生淀粉水解α-淀粉酶Amy486的重组表达和性质分析

作     者：陈新 高欢欢 汪斌 张学成 方泽民 肖亚中 房伟 CHEN Xin;GAO Huanhuan;WANG Bin;ZHANG Xuecheng;FANG Zemin;XIAO Yazhong;FANG Wei

作者机构：安徽大学生命科学学院安徽大学现代生物制造安徽省重点实验室合肥230061 

出 版 物：《生物学杂志》 (Journal of Biology)

年 卷 期：2024年第41卷第2期

页      面：16-24页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金：国家重点研发计划项目(No.2022YFC2805101) 

主　　题：α-淀粉酶 生淀粉 嗜盐酶 钙离子依赖性 

摘      要：为明晰生淀粉水解α-淀粉酶Amy486独特的催化特征,将克隆自Exiguobacterium sp.J84菌株的amy486进行重组表达,并研究重组酶的酶学性质、嗜盐特性和钙离子依赖性。Amy486最适催化pH为7.5,在pH 6.5~8.5范围内酶活力保持40%以上,最适温度为35℃,30℃半衰期为100 h。1.5 mol/L Na_(2)SO_(4)处理可将Amy486的比酶活由1.53 U/mg提升至2209 U/mg。添加1.0 mol/L Na_(2)SO_(4),Amy486在35℃放置500 h,酶活力可保持60%以上。2.5 mmol/L CaCl_(2)可提升酶活力至110%,添加超过5 mmol/L CaCl_(2),Amy486的相对酶活力降至100%以下,EDTA孵育对Amy486蛋白的酶活力和稳定性影响较小。Amy486与钙离子结合的关键位点为K_(3)0_(2),K_(3)0_(2)E与钙离子的结合能力增强,从而降低该酶对外源钙离子的依赖性。α-淀粉酶Amy486及其突变体酶K_(3)0_(2)E是具有较高比酶活的生淀粉水解酶,对外源钙离子的依赖性较低,其活力的发挥依赖于适合的盐浓度,可应用于某些高盐环境下的淀粉水解。