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RICTOR对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活力的影响

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中国病理生理杂志 2013年第3期29卷 526-530页

作者：郭欣胡爱玲方霖楷刘岩潘云峰中山大学附属第三医院风湿免疫科广东广州510630 中山大学附属第三医院护理部广东广州510630

目的:通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)mTORC2的特异组成蛋白RICTOR的表达,观察其对细胞活力的影响。方法:组织块法培养RA-FLS。应用阳离子脂质体转染的方法,把化学合成的特异性RICTOR siRNA转染RA... 详细信息

目的:通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)mTORC2的特异组成蛋白RICTOR的表达,观察其对细胞活力的影响。方法:组织块法培养RA-FLS。应用阳离子脂质体转染的方法,把化学合成的特异性RICTOR siRNA转染RA-FLS,并以转染非特异性siRNA作为阴性对照。利用荧光定量PCR法分析转染24 h后细胞RICTOR mRNA表达水平的变化;Western blotting法分析转染48和72 h后细胞RICTOR蛋白表达水平的变化;以噻唑蓝(MTT)比色法检测转染成纤维样滑膜细胞不同时间(24、48和72h)RICTOR siRNA对细胞活力的影响。结果:荧光定量PCR结果显示特异性RICTOR siRNA转染组与对照组相比,细胞中RICTOR的mRNA表达水平显著下调,24 h干扰效率达78.3%±63.71%(P<0.01)。Western blotting结果显示与对照组相比,RICTOR siRNA转染组48 h和72 h后RICTOR蛋白表达水平明显降低,沉默效率分别为92.48%±6.14%和98.57%±1.40%(均P<0.01)。MTT结果显示,早期(24和48 h)RICTOR siRNA转染组与阴性对照组细胞存活率比较无显著差异;72 h后,RICTOR siRNA转染组与阴性对照相比,细胞活力明显降低,抑制率为90.14%±1.90%(P<0.01)。结论:转染特异性RICTOR siRNA可降低RA-FLS的活力,提示mTORC2可能与RA-FLS的生长有关。

关键词： RICTOR蛋白关节炎类风湿成纤维样滑膜细胞 RNA干扰

RICTOR在肿瘤坏死因子-α参与的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活化中的作用

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中华风湿病学杂志 2015年第1期19卷 42-45页

作者：郭欣潘云峰方霖楷郭兴华刘岩吴云婷广东省第二人民医院风湿免疫科广州510630 中山大学附属第三医院风湿免疫科

目的初步探讨RICTOR在RA-成纤维样滑膜细胞（FLS）活化机制中的作用.方法收集3例RA患者滑膜组织,应用组织块法培养FLS.分别以浓度为10、20 ng/ml的TNF-α处理RA-FLS,利用蛋白印迹法检测RICTOR的蛋白表达水平.应用阳离子脂质体把特异性... 详细信息

目的初步探讨RICTOR在RA-成纤维样滑膜细胞（FLS）活化机制中的作用.方法收集3例RA患者滑膜组织,应用组织块法培养FLS.分别以浓度为10、20 ng/ml的TNF-α处理RA-FLS,利用蛋白印迹法检测RICTOR的蛋白表达水平.应用阳离子脂质体把特异性RICTOR siRNA转染RA-FLS后,再以10 ng/ml的TNF-α处理RA-FLS,使用蛋白印迹法检测RICTOR的蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测RA-FLS活性抑制率.统计学处理采用单因素方差分析及LSD-t检验.结果 TNF-α处理RA-FLS 48 h后,RICTOR的蛋白表达较阴性对照组明显升高（均P＜0.05）.转染RICTOR siRNA后,RICTOR蛋白表达：对照组＜TNF 10 ng/ml组＜TNF 20 ng/ml组,吸光度相对值依次为0.35±0.06、0.60±0.09、1.10±0.12,组间两两比较差异有统计学意义（均P＜0.05）.转染RICTOR siRNA后,阴性对照组、RICTOR（-）/TNF-α（-）组、RICTOR （-）/TNF-α（＋）组RICTOR蛋白吸光度相对值分别为0.4984±0.1401、0.0128±0.002 0、0.0425±0.0273,MTT检测阴性对照组、RICTOR（-）/TNF-α（-）组、RICTOR（-）/TNF-α（＋）组、RICTOR（＋）/TNF-α（＋）组细胞活性抑制率分别为（0.7±2.0）％、（13.3±4.5）％、（15.5±4.9）％、（-7.7±5.2）％,显示无论是否加入TNF-α刺激,RA-FLS中RICTOR的蛋白表达水平均较转染阴性对照siRNA组明显下降,且RA-FLS活性抑制率较转染阴性对照siRNA组明显增高（均P＜0.05）.结论沉默RICTOR所引起的RA-FLS活性抑制不能被TNF-α逆转,提示RICTOR可能在TNF-α参与的RA-FLS增殖活化机制中起着重要作用.

关键词：关节炎,类风湿成纤维样滑膜细胞肿瘤坏死因子-α RICTOR

肌酐正常患者中β2-微球蛋白与骨质疏松的相关分析

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中国骨质疏松杂志 2014年第10期20卷 1189-1191页

作者：郭兴华潘云峰方霖楷金欧古洁若中山大学附属第三医院风湿免疫科广州510630

目的探讨肌酐正常患者血清中β2-微球蛋白与骨质疏松的关系。方法选择2013年1月-2013年7月在中山大学附属第三医院住院患者364例肌酐正常患者,年龄15~84岁,平均年龄56.12岁。检测患者血清中β2-微球蛋白、肌酐及骨密度水平,并根据骨密... 详细信息

目的探讨肌酐正常患者血清中β2-微球蛋白与骨质疏松的关系。方法选择2013年1月-2013年7月在中山大学附属第三医院住院患者364例肌酐正常患者,年龄15~84岁,平均年龄56.12岁。检测患者血清中β2-微球蛋白、肌酐及骨密度水平,并根据骨密度结果和世界卫生组织推荐的诊断标准将患者分为骨质疏松、骨量减少和骨量正常3组。比较3组间肌酐和血清中β2-微球蛋白水平,并将患者骨密度水平和血清中β2-微球蛋白水平行相关分析。结果 3组患者间肌酐水平无明显差异,骨质疏松组患者血清中β2-微球蛋白水平较骨量正常组患者血清中β2-微球蛋白升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）。骨密度水平与血清中β2-微球蛋白水平呈负相关（P〈0.05）。结论在肌酐正常患者中血清中β2-微球蛋白与骨质疏松相关,β2-微球蛋白对骨质疏松的影响可能是独立于肾功能的。

关键词：肌酐 β2-微球蛋白骨质疏松

强直性脊柱炎患者16号染色体区域遗传易感位点的大家系全基因组测序验证及筛选

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中山大学学报（医学科学版） 2015年第1期36卷 33-41页

作者：吕青李秋霞郑栩琪林智明曹双燕廖泽涛魏秋静祁军方霖楷古洁若中山大学附属第三医院风湿免疫科广东广州510630

【目的】前期家系GWAS非参数分析结果提示在16号染色体chr16:27836693-53825488,LOD=1.656。我们选择一个大的中国汉族强直性脊柱炎家系,采用全基因组外显子测序进一步验证和筛选该区的疾病易感基因位点。【方法】选取一个具有47个成员... 详细信息

【目的】前期家系GWAS非参数分析结果提示在16号染色体chr16:27836693-53825488,LOD=1.656。我们选择一个大的中国汉族强直性脊柱炎家系,采用全基因组外显子测序进一步验证和筛选该区的疾病易感基因位点。【方法】选取一个具有47个成员的5代中国汉族强直性脊柱炎大家系,其中先用家系中3名患者(1名男性,2名女性,分属3代)的基因组DNA进行外显子区高通量测序;对于初筛的外显子组测序后所得到的SNP位点进行全家系成员验证,并进行家系患者和非患者成员间比较,及与健康人群数据进行比较。【结果】通过对数据所进行的分析,发现在16号染色体强直性脊柱炎关联区域三个样本共有SNP 165个。对上述165个SNP进行初步筛选后,对其中的位于15个基因的29个SNP位点,在1个AS患者和1个非AS患者中进行初步验证,进而在上述关联区域内得到5个在家系AS患者和其他非AS患者间差异有显著性的SNP位点rs10163354、rs11863236、rs16945916、rs28654935和rs8043751(P<0.05),位于ABCC11基因。【结论】该家系研究提示在16号染色体区域的ABCC11基因变异可能与AS易感性相关,值得扩大样本进一步研究。

关键词：强直性脊柱炎外显子测序易感基因

来氟米特在治疗伴外周关节炎的强直性脊柱炎中的作用分析

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中国医学创新 2013年第27期10卷 28-29页

作者：邱敏丽潘云峰方霖楷古洁若中山大学附属第三医院广东广州510630

目的:探讨来氟米特(LEF)在治疗伴外周关节炎的强直性脊柱炎(AS)中的效果和安全性。方法:将150例伴有外周关节炎的活动性AS患者随机分为LEF组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组和安慰剂对照组,分别接受相应治疗,疗程24周,观察AS病情控制情况和不良... 详细信息

目的:探讨来氟米特(LEF)在治疗伴外周关节炎的强直性脊柱炎(AS)中的效果和安全性。方法:将150例伴有外周关节炎的活动性AS患者随机分为LEF组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组和安慰剂对照组,分别接受相应治疗,疗程24周,观察AS病情控制情况和不良反应发生率。结果:LEF能显著降低AS患者的BASDAI指数、外周关节压痛数及肿胀数,显著提高ASAS20改善率,疗效与SASP组相当。LEF组不良反应发生率显著低于SASP组,但与对照组差异无显著性。结论:LEF能够有效控制伴外周关节炎AS患者病情,安全性好。

关键词：来氟米特强直性脊柱炎疗效不良反应

小剂量利妥昔单抗在治疗系统性红斑狼疮中的作用分析

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中外医疗 2013年第25期32卷 21-22页

作者：邱敏丽金欧方霖楷古洁若中山大学附属第三医院风湿免疫科广东广州510630

目的探讨小剂量利妥昔单抗(RTX)治疗系统性红斑狼疮(SLE)的疗效及安全性,为传统治疗不能耐受和疗效不佳者提供新的治疗途径。方法对该院收治的27例抗对传统方法治疗效果不佳的SLE患者,给予静脉滴注RTX100 mg,使用4次,同时依病情联用糖... 详细信息

目的探讨小剂量利妥昔单抗(RTX)治疗系统性红斑狼疮(SLE)的疗效及安全性,为传统治疗不能耐受和疗效不佳者提供新的治疗途径。方法对该院收治的27例抗对传统方法治疗效果不佳的SLE患者,给予静脉滴注RTX100 mg,使用4次,同时依病情联用糖皮质激素和/或其他细胞毒药物。采用英国狼疮评估小组(BILAG)和SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分对病情进行评估,观察疗效和监测不良反应。结果 27例使用RTX的SLE患者,至随访终点临床完全缓解、部分缓解和无效分别占总例数的48.1%,33.3%和18.5%,BILAG和SLEDAI明显改善,差异有统计学意义。研究期间共发生3例感染,其中只有1例为严重感染。结论小剂量利妥昔单抗对传统方法治疗效果不佳的SLE效果显著,安全性较好,但与细胞毒药物联用时需警惕继发严重感染。

关键词：利妥昔单抗系统性红斑狼疮治疗效果不良反应

乙肝病毒感染对RF检测结果的影响及临床意义

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中国实用医药 2011年第13期6卷 27-28页

作者：郭欣潘云峰宋泽蓉魏秋静郭兴华方霖楷广州市中山大学附属第三医院 510630

目的研究类风湿因子(RheumatoidFactor,简称RF)在慢性乙型肝炎中的表达情况,并探讨其与慢性乙型肝炎误诊的关系及降低误诊发生的措施。方法检测217例乙肝患者血清中RF浓度,生化指标丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)和总胆红素(TB... 详细信息

目的研究类风湿因子(RheumatoidFactor,简称RF)在慢性乙型肝炎中的表达情况,并探讨其与慢性乙型肝炎误诊的关系及降低误诊发生的措施。方法检测217例乙肝患者血清中RF浓度,生化指标丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)和总胆红素(TBil),乙肝病毒标志物,即乙肝表面抗原(HBsAg),乙肝表面抗体(抗-HBs),乙肝e抗体(抗-HBe),乙肝核心抗体(抗-HBc),乙肝e抗原(HBeAg),及补体C3、C4。比较乙肝活动组与非活动组的RF阳性率,RF阳性组与RF阴性组间各乙肝检测项目的阳性率,对RF与各生化、补体检测项目间进行关联分析。结果乙肝活动组RF阳性率高于非活动组(P<0.05);RF阳性组的HBsAg阳性率高于阴性组(P<0.05),RF阴性组的抗-HBs和抗-HBe阳性率均高于阳性组(P<0.05);RF与ALT、AST、TBil间存在正相关(P<0.05)。结论慢性乙型肝炎患者可能因乙肝病毒感染后机体免疫紊乱,致使RF检测阳性,临床上结合病史、临床表现、常规生化及其他辅助检查加以分析,可减少风湿病的误诊率。

关键词：类风湿因子慢性乙型肝炎误诊

乙肝病毒感染对ANA检测结果的影响及临床意义

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中国临床实用医学 2010年第10期4卷 37-38页

作者：宋泽蓉潘云峰郭欣魏秋静郭兴华方霖楷广州市中山大学附属第三医院 510630

目的研究抗核抗体（ANA）在慢性乙型肝炎中的表达情况，并探讨其与慢性乙型肝炎误诊的关系及降低误诊发生的措施。方法检测614例乙型肝炎患者血清中ANA滴度，生化指标丙氨酸转移酶（ALT）和天冬氨酸转移酶（AST），及乙肝病毒标志物，... 详细信息

目的研究抗核抗体（ANA）在慢性乙型肝炎中的表达情况，并探讨其与慢性乙型肝炎误诊的关系及降低误诊发生的措施。方法检测614例乙型肝炎患者血清中ANA滴度，生化指标丙氨酸转移酶（ALT）和天冬氨酸转移酶（AST），及乙肝病毒标志物，即乙肝表面抗原（HBsAg），乙肝表面抗体（HBsAb），乙肝e抗体（HBeAb），乙肝核心抗体（HBcAb），乙肝e抗原（HBeAg）。比较乙肝活动组与非活动组的ANA阳性率，ANA阳性组与ANA阴性组间各乙肝检测项目的阳性率，对ANA与各乙肝项目间进行关联分析，比较肝功能正常组与肝功能异常组间ANA的检测结果。结果乙肝活动组ANA阳性率高于非活动组（P〈0．001）；肝功能正常组与异常组间ANA检测结果差异无统计学意义（P〉0．05）；ANA阳性组的HBeAg，ALT和AST阳性率均高于阴性组（P〈0．001），ANA阴性组的HBsAb和HBeAb阳性率均高于阳性组（P〈0．001）；ANA与HBeAg间存在正相关（P〈0．05）。结论慢性乙型肝炎出现ANA阳性可能由肝细胞损伤致细胞内成分释放入血引起，临床工作中结合生化检查，病史，临床表现及其他辅助手段可提高诊断准确率，减少误诊的发生。

关键词：抗体抗核肝炎乙型慢性误诊

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复发性风湿症22例临床特点分析

中国临床实用医学 2010年第10期4卷 88-89页

作者：潘云峰郭兴华方霖楷宋泽蓉古洁若中山大学附属第三医院风湿科 510630

目的总结分析复发性风湿症临床特点。方法收集22例资料较完整的复发性风湿症病例临床资料，分析其临床特点。结果22例患者中男13例，女9例，年龄21～47岁，主要表现为受累关节或关节周围软组织局限性红、肿、热、伴压痛，症状持续2～7d... 详细信息

目的总结分析复发性风湿症临床特点。方法收集22例资料较完整的复发性风湿症病例临床资料，分析其临床特点。结果22例患者中男13例，女9例，年龄21～47岁，主要表现为受累关节或关节周围软组织局限性红、肿、热、伴压痛，症状持续2～7d后可自行缓解或服用非甾体抗炎药后可迅速缓解，但往往反复出现，73％（16／22）患者表现为发作间隔时间逐渐缩短趋势。全身表现少见。实验室检查大多正常，偶出现低滴度的抗核抗体及类风湿因子阳性。结论对反复出现关节或关节周围炎症，短期内可自行好转或对非甾体类抗炎药敏感，反复发作又不出现关节畸形或骨质破坏，实验室检查自身抗体阴性的患者，应首先考虑复发性风湿症的诊断。

关键词：复发性风湿症关节炎诊断