检索结果-南通市图书馆

高效转化大豆低聚糖的果聚糖蔗糖酶的挖掘、表征及表达

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生物工程学报 2024年

作者：汪斌应静茹陈媛媛方泽民肖亚中房伟姚动邦安徽大学生命科学学院生物催化与现代生物制造安徽省重点实验室安徽省微生物与生物催化工程技术研究中心

大豆低聚糖因含大量蔗糖和棉子糖影响了其益生元价值。果聚糖蔗糖酶可催化蔗糖和棉子糖生成高附加值的低聚果糖和蜜二糖等组分。为获得高效转化大豆低聚糖的果聚蔗糖酶，本研究首先从西沙群岛及渤海湾沿海区域微生物中挖掘果聚糖蔗糖酶... 详细信息

大豆低聚糖因含大量蔗糖和棉子糖影响了其益生元价值。果聚糖蔗糖酶可催化蔗糖和棉子糖生成高附加值的低聚果糖和蜜二糖等组分。为获得高效转化大豆低聚糖的果聚蔗糖酶，本研究首先从西沙群岛及渤海湾沿海区域微生物中挖掘果聚糖蔗糖酶基因，然后对其进行酶学性质和催化性能表征，最后将其在枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）中进行重组胞外表达。结果显示，从耐盐芽孢杆菌（Bacillus halotolerans）中挖掘出的新型果聚糖蔗糖酶BhLS 39，其以蔗糖和棉子糖为底物时的最适温度分别为50 ℃和55 ℃，最适pH值均为5.5，Kcat/Km分别为3.4和6.6 （mmol/L）-1s-1。5 U酶处理400 g/L棉子糖30 min后获得的蜜二糖转化率为84.6%，BhLS 39催化蔗糖可生成左聚型低聚果糖和果聚糖。本研究实现了BhLS 39在枯草芽孢杆菌中的重组胞外表达，并通过共表达胞内伴侣蛋白DnaK和胞外伴侣蛋白PrsA使其重组胞外活性提高到17 U/mL，是对照菌的5.2倍。本研究中的BhLS 39有利于大豆低聚糖的提质增效，也可促进其他重组蛋白在枯草芽孢杆菌中实现高效重组表达。

关键词：大豆低聚糖左聚糖蔗糖酶枯草芽孢杆菌伴侣蛋白胞外表达

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单肺移植术后肺动脉狭窄1例并文献复习

中华结核和呼吸杂志 2024年第3期47卷 201-206页

作者：方泽民王跃斌丁志丹李丰科赵凯赵高峰郑州大学第一附属医院肺移植外科郑州450052

目的对肺移植术后肺动脉狭窄的临床特征、诊疗经过及预后进行总结分析。方法患者男,62岁,因“咳嗽伴胸闷1年余,加重2个月”入院,诊断为特发性肺纤维化。同种异体左侧单肺移植术后肺动脉狭窄,观察其临床资料并结合文献复习。以“肺移植... 详细信息

目的对肺移植术后肺动脉狭窄的临床特征、诊疗经过及预后进行总结分析。方法患者男,62岁,因“咳嗽伴胸闷1年余,加重2个月”入院,诊断为特发性肺纤维化。同种异体左侧单肺移植术后肺动脉狭窄,观察其临床资料并结合文献复习。以“肺移植”“肺动脉狭窄”“术后并发症”为检索词检索中国知网及万方数据库,以“lung transplantation”“Stenosis,Pulmonary Artery”“Postoperative Complications”为检索词检索PubMed数据库,检索时间截止到2022年12月。结果2022年1月26日在全身麻醉下行同种异体左侧单肺移植术,分别于术后22 h、2 d撤离体外膜氧合和呼吸机,术后12 d转出重症监护室,脱氧后PaO_(2)为50 mmHg、PaCO_(2)为40 mmHg,肺动脉CT血管造影和通气-灌注显像均提示左肺动脉吻合口狭窄。遂行球囊扩张术并肺动脉支架置入术,脱氧查动脉血气示PaO_(2)为87 mmHg、PaCO_(2)为42 mmHg。术后122 d康复出院,随访1年,预后良好。另检索出相关文献36篇,入组病例69例,其中男性26例,女性20例,23例未标注性别,中位年龄为53岁(38.5~59.0岁),27.54%(19/69)诊断为特发性肺纤维化,46.38%(32/69)进行单肺移植,71.01%(49/69)临床症状为低氧血症,43.48%(30/69)左肺动脉吻合口狭窄,65.22%(45/69)术后晚期诊断,44.93%(31/69)给予介入治疗,21.74%(15/69)死亡。结论肺移植术后肺动脉狭窄以低氧血症为主要临床表现,可通过肺动脉CT血管造影、经食管心脏超声、肺血管造影等进行诊断,早期诊断能显著降低病死率。介入治疗是肺移植术后重度肺动脉狭窄的有效方法。

关键词：肺移植肺动脉手术后并发症狭窄

胰岛素样生长因子2基因在A型主动脉夹层组织中的表达研究

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临床外科杂志 2024年第3期32卷 258-261页

作者：王海涛蒋丁胜方泽民华中科技大学同济医学院附属同济医院心脏大血管外科武汉430030

目的分析胰岛素样生长因子2(Insulin Like Growth Factor 2,IGF2)在A型主动脉夹层(type A aortic dissection, TAAD)中表达、变化及其临床意义。方法我院2015年1月~2019年12月收治的TAAD病人组织标本9例,心脏移植供体修剪所得主动脉... 详细信息

目的分析胰岛素样生长因子2(Insulin Like Growth Factor 2,IGF2)在A型主动脉夹层(type A aortic dissection, TAAD)中表达、变化及其临床意义。方法我院2015年1月~2019年12月收治的TAAD病人组织标本9例,心脏移植供体修剪所得主动脉组织标本5例,采用苏木素-伊红(HE)染色及弹性纤维(EVG)染色评价两组主动脉结构改变;采用Western Blot检测两组标本主动脉壁组织中IGF2的蛋白表达水平;采用免疫组织化学染色(IHC)检测两组标本中IGF2在细胞中的亚细胞水平分布情况及表达水平。结果 HE染色和EVG染色中可见TAAD主动脉壁组织中细胞体积变小、排列紊乱,弹性纤维变细、断裂、排列紊乱;TAAD病人主动脉壁组织中IGF2的表达水平下降,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);IHC显示IGF2主要在细胞核中表达,TAAD组织中相对表达量少于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TAAD病人主动脉壁组织中IGF2表达水平下降,可能与主动脉夹层的发生有关,IGF2有望作为预防和治疗主动脉夹层的新靶点。

关键词：主动脉夹层 IGF2 凋亡增殖

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肝肺联合移植手术的护理配合

河南外科学杂志 2024年第1期30卷 177-179页

作者：马珍张增梅方泽民赵高峰郑州大学第一附属医院手术部郑州450000 郑州大学第一附属医院肺移植外科郑州450000

肝肺联合移植(combined liver and lung transplantation,CLLT)是一种罕见的挽救生命的手术方式,适应证包括终末期肝病合并终末期肺病,且单一器官移植无法改善预后。截至2020年11月,美国已进行肝肺联合移植术144例[1]。国内曾妃等[2]报... 详细信息

肝肺联合移植(combined liver and lung transplantation,CLLT)是一种罕见的挽救生命的手术方式,适应证包括终末期肝病合并终末期肺病,且单一器官移植无法改善预后。截至2020年11月,美国已进行肝肺联合移植术144例[1]。国内曾妃等[2]报道了1例术后护理经验分享。我院完成国内第2例肝肺联合移植术。现将手术室护理配合方法报告如下。

关键词：肝肺联合移植手术中护理特发性肺纤维化肝硬化失代偿期

生淀粉水解α-淀粉酶Amy486的重组表达和性质分析

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生物学杂志 2024年第2期41卷 16-24页

作者：陈新高欢欢汪斌张学成方泽民肖亚中房伟安徽大学生命科学学院安徽大学现代生物制造安徽省重点实验室合肥230061

为明晰生淀粉水解α-淀粉酶Amy486独特的催化特征,将克隆自Exiguobacterium sp.J84菌株的amy486进行重组表达,并研究重组酶的酶学性质、嗜盐特性和钙离子依赖性。Amy486最适催化pH为7.5,在pH 6.5~8.5范围内酶活力保持40%以上,最适温度... 详细信息

为明晰生淀粉水解α-淀粉酶Amy486独特的催化特征,将克隆自Exiguobacterium sp.J84菌株的amy486进行重组表达,并研究重组酶的酶学性质、嗜盐特性和钙离子依赖性。Amy486最适催化pH为7.5,在pH 6.5~8.5范围内酶活力保持40%以上,最适温度为35℃,30℃半衰期为100 h。1.5 mol/L Na_(2)SO_(4)处理可将Amy486的比酶活由1.53 U/mg提升至2209 U/mg。添加1.0 mol/L Na_(2)SO_(4),Amy486在35℃放置500 h,酶活力可保持60%以上。2.5 mmol/L CaCl_(2)可提升酶活力至110%,添加超过5 mmol/L CaCl_(2),Amy486的相对酶活力降至100%以下,EDTA孵育对Amy486蛋白的酶活力和稳定性影响较小。Amy486与钙离子结合的关键位点为K_(3)0_(2),K_(3)0_(2)E与钙离子的结合能力增强,从而降低该酶对外源钙离子的依赖性。α-淀粉酶Amy486及其突变体酶K_(3)0_(2)E是具有较高比酶活的生淀粉水解酶,对外源钙离子的依赖性较低,其活力的发挥依赖于适合的盐浓度,可应用于某些高盐环境下的淀粉水解。

关键词： α-淀粉酶生淀粉嗜盐酶钙离子依赖性

主动脉夹层患者主动脉壁中血清淀粉样P物质的表达变化及其潜在临床意义

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中国心血管病研究 2024年第7期22卷 594-599页

作者：谭凤娇汪馨蒋丁胜方泽民武汉科技大学附属天佑医院心胸外科湖北省武汉市430081 华中科技大学同济医学院附属同济医院心脏大血管外科

目的探讨血清淀粉样P物质(SAP)在主动脉夹层患者主动脉壁组织中的表达变化及其潜在的临床意义。方法收集2020年1月至2021年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院心脏大血管外科明确诊断为Stanford A型主动脉夹层(TAAD)患者主动脉... 详细信息

目的探讨血清淀粉样P物质(SAP)在主动脉夹层患者主动脉壁组织中的表达变化及其潜在的临床意义。方法收集2020年1月至2021年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院心脏大血管外科明确诊断为Stanford A型主动脉夹层(TAAD)患者主动脉壁标本60例(夹层组),以及心脏移植供体的主动脉壁标本30例(对照组)。用苏木素-伊红(HE)染色和弹性纤维(EVG)染色的方法分析两组主动脉壁组织结构的差异。进一步通过蛋白质免疫印迹(WB),免疫荧光(IF)和免疫组化(IHC)检测SAP在主动脉壁组织中的表达水平及亚细胞定位。结果HE和EVG染色结果显示,与对照组相比,夹层组主动脉平滑肌细胞排列紊乱、弹性纤维断裂且减少。蛋白质免疫印迹、免疫荧光及免疫组化实验显示,与对照组对比,SAP蛋白表达水平在夹层组主动脉壁组织中显著降低(P<0.05),且免疫荧光染色显示SAP蛋白主要定位于细胞质和细胞外基质中。结论与对照组相比,主动脉夹层患者的主动脉壁组织中SAP蛋白水平降低,提示SAP蛋白可能与主动脉夹层的发生发展相关。

关键词：主动脉夹层血清淀粉样P物质血管平滑肌细胞

灰盖鬼伞中过表达的碱性真菌漆酶在高盐染料废水中的应用潜力（英文）

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微生物学报 2024年第8期64卷 3014-3029页

作者：王先华朱雪玲林嘉钇谷贤富彭齐霞肖亚中 Ursula Kües 方泽民安徽大学生命科学学院安徽省现代生物制造重点实验室安徽省微生物与生物催化工程技术研究中心 University of Goettingen

【目的】本研究利用双孢菇（Agaricus bisporus）gpdII启动子，实现了碱性真菌漆酶PIE5（CcPIE5）在灰盖鬼伞（Coprinopsis cinerea） FA2222中的同源过表达。【方法】在mKjalke液体培养基中37℃培养7 d，漆酶活力达到（24.2±1.1） U/m... 详细信息

【目的】本研究利用双孢菇（Agaricus bisporus）gpdII启动子，实现了碱性真菌漆酶PIE5（CcPIE5）在灰盖鬼伞（Coprinopsis cinerea） FA2222中的同源过表达。【方法】在mKjalke液体培养基中37℃培养7 d，漆酶活力达到（24.2±1.1） U/mL。纯化的CcPIE5在pH 8.0和60℃下表现出最佳催化活性。【结果】与已经研究报道的真菌漆酶不同，CcPIE5能耐受高浓度NaCl，当NaCl浓度从0升至1.5mol/L时，CcPIE5的kcat和Km均呈下降趋势，表示CcPIE5在纺织印染废水脱色中有潜在应用价值。进一步在染料废水脱色应用中，以丁香酸作为介体，CcPIE5在pH 8.5和60℃条件下可高效降解（92.9±2.3）%的靛蓝胭脂红。通过LC-MS分析确认，Isatin 5-sulfonic acid（ISA）是靛蓝胭脂红降解的主要副产物。【结论】CcPIE5在高温、碱性和含盐条件下高效脱色染料，是处理环境和工业特定应用的理想选择。

关键词：真菌漆酶过表达灰盖鬼伞高盐靛蓝胭脂红

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肺移植治疗特发性肺纤维化合并扁平胸1例及文献复习

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中华结核和呼吸杂志 2023年第3期46卷 251-256页

作者：赵凯丁志丹王跃斌李丰科方泽民夏宗江赵高峰郑州大学第一附属医院胸外科/肺移植外科郑州450052

目的探讨肺移植治疗终末期特发性肺纤维化合并扁平胸的临床特点及供受体匹配的研究进展。方法患者女, 40岁, 以"间断咳嗽伴胸闷、气短2年, 加重1个月"入院。38岁时被诊断为特发性肺纤维化, 随着病情进展肺活量逐渐下降, 胸廓逐渐扁平、... 详细信息

目的探讨肺移植治疗终末期特发性肺纤维化合并扁平胸的临床特点及供受体匹配的研究进展。方法患者女, 40岁, 以"间断咳嗽伴胸闷、气短2年, 加重1个月"入院。38岁时被诊断为特发性肺纤维化, 随着病情进展肺活量逐渐下降, 胸廓逐渐扁平、膈肌逐渐上抬。回顾性分析其临床资料并进行文献复习。以"肺移植"和"扁平胸"为检索词检索中国知网及万方医学网中文文献数据库;以"lung transplantation"及"flat chest""为检索词检索PubMed数据库, 检索时间截止到2022年7月。结果 2021年7月26日顺利为患者完成了同种异体序贯式双肺移植, 术后分别于18、38 h成功撤除体外膜氧合(extracorporeal membrane oxygenation, ECMO)和呼吸机, 术后2周顺利出院。移植后患者胸壁扁平情况逐渐改善。目前肺移植术后1年, 随访病情良好。检索到相关英文文献9篇, 除外1篇综述文章外, 其中5篇患者资料相对完善, 共43例, 男性22例, 女性21例, 年龄范围24~58岁;活体双侧肺叶移植11例, 尸体双肺移植14例, 尸体单肺移植18例。另外, 尚有3篇文献对肺移植合并扁平胸患者进行初步探讨分析, 未明确患者资料信息。结论对于终末期限制性肺疾病合并获得性扁平胸同时接受肺移植的患者, 可适当选择稍大的供肺;同时围术期进行强化肺康复运动训练, 有助于逆转平胸、提高移植后肺功能。

关键词：肺移植扁平胸胸壁肺容积三维计算机断层扫描

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漆酶Lcc9在灰盖鬼伞菌中的同源过表达

生物学杂志 2022年第6期39卷 47-51页

作者：张晶娜周刚刘娟娟方泽民肖亚中安徽大学生命科学学院现代生物制造安徽省重点实验室安徽省微生物与生物催化工程技术研究中心合肥230601

为了高效制备漆酶Lcc9,克隆了Lcc9编码基因,利用酿酒酵母同源重组技术构建lcc9过表达载体并在Corprinopsis cinerea Okayama 7#130(OK7)和FA2222中进行同源过表达。经原生质体共转化、再生培养基初筛、最简培养基复筛,分别获得46株OK7... 详细信息

为了高效制备漆酶Lcc9,克隆了Lcc9编码基因,利用酿酒酵母同源重组技术构建lcc9过表达载体并在Corprinopsis cinerea Okayama 7#130(OK7)和FA2222中进行同源过表达。经原生质体共转化、再生培养基初筛、最简培养基复筛,分别获得46株OK7和29株FA2222阳性转化子。摇瓶发酵结果显示,在Kjalke培养基中接种5%(体积分数),经37℃培养6~7 d后,OK7阳性菌株漆酶活力达到5.1~21.1 U/mL,FA2222阳性菌株漆酶活力达到3.7~12.3 U/mL,分别为野生型表达量的19.2和241.2倍。在3 L发酵罐中对FA2222阳性菌株进行漆酶的发酵制备,结果显示,经37℃、50 r/min培养108 h后菌株漆酶活力达59 U/mL,相比普通摇瓶发酵,漆酶活力进一步提高了4.8倍。

关键词：漆酶 Lcc9 灰盖鬼伞同源过表达高密度发酵