蛋白(thioredoxin H-type-like、L-ascorbate peroxidase 2)以及5个胁迫相关蛋白(high mobility group Bprotein 2-like、RPM1-interacting protein 4-like、stress-related protein-like、salt stress-induced hydrophobic peptide ESI3-like和F-box/kelch-repeat protein)。结果显示HbSRPP7除了可能通过与橡胶生物合成相关的橡胶粒子蛋白互作参与橡胶生物合成,也可能通过与生物和非生物逆境胁迫相关蛋白互作,响应橡胶树乳管生物和非生物逆境胁迫系统信号,参与橡胶粒子上的橡胶生物合成调控。该研究结果有助于了解SRPP家族蛋白的功能,为揭示橡胶粒子上参与橡胶生物合成的蛋白复合体组成,阐明橡胶生物合成及其调控的分子机制奠定基础。

关键词：橡胶树 HbSRPP7 膜蛋白酵母双杂交系统 cDNA文库互作蛋白

基于知识的数学应用题自动求解方法研究与实现

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基于知识的数学应用题自动求解方法研究与实现

作者：鲁日中天北京邮电大学

学位级别：硕士

巴西橡胶树HbNTL1基因启动子的克隆与序列分析

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生物技术通报 2013年第1期29卷 83-88页

作者：康桂娟黎瑜曾日中聂智毅中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室和省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室儋州571737

膜结合NAC转录因子(NTLs)是植物NAC转录因子家族中一类C端具有跨膜结构域(transmembrane motifs,TMs)的转录调控因子,在植物生长发育、激素调节和逆境胁迫应答中具有重要的功能。根据巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)膜结合类NAC转录因子... 详细信息

膜结合NAC转录因子(NTLs)是植物NAC转录因子家族中一类C端具有跨膜结构域(transmembrane motifs,TMs)的转录调控因子,在植物生长发育、激素调节和逆境胁迫应答中具有重要的功能。根据巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)膜结合类NAC转录因子HbNTL1基因cDNA序列,利用基因组步移的方法从巴西橡胶树叶片基因组DNA中克隆获得了HbNTL1基因上游1 718 bp的调控片段。序列分析表明,该段序列含有一个典型的真核生物核心启动子区域,转录起始位点A位于起始密码子上游206 bp处。该启动子序列除了含有多个TATA-box、CAAT-box等基本顺式作用元件外,还存在赤霉素、茉莉酸和脱落酸等激素响应元件以及大量逆境胁迫诱导相关的顺式调控元件,如ABRE、DOFCOREZM、MYBCORE、W-box和MYCCONSENSUSATHSE等反应元件,表明HbNTL1转录因子可能是一个逆境胁迫相关NAC转录因子,在橡胶树抵御逆境胁迫的生理过程中具有重要功能。

关键词：巴西橡胶树 HbNTL1启动子顺式调控元件逆境胁迫

CO2敏感清洁压裂液体系构筑及减阻规律研究

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CO2敏感清洁压裂液体系构筑及减阻规律研究

作者：栾日中中国石油大学(华东)

学位级别：硕士

非常规油气资源已成为常规能源的战略性接替能源,但储层非均质性强、埋藏深度大,一般需要大规模体积压裂来改造储层,压裂液则是改造过程中必不可少的工作介质。清洁压裂液无残渣易返排、低伤害、工艺简便,但其实际应用过程中存在减阻差... 详细信息

非常规油气资源已成为常规能源的战略性接替能源,但储层非均质性强、埋藏深度大,一般需要大规模体积压裂来改造储层,压裂液则是改造过程中必不可少的工作介质。清洁压裂液无残渣易返排、低伤害、工艺简便,但其实际应用过程中存在减阻差的问题。为此急需研制一种高减阻的耐温清洁压裂液体系,并初步阐明其减阻机制,这对我国非常规油气储层的开发有着重要意义。本文研发了一种CO敏感清洁压裂液体系。以水溶性、响应性、增黏性和耐温性等为指标,对压裂液主剂、助剂进行种类筛选和配比优化,构筑CO敏感清洁压裂液体系:长链酰胺基丙基二甲胺(OKO)、对甲苯磺酸钠(Na Pts)和防膨剂(DQ-2)。借助流变仪、平板裂缝模拟装置、摩阻仪、物理模拟装置等评价清洁压裂液的流变性能、耐温耐剪切性能、动态携砂性能、减阻性能、破胶性能、滤失性能、防膨性能及岩心伤害性能。进一步研究管径、浓度、剪切时长、温度、水质及主剂助剂配比等因素对体系减阻性能的影响规律,得到了黏度-减阻率图版,并阐明了清洁压裂液的减阻机制。研究表明,0.70 wt%OKO+1.0 wt%Na Pts+0.30 wt%DQ-2为最优CO敏感清洁压裂液体系配方。该体系是假塑性流体,具有良好的耐温耐剪切性(80℃,2 h,20 m Pa·s)、破胶性(80℃,2 h,1 m Pa·s)和防膨性(CST值=1.3860%);相同黏度下主剂/助剂配比对减阻率影响较小。综合考虑浓度、温度影响绘制黏度-减阻率图版,指导压裂设计和施工。初步探究了减阻机制,其中有效滑移减阻机制占主导,流层厚度变化与减阻率密切相关,CO气体附着管壁可减少与流体间的摩擦,同时也存在协同减阻机制,体系空间网状结构和黏弹性可减少能量耗散,为进一步揭示减阻机理提供借鉴。

关键词：清洁压裂液 CO2敏感性能评价减阻规律

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巴西橡胶树HbNAM基因克隆和表达分析

南京林业大学学报（自然科学版） 2016年第1期40卷 59-64页

作者：康桂娟黎瑜曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室海南儋州571737

为了研究巴西橡胶树中植物特有NAC转录因子的功能,笔者通过RT-PCR和实时荧光定量PCR技术对HbNAM的开放阅读框(ORF)进行了克隆和表达分析,并通过酵母转化实验进行转录激活活性分析。结果显示,HbNAM基因ORF为1 077 bp,编码358个氨基酸,在... 详细信息

为了研究巴西橡胶树中植物特有NAC转录因子的功能,笔者通过RT-PCR和实时荧光定量PCR技术对HbNAM的开放阅读框(ORF)进行了克隆和表达分析,并通过酵母转化实验进行转录激活活性分析。结果显示,HbNAM基因ORF为1 077 bp,编码358个氨基酸,在第12—167位氨基酸之间含有一个典型的NAC结构域,属于NAC转录因子家族中的NAM亚族。酵母试验表明,HbNAM在高度变异C端具有转录激活活性,具备转录因子的基本特征。实时荧光定量PCR分析发现,HbNAM在叶片、雄花、雌花、胶乳和树皮中均表达,其中以光合组织叶片和生殖组织雄花中的表达量最高,并且胶乳中该基因的表达受割胶、植物激素或植物生长调节剂茉莉酸(JA)和乙烯利(ET)以及低温胁迫影响,推测HbNAM可能与植物的生长发育和胁迫应答过程有关。

关键词：巴西橡胶树 NAC转录因子基因克隆表达分析转录激活活性

巴西橡胶树HbNTL2基因的克隆和表达分析

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2015年第6期41卷 602-609页

作者：康桂娟黎瑜曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室海南儋州571737

利用RT–PCR和实时荧光定量PCR技术,对巴西橡胶树膜结合转录因子Hb NTL2进行克隆和表达,并通过酵母试验进行转录激活功能分析。结果表明,Hb NTL2基因的开放阅读框为1 380 bp,编码一个由459个氨基酸组成的蛋白,该蛋白属于NAC转录因子家... 详细信息

利用RT–PCR和实时荧光定量PCR技术,对巴西橡胶树膜结合转录因子Hb NTL2进行克隆和表达,并通过酵母试验进行转录激活功能分析。结果表明,Hb NTL2基因的开放阅读框为1 380 bp,编码一个由459个氨基酸组成的蛋白,该蛋白属于NAC转录因子家族中的ANAC001亚族;在第6~172位氨基酸之间含有典型的NAC结构域,第433~453位氨基酸具有跨膜结构域,是膜结合NAC转录因子;Hb NTL2具有转录激活功能,转录激活区在C–末端;Hb NTL2在叶片的表达高于在橡胶树的其他部位,受割胶、茉莉酸（JA）和乙烯（ET）处理以及低温胁迫诱导。综合分析结果表明,Hb NTL2可能参与调控巴西橡胶树的生长发育和胁迫应答过程。

关键词：巴西橡胶树膜结合NAC转录因子基因克隆基因表达转录激活活性

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基于多源数据的水电厂统一信息平台研究

基于多源数据的水电厂统一信息平台研究

作者：王日中重庆理工大学

学位级别：硕士

随着电力系统多年的信息化建设,我国电网正在由传统电网向智能电网演变。与传统电力系统这一封闭的物理系统相比,智能电网更加开放、复杂,是具有多用户、分布式、智能化等特征的信息系统。智能电网每时每刻都会产生大量的、结构复杂的... 详细信息

随着电力系统多年的信息化建设,我国电网正在由传统电网向智能电网演变。与传统电力系统这一封闭的物理系统相比,智能电网更加开放、复杂,是具有多用户、分布式、智能化等特征的信息系统。智能电网每时每刻都会产生大量的、结构复杂的、彼此具有复杂关联性的数据,但由于各个系统的封闭性,造成电力系统“信息孤岛”问题,导致对如何利用这些数据,挖掘其价值成为电力行业目前及未来所面临的巨大挑战。针对上述存在问题,本文设计了基于多源数据的水电厂统一信息平台,旨在解决电力系统“信息孤岛”问题,突破传统信息针对特定应用的局限性,贯通水电厂各个环节的数据,推进多业务之间的高效协同。本文首先结合现有水电厂业务功能,完成水电厂业务功能设计;其次,以业务需求为驱动,以技术探索为手段,完成水电厂统一信息平台技术架构,实现多源数据的异构,把数据资源向数据资产转化,为借用大数据人工智能技术进行数据挖掘和数值分析提供准确信息。同时,对水电厂统一信息平台构建过程中的关键技术进行分析,主要内容包括:（1）提出了面向对象统一编码方案,完成编码规则的设计,旨在解决各系统编码不成体系问题;（2）研究统一信息平台同步时钟技术,采用IEEE 1588协议,解决系统和设备的同步问题,通过仿真验证,该方案同步精度可达亚微秒级,并且提出了IEEE 1588协议实现方案,能够满足现在电力系统需求;最后,本文利用学校动模实验室模拟变压器相间短路故障,对统一信息平台故障诊断模块进行实验验证,证明统一信息平台的合理性和实用性。

关键词：多源数据统一信息平台信息孤岛故障诊断

不同沉淀方法处理胶乳总RNA对基因扩增效率的影响

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生物技术通报 2016年第11期32卷 124-129页

作者：吴春太黎瑜冯伟瑜曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室海南省热带作物栽培生理学重点实验室儋州571737 海南大学农学院海口570228

为探明沉淀方法对胶乳总RNA提取及PCR扩增效率的影响,并寻求较好的RNA沉淀方法,针对胶乳中蛋白、多糖、橡胶粒子含量高的特点,在本实验室改进的SDS法的基础上,分别用Li Cl、Na Cl+异丙醇、Na Cl+Na Ac+无水乙醇和Na Ac+无水乙醇对橡胶... 详细信息

为探明沉淀方法对胶乳总RNA提取及PCR扩增效率的影响,并寻求较好的RNA沉淀方法,针对胶乳中蛋白、多糖、橡胶粒子含量高的特点,在本实验室改进的SDS法的基础上,分别用Li Cl、Na Cl+异丙醇、Na Cl+Na Ac+无水乙醇和Na Ac+无水乙醇对橡胶树胶乳总RNA进行沉淀,并对所得RNA的完整性、纯度、含量和RT-PCR扩增效率进行比较。结果表明,4种方法均可获得完好的RNA,但其纯度、含量和PCR扩增效率随方法不同而有所差别,其中Na Cl+Na Ac+无水乙醇沉淀的橡胶树胶乳总RNA纯度、产率和18S、REF基因扩增效果均较高,故认为用Na Cl+Na Ac+无水乙醇沉淀胶乳总RNA是一种较为有效的方法。

关键词：橡胶树胶乳总RNA提取 RNA沉淀

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医院建筑工程项目管理方法探究

中文科技期刊数据库（全文版）经济管理 2023年第3期 0075-0077页

作者：王日中赣州市妇幼保健院江西赣州341000

在我国医疗卫生体系不断完善的背景下,医院建筑工程项目数量不断增多,人们对此类项目的质量要求也不断提升。医院建筑具有功能能复杂、专业繁多、设备多样等特点,建设难度较大,建设中会遇到各种问题。为保障医院建筑工程的施工效率、安... 详细信息

在我国医疗卫生体系不断完善的背景下,医院建筑工程项目数量不断增多,人们对此类项目的质量要求也不断提升。医院建筑具有功能能复杂、专业繁多、设备多样等特点,建设难度较大,建设中会遇到各种问题。为保障医院建筑工程的施工效率、安全与质量,需要采取有效的工程项目管理办法,综合分析医院建筑工程项目的特点、建设需求和建设难点,结合实际情况制定完善的管理方案,不断创新管理方法,有效提升管理效果,本文就此进行了相关的阐述和分析。

关键词：医院建筑工程项目管理