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用于钙网蛋白基因1型突变和2型突变快速检测的的圆盘式微流控芯片平台的建立

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用于钙网蛋白基因1型突变和2型突变快速检测的的圆盘式微流控芯片...

ISSR在高粱属植物遗传关系研究中的应用(英文)

中国化学会第十三届全国分析化学年会

作者：曹国君方雪恩关明复旦大学附属华山医院复旦大学化学系

目的:出血与血栓是骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者的常见并发症,与患者的发病率和死亡率密切相关,本研究拟建立一个通过环介导等温扩增(LAMP)实现骨髓增殖性肿瘤分子标志物(钙网蛋白基因1型突变和2型突变,即CALR-1/2)快速检测的微流控平台。方... 详细信息

目的:出血与血栓是骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者的常见并发症,与患者的发病率和死亡率密切相关,本研究拟建立一个通过环介导等温扩增(LAMP)实现骨髓增殖性肿瘤分子标志物(钙网蛋白基因1型突变和2型突变,即CALR-1/2)快速检测的微流控平台。方法:通过在线设计引物,建立CALR-1、CALR-2和CALR内参的的LAMP检测体系,将检测体系的引物内置于一款新设计的圆盘式微流控芯片,建立用于CALR-1/2突变的微流控芯片平台。结果:所建立的LAMP检测方法具有良好的敏感性、特异性和稳定性。所建立的微流控平台,可以在60min内完成CALR-1和CALR-2突变的检测。微流控法和实时PCR法检测158例临床样本检测,结果显示:两种检测方法的结果具有良好的一致性(Kendall’s tau=0.99)。结论:所建立的LAMP检测体系具有良好的敏感性、特异性和稳定性,无需复杂的辅助设备,可通过反应体系颜色的变化实现多指标的快速、直接判断,对于促进MPN的POCT检测具有重要意义。

关键词：钙网蛋白基因突变环介导等温扩增床旁检测

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作物学报 2008年第8期34卷 1480-1483页

作者：方雪恩陈沁印丽萍王伟上海大学生命科学学院上海200444 上海出入境检验检疫局上海200135

以高粱、杂交高粱、甜高粱、苏丹草、黑高粱和假高粱6种不同高粱属植物为实验材料,利用ISSR分子标记分析其遗传关系。结果表明,这6种高粱属植物在DNA水平上具有较高的遗传多样性。从110条ISSR引物中成功筛选到22条多态性高、稳定性好的... 详细信息

以高粱、杂交高粱、甜高粱、苏丹草、黑高粱和假高粱6种不同高粱属植物为实验材料,利用ISSR分子标记分析其遗传关系。结果表明,这6种高粱属植物在DNA水平上具有较高的遗传多样性。从110条ISSR引物中成功筛选到22条多态性高、稳定性好的引物,共扩增出182条带,其中差异性条带153条,多态条带比率(PPB)为84.0%。基于遗传距离系数的Neighbor-Joining聚类分析可以将6种高粱分为两大组,相互之间的遗传距离为0.25。另外可以根据一些多态性高的引物所扩增得到的品种特异性条带区分所有不同高粱种,如引物IR89、IS16等。这些为研究高粱属植物的分类、鉴定和进化提供了分子生物学方面的理论依据。

关键词：高粱属植物 ISSR 遗传关系

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猪瘟病毒RT-LAMP检测方法的建立

中国兽医科学 2010年第10期40卷 1033-1038页

作者：李健熊炜方雪恩王巧全姜平南京农业大学动物医学院江苏南京210095 上海出入境检验检疫局上海200135 上海大学生命科学学院上海200444

利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),建立了猪瘟病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性。结果,根据猪瘟病毒5′端非编码区的一段保守序列设计的LAMP引物能够在65℃下1h内实现目标核酸区段的大量扩增,检测结果可直... 详细信息

利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),建立了猪瘟病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性。结果,根据猪瘟病毒5′端非编码区的一段保守序列设计的LAMP引物能够在65℃下1h内实现目标核酸区段的大量扩增,检测结果可直接用肉眼判断。结果表明,该检测体系具有极高的特异性,只能检测到目标病毒,与其他类似病毒如猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的核酸等无交叉反应,可检测到1×10-3稀释度的目标病毒核酸量,比普通RT-PCR的灵敏性高10倍。

关键词：猪瘟病毒逆转录环介导等温核酸扩增检测

圆盘式微流控芯片在脑梗死患者CALR基因突变检测中的初步应用

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中华检验医学杂志 2022年第1期45卷 45-50页

作者：曹国君李云春许笑邢志芳沈钰涛张卿芸田月如方雪恩关明复旦大学附属华山医院北院检验科上海201907 复旦大学附属金山医院检验科上海201508 复旦大学附属华山医院检验医学科上海200040 复旦大学化学系上海200433

目的建立基于圆盘式(CD)微流控芯片的CALR基因突变的快速检测方法,初步评价其用于脑梗死患者CALR-1和CALR-2基因突变检测的应用价值。方法基于微流控技术和环介导等温扩增(LAMP)技术建立一个用于CALR-1和CALR-2基因突变同步检测的CD微... 详细信息

目的建立基于圆盘式(CD)微流控芯片的CALR基因突变的快速检测方法,初步评价其用于脑梗死患者CALR-1和CALR-2基因突变检测的应用价值。方法基于微流控技术和环介导等温扩增(LAMP)技术建立一个用于CALR-1和CALR-2基因突变同步检测的CD微流控芯片检测平台,并验证该平台检测的灵敏度、特异性、重复性和准确性。前瞻性选取2019年11月至2021年3月复旦大学附属华山医院收治的124例脑梗死患者为脑梗死组,80名健康体检者为对照组。用CD微流控芯片法检测抗凝外周全血样本中的CALR-1和CALR-2基因突变情况,每块芯片同时检测4个样本,同步检测每个样本的3个指标,等温扩增40 min后读取结果。同时采用测序法对检测结果进行验证,比较2种检测结果的一致性。结果采用CD微流控芯片平台,无需热循环,40 min即可完成样本中3个指标的同步扩增,样本的整个检测过程在60 min内完成。对核酸靶标浓度较高的样本,扩增10 min即可出现阳性信号,收到样本后30 min内报告检测结果。CD微流控芯片法针对CALR-1和CALR-2的检测灵敏度分别为1.0%和0.5%突变负荷浓度,对于其非靶标的核酸样本均未发生任何非特异性扩增,特异性良好,批内重复性和批间重复性的符合率均为100%(20/20)。在脑梗死组中发现2例CALR基因突变,且均为CALR-1突变(L367fs*46),对照组中未发现CALR-1和CALR-2基因突变。CD微流控芯片法与测序法结果一致率为100%(204/204)。结论CD微流控芯片法用于检测脑梗死患者样本中CALR-1和CALR-2突变具有灵敏度高、特异性好、检测速度快和检测通量高等优势,有助于明确脑梗死患者的病因。

关键词：脑梗死钙网蛋白基因微流控芯片分子诊断技术

白念珠菌环介导等温扩增法的建立及其应用价值

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临床检验杂志 2019年第1期37卷 5-10页

作者：肖晶晶王丽娟孔继烈方雪恩吴文娟同济大学附属东方医院南院医学检验科上海200123 上海速创诊断有限公司上海201321 复旦大学化学系上海200438

目的建立一种简单快速检测白念珠菌的环介导等温扩增技术(LAMP),并评价其临床价值。方法采用Primer Explorer 5.0软件,针对白念珠菌RPS0基因设计4条引物,对LAMP反应体系和反应条件进行优化,评价检测特异性和检测限;收集123例外阴阴道念... 详细信息

目的建立一种简单快速检测白念珠菌的环介导等温扩增技术(LAMP),并评价其临床价值。方法采用Primer Explorer 5.0软件,针对白念珠菌RPS0基因设计4条引物,对LAMP反应体系和反应条件进行优化,评价检测特异性和检测限;收集123例外阴阴道念珠菌病(VVC)组和42例正常对照组的女性阴道拭子,平行进行真菌培养、LAMP检测、PCR检测、1.79 mol/L KOH镜检,真菌培养作为VVC诊断参考方法;组间检测方法阳性率的比较采用Pearsonχ~2检验,LAMP、PCR、镜检与培养法的一致性采用Kappa检验,P方法,可用于白念珠菌感染的辅助诊断和疗效监控。

关键词：环介导等温扩增核酸检测白念珠菌外阴阴道念珠菌病

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新一代的人治疗蛋白——Avimers

药物生物技术 2007年第2期14卷 141-145页

作者：骆静辉方雪恩许宁一吴敏浙江大学宁波理工学院生物与化学工程分院浙江宁波315100 浙江大学生命科学院浙江杭州310027

高亲和性多聚体(Avimers)是新发展的一种由多个亲和单体聚集在一起的治疗性蛋白质,它包含了多个对靶分子的亲和结构域,每个结构域都具有结合某种靶点的能力,Avimers也可以同时对一个或多个靶点进行结合。在结构上,Avimers跟抗体是没有... 详细信息

高亲和性多聚体(Avimers)是新发展的一种由多个亲和单体聚集在一起的治疗性蛋白质,它包含了多个对靶分子的亲和结构域,每个结构域都具有结合某种靶点的能力,Avimers也可以同时对一个或多个靶点进行结合。在结构上,Avimers跟抗体是没有关联的,但它将同样具有与抗体相似的生物活性作用,因而在某种程度上可以作为抗体的替代物。由于Avimers对目标物具有高亲合性、高专一性,且低分子质量和低免疫原性,在一定程度上可以弥补传统抗体治疗所带来的局限性,因而非常有希望出现于临床应用中。文章试从Avimers的结构特征、功能特性、设计方法和作用机理等方面阐述其目前的研究现状,同时展望了它的应用的前景。

关键词：高亲和性多聚体亲和蛋白 A结构区域噬菌体展示技术

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醇溶蛋白电泳在高梁属植物品种鉴定中的应用

醇溶蛋白电泳在高梁属植物品种鉴定中的应用

高粱属A-PAGE图谱的建立及在种子鉴定中的应用

2007中国植物生理学会全国学术会议

作者：方雪恩陈沁印丽萍丁俊波王伟上海大学生命科学学院上海出入境检验检疫局上海大学生命科学学院上海大学生命科学学院

＜正＞高粱属为一年或多年生草本植物,大多数具有很高的经济价值,可以作为粮食、饲料和工业原料,如高粱、苏丹草等;但有些品种为有害的检疫性杂草,如黑高粱、假高粱等。本文以高粱、苏丹草、黑高粱、假高粱和黄壳苏丹草等高粱属植物的...

＜正＞高粱属为一年或多年生草本植物,大多数具有很高的经济价值,可以作为粮食、饲料和工业原料,如高粱、苏丹草等;但有些品种为有害的检疫性杂草,如黑高粱、假高粱等。本文以高粱、苏丹草、黑高粱、假高粱和黄壳苏丹草等高粱属植物的种子为材料,利用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（A-PAGE）检测其醇溶蛋白,

关键词：

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西北植物学报 2007年第12期27卷 2399-2403页

作者：方雪恩陈沁印丽萍丁俊波王伟上海大学生命科学学院上海200444 上海出入境检验检疫局上海200135

以高粱、苏丹草等5种高粱属植物的种子为材料,利用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)检测其醇溶蛋白.同时研究了丙酮处理、样品上样量和凝胶浓度对电泳的影响.结果表明:样品经丙酮处理后,在上样量为32μg、凝胶质量分数为15%时电泳可以得... 详细信息

以高粱、苏丹草等5种高粱属植物的种子为材料,利用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)检测其醇溶蛋白.同时研究了丙酮处理、样品上样量和凝胶浓度对电泳的影响.结果表明:样品经丙酮处理后,在上样量为32μg、凝胶质量分数为15%时电泳可以得到清晰的A-PAGE图谱,据此可以鉴定5种高粱属植物.

关键词：高梁属植物醇溶蛋白 A-PAGE 种子鉴定

地质勘查活动信用监管模式研究——基于回应性监管视角

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中国国土资源经济 2019年第7期32卷 66-69,78页

作者：汪恩满方敏王雪中国自然资源经济研究院北京101149

基于回应性监管视角,分析地质勘查活动监管现状与趋势,提出构建地质勘查活动信用监管模式,形成信用信息归集共享、信用行为记录评价、信用行为分类监管、信用信息查询使用、信用信息修复反馈的信用链条。通过政府主管部门、行业学会协... 详细信息

基于回应性监管视角,分析地质勘查活动监管现状与趋势,提出构建地质勘查活动信用监管模式,形成信用信息归集共享、信用行为记录评价、信用行为分类监管、信用信息查询使用、信用信息修复反馈的信用链条。通过政府主管部门、行业学会协会、社会公众与从业单位之间相互作用与协调,构成完整的信用监管体系,为地质勘查活动监管制度创新提供借鉴和参考。

关键词：回应性监管地质勘查活动信用监管模式