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儿童纵隔神经源性肿瘤单中心外科治疗经验

临床小儿外科杂志 2022年第3期21卷 231-235页

作者：曹正浓刘丹王雅楠贾慧敏中国医科大学附属盛京医院小儿胸外科沈阳110004

目的分析儿童纵隔神经源性肿瘤行手术治疗患儿的临床特征、治疗方法及预后。方法收集中国医科大学附属盛京医院小儿外科2012年1月至2021年12月间收治的30例纵隔神经源性肿瘤患儿临床资料,对其临床症状、影像学表现、治疗方法、病理类... 详细信息

目的分析儿童纵隔神经源性肿瘤行手术治疗患儿的临床特征、治疗方法及预后。方法收集中国医科大学附属盛京医院小儿外科2012年1月至2021年12月间收治的30例纵隔神经源性肿瘤患儿临床资料,对其临床症状、影像学表现、治疗方法、病理类型及预后资料进行回顾性分析。结果 30例患儿平均年龄4.7岁(1~13岁),男20例,女10例。8例患儿未出现特异性症状(8/30,26.7%),7例为检查过程中意外发现,1例为肾上腺节细胞神经母细胞瘤术后随诊过程中发现;18例患儿因呼吸道症状就诊(18/30,60.0%),表现为咳嗽、咳痰、喘息等;2例胸背痛(2/30,6.7%);2例锁骨上淋巴结肿大(2/30,6.7%);12例伴发热(12/30,40.0%)。行胸腔镜手术16例(53.3%),胸腔镜辅助开胸手术9例(30.0%),开胸手术5例(16.7%)。术后病理检查结果:神经母细胞瘤4例(13.3%),神经节母细胞瘤8例(26.7%),节细胞神经瘤16例(53.3%),神经鞘瘤1例(3.3%),原始神经外胚层肿瘤2例(6.7%)。30例中良性16例(53.3%),恶性14例(46.7%)。结论小儿纵隔肿瘤症状不典型,难以早期发现,胸部CT及MRI是诊断的主要手段,经手术治疗后预后相对较好。

关键词：膈/外科学膈/病理生理学肿瘤/外科学肿瘤/诊断治疗结果儿童

先天性肺气道畸形中SOX10及COL2A1的差异表达分析

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中华小儿外科杂志 2021年第4期42卷 294-298页

作者：刘丹曹正浓戈舞贾慧敏中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004

目的通过对SOX10及COL2A1在先天性肺气道畸形(congenital pulmonary airway malformation,CPAM)病变组织及正常组织中的表达分析,探讨SOX10及COL2A1在CPAM的发育过程中的作用。方法2018年11月至2020年11月,中国医科大学附属盛京医院收治... 详细信息

目的通过对SOX10及COL2A1在先天性肺气道畸形(congenital pulmonary airway malformation,CPAM)病变组织及正常组织中的表达分析,探讨SOX10及COL2A1在CPAM的发育过程中的作用。方法2018年11月至2020年11月,中国医科大学附属盛京医院收治的30例CPAM患儿中,男19例,女11例;年龄为(44.67±37.42)个月;术前诊断为CPAM 1型17例,2型13例。收集所有患儿术中的病变肺组织及病变周围正常肺组织,将术中收集的病变肺组织作为CPAM组,将病变周围正常肺组织作为对照组。将CPAM组和对照组分别进行免疫组织化学染色、蛋白质印迹法检测及实时定量聚合酶链反应(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测,使用t-test统计学方法对蛋白质印记法及qRT-PCR结果进行统计学分析。结果免疫组织化学染色的结果显示SOX10及COL2A1在CPAM组的表达相对于正常组织中,主要高表达于病变肺组织中的囊壁、血管壁、肺间质及异常支气管壁上,两组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。蛋白质印迹法及qRT-PCR检测结果显示病变肺组织中SOX10及COL2A1的表达量明显高于在对照组中的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论SOX10及COL2A1在CPAM组织中存在高表达,可能参与CPAM发育过程中的囊壁、血管及异常支气管的形成过程。

关键词： SOX10 先天性肺气道畸形 COL2A1

TXNIP/NLRP3通过调控Wnt/β-catenin通路促进大鼠先天性肛门直肠畸形的发生

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中华小儿外科杂志 2023年第5期44卷 439-446页

作者：沈苗苗刘丹曹正浓戈舞廉鹏贾慧敏中国医科大学盛京医院小儿外科沈阳110004

目的研究胎鼠肛门直肠发育过程中硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)/NOD样受体家族含pyrin结构域3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)轴在泄殖腔发育中的作用。方法50只Wistar孕鼠被随机分为先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)组和正常组,每组各25只,孕10 d分别按125 mg/kg给予乙烯硫脲(ethylene thiourea,ETU)及等量生理盐水灌胃,孕14 d、孕15 d和孕16 d剖宫取胎,显微镜下收集胎鼠的后肠组织。通过蛋白印迹法和免疫组织化学检测NLRP3炎性小体和TXNIP蛋白的表达量。进一步在IEC-6中转染si-NC/TXNIP,通过实时定量PCR和蛋白印迹法检测TXNIP在mRNA和蛋白水平的敲减效率,用蛋白印迹法、细胞免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测si-NC组和si-TXNIP组NLRP3炎性小体、β-catenin的蛋白变化及细胞上清液中IL-1β和IL-18的含量。采用2^(-△△CT)法分析目的基因mRNA相对表达量变化,观察各组细胞目的基因表达量的变化趋势,Western blot条带和免疫组织化学图片用ImageJ软件进行半定量分析,P<0.05表示有统计学意义。结果与正常组相比,TXNIP和NLRP3炎性小体的蛋白表达在ARM胎鼠的孕15 d和孕16 d时增加(P=0.0012、P=0.0081);与si-NC组相比,si-TXNIP组NLRP3活化受到抑制(P=0.0131),cleaved-caspase-1的蛋白表达降低(P=0.0386),细胞上清液中的IL-1β和IL-18含量减少(P=0.0035、P=0.0259),以及β-catenin的蛋白表达量降低(P=0.018)。结论TXNIP/NLRP3轴可能通过调控Wnt/β-catenin通路参与ARM的发生。

关键词：肛门直肠畸形硫氧还蛋白质类半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1

长链非编码RNA在先天性肛门直肠畸形发生发展中的作用机制研究

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中华小儿外科杂志 2021年第2期42卷 145-151页

作者：曹正浓刘丹廉鹏戈舞贾慧敏中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004

目的探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)发生发展中的作用机制。方法采用随机数字表法将42只健康SPF级Wistar孕鼠分为ARM组和对照组,孕10 d时分别予1%乙烯硫脲(ethylene t... 详细信息

目的探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)发生发展中的作用机制。方法采用随机数字表法将42只健康SPF级Wistar孕鼠分为ARM组和对照组,孕10 d时分别予1%乙烯硫脲(ethylene thiourea,ETU)及生理盐水灌胃,并分别于孕16、17、19 d取7只大鼠剖宫取胎。分别对ARM组及对照组胎鼠在孕16、17、19 d三个时间点末端直肠组织lncRNA进行高通量测序分析,对具有显著差异的lncRNA进行靶基因预测,筛选出可能与ARM发生相关的lncRNA进行进一步验证与研究。采用实时荧光定量PCR检测ARM组及对照组胎鼠末段肛门直肠组织中的lncRNA AARB07048878.1表达水平差异,通过特异性干扰试剂及过表达质粒转染大鼠小肠隐窝上皮细胞系(IEC-6细胞系)细胞,采用CCK-8试剂法检测细胞增殖能力变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平变化,采用Western blot检测细胞中Wnt5a蛋白的表达水平。实验数据两两比较采用独立样本t检验,多组间比较采用ANOVA。结果高通量测序及靶基因预测分析显示lncRNA AARB07048878.1可能与ARM发生相关。荧光定量PCR检测显示,相较对照组,ARM组胎鼠在孕16、17、19 d时lncRNA AARB07048878.1表达均下调,其中17 d时ARM组(0.48±0.13)与对照组(1.00±0.24)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA AARB07048878.1表达后,干扰组与对照组比较,IEC-6细胞增殖能力下降(加入试剂后2 h:1.90±0.01比2.04±0.04;4 h:3.18±0.03比3.27±0.02),细胞凋亡率上升[(18.34±4.20)%比(11.57±3.54)%],Wnt5a蛋白表达降低(0.77±0.12比1.00±0.17),且组间比较,差异均有统计学意义(P<0.01或<0.05)。过表达lncRNA AARB07048878.1后,过表达组与空白组比较,细胞增殖能力提高(加入试剂后2 h:1.96±0.04比1.80±0.03;4 h:3.44±0.06比3.16±0.03),细胞凋亡率下降[(8.48±2.89)%比(12.19±0.40)%],Wnt5a蛋白表达增加(1.29±0.07比1.00±0.12),且组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA AARB07048878.1可能通过抑制细胞增殖,促进细胞凋亡影响先天性肛门直肠畸形发生发展,其作用可能通过抑制Wnt5a表达实现。

关键词：长链非编码RNA 先天性肛门直肠畸形机制

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139例梅克尔憩室患儿诊断方式的临床分析

国际儿科学杂志 2023年第1期50卷 66-69页

作者：柳思佳李勇刘丹曹正浓贾慧敏中国医科大学附属盛京医院小儿普外胸外科沈阳110004

目的分析比较超声、放射性核素显像、CT三种影像学检查在儿童梅克尔憩室(Meckel′s diverticulum,MD)术前诊断中的作用。方法回顾性分析2013年1月至2021年1月在中国医科大学附属盛京医院小儿普外胸外科住院疑似MD的139例患儿术前影像学... 详细信息

目的分析比较超声、放射性核素显像、CT三种影像学检查在儿童梅克尔憩室(Meckel′s diverticulum,MD)术前诊断中的作用。方法回顾性分析2013年1月至2021年1月在中国医科大学附属盛京医院小儿普外胸外科住院疑似MD的139例患儿术前影像学资料,根据主要临床表现将病例分为便血组(69例)和非便血组(70例),分别比较三种检查方法在两组病例诊断中的灵敏度、特异度、准确率,探寻疑似MD患儿的诊断路径。结果(1)139例中经手术及术后病理确诊MD 122例。术前行超声检查121例,确诊MD 56例;行放射性核素显像66例,阳性46例;行CT检查116例,确诊MD 21例。(2)便血组超声诊断MD灵敏度78.2%(43/55),特异度88.9%(8/9),准确率79.7%(51/64);放射性核素显像诊断MD灵敏度81.4%(35/43),特异度50%(4/8),准确率76.5%(39/51);CT诊断MD灵敏度28.6%(14/49),特异度100%(8/8),准确率38.6%(22/57)。非便血组超声诊断MD灵敏度22.5%(11/49),特异度87.5%(7/8),准确率31.6%(18/57);放射性核素诊断MD灵敏度44.4%(4/9),特异度50%(3/6),准确率46.7%(7/15);CT诊断MD灵敏度12.1%(7/58),特异度100%(1/1),准确率13.6%(8/59)。(3)三种检查方法对便血组的诊断灵敏度均高于非便血组(均P<0.05),差异有统计学意义。结论对便血的患儿建议行超声及放射性核素显像联合应用以提高MD诊断率;若无便血,患儿仅以腹痛、呕吐等症状来就诊,建议行CT平扫或增强检查,有助于发现并发症及改善预后。

关键词：儿童梅克尔憩室诊断超声放射性核素显像 CT

lncRNA AC119762.8-201在乙烯硫脲诱导大鼠胚胎肛门直肠畸形中表达的初步研究

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中华小儿外科杂志 2021年第7期42卷 650-658页

作者：戈舞刘丹曹正浓廉鹏沈苗苗贾慧敏中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004

目的验证lncRNA AC119762.8-201在乙烯硫脲(ethylene thiourea,ETU)诱导的大鼠胚胎肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)中的差异表达;研究干扰及过表达lncRNA AC119762.8-201后对大鼠小肠隐窝上皮细胞株(intestinal epithelial cell line,IEC-6)的细胞增殖、迁移(上皮-间质转换)及Wnt5a蛋白表达水平的影响。方法选用体重250~300 g的健康成年未育的Wistar大鼠30只,其中雌鼠24只,雄鼠6只;雌雄大鼠按4∶1的比例于晚上合笼过夜,次日晨雌鼠做阴道涂片,在光镜下见到精子或阴道栓即确认已交配,当日为孕0 d(E0),选取明确受孕的18只雌鼠按随机数字表法随机分为大鼠ETU-ARM致畸组(9只)和大鼠生理盐水对照组(9只)。孕10 d(E10)时,将大鼠ETU-ARM致畸组一次性灌胃注入1%ETU(125 mg/kg),大鼠生理盐水对照组灌入等量生理盐水。在孕16 d(E16)、17 d(E17)和19 d(E19),对两组孕鼠剖宫并取出胎鼠。无菌操作下,从大鼠ETU-ARM致畸组中共取得162只胎鼠,根据肉眼及解剖显微镜下观察,若胎鼠出现无尾或短尾畸形,且肛门与外界不相通,直肠末端与尿道之间有瘘管连通,则纳入胎鼠ARM组(简称ARM组),ARM组共122只致畸胎鼠,致畸率为75.31%(122/162);从大鼠生理盐水对照组取得141只胎鼠,胎鼠尾部均正常,无肛门直肠畸形,肛门与外界相通且直肠末端与尿道之间无瘘管连通,为胎鼠正常组(简称正常组)。解剖显微镜下,在无菌条件下取出ARM组和正常组胎鼠的直肠末端组织置于-80℃冰箱保存备用。采用实时定量聚合酶链反应(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测lncRNA AC119762.8-201的表达;提取IEC-6细胞质和细胞核RNA,通过qRT-PCR检测lncRNA AC119762.8-201在细胞中的定位;采用siRNA序列或过表达质粒转染的方法下调或上调IEC-6细胞中lncRNA AC119762.8-201的表达,通过细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖,蛋白质印迹法检测细胞上皮-间质转换及Wnt5a蛋白表达水平的影响。结果通过qRT-PCR验证lncRNA AC119762.8-201在ARM组及正常组胎鼠肛门直肠组织中的表达水平;结果显示在E16、E17及E19时,与正常组相比,lncRNA AC119762.8-201的表达水平分别为(0.47±0.02比1.01±0.08,0.80±0.16比1.00±0.02,0.41±0.06比1.02±0.09),lncRNA AC119762.8-201在ARM组中的表达水平下降,并且在E16和E19,ARM组及正常组之间的差异具有统计学意义(P0.05)。在转染干扰si-RNA(si-NC和si-lnc)和过表达质粒(over-NC质粒和over-lnc质粒)对lncRNA AC119762.8-201表达水平的影响方面,转染si-RNA的结果显示,与转染si-NC的细胞(1.01±0.18)相比,转染si-lnc后,lncRNA AC119762.8-201的表达水平明显下调为(0.43±0.13),差异具有统计学意义(P0.05);12 h为(3.40±0.01比3.26±0.01),差异具有统计学意义(P0.05);相反,当过表达lncRNA AC119762.8-201时,细胞

关键词：大鼠肛门直肠畸形长链非编码RNA 细胞增殖细胞迁移