RICTOR对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活力的影响

作     者：郭欣 胡爱玲 方霖楷 刘岩 潘云峰 GUO Xin;HU Ai-ling;FANG Lin-kai;LIU Yan;PAN Yun-feng

作者机构：中山大学附属第三医院风湿免疫科广东广州510630 中山大学附属第三医院护理部广东广州510630 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2013年第29卷第3期

页      面：526-530页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：广东省科技计划(No.2012B031800363) 

主　　题：RICTOR蛋白 关节炎 类风湿 成纤维样滑膜细胞 RNA干扰 

摘      要：目的:通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)mTORC2的特异组成蛋白RICTOR的表达,观察其对细胞活力的影响。方法:组织块法培养RA-FLS。应用阳离子脂质体转染的方法,把化学合成的特异性RICTOR siRNA转染RA-FLS,并以转染非特异性siRNA作为阴性对照。利用荧光定量PCR法分析转染24 h后细胞RICTOR mRNA表达水平的变化;Western blotting法分析转染48和72 h后细胞RICTOR蛋白表达水平的变化;以噻唑蓝(MTT)比色法检测转染成纤维样滑膜细胞不同时间(24、48和72h)RICTOR siRNA对细胞活力的影响。结果:荧光定量PCR结果显示特异性RICTOR siRNA转染组与对照组相比,细胞中RICTOR的mRNA表达水平显著下调,24 h干扰效率达78.3%±63.71%(P0.01)。Western blotting结果显示与对照组相比,RICTOR siRNA转染组48 h和72 h后RICTOR蛋白表达水平明显降低,沉默效率分别为92.48%±6.14%和98.57%±1.40%(均P0.01)。MTT结果显示,早期(24和48 h)RICTOR siRNA转染组与阴性对照组细胞存活率比较无显著差异;72 h后,RICTOR siRNA转染组与阴性对照相比,细胞活力明显降低,抑制率为90.14%±1.90%(P0.01)。结论:转染特异性RICTOR siRNA可降低RA-FLS的活力,提示mTORC2可能与RA-FLS的生长有关。