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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第12期40卷 898-902页

作者：徐春泉方人驰曾未良刘世星林奕帅陈丽琼周铁丽温州医科大学附属第一医院医学检验中心 325000 浙江大学医学院附属第一医院检验科 310003 温州医科大学检验医学院生命科学学院 325000

目的研究黏菌素与3种碳青霉烯类药物分别联用时对碳青霉烯类和黏菌素共同耐药阴沟肠杆菌复合群的体外抗菌活性。方法收集2011—2018年间自温州医科大学附属第一医院临床患者各类标本中分离的阴沟肠杆菌复合群菌株,Vitek 2-Compact全自... 详细信息

目的研究黏菌素与3种碳青霉烯类药物分别联用时对碳青霉烯类和黏菌素共同耐药阴沟肠杆菌复合群的体外抗菌活性。方法收集2011—2018年间自温州医科大学附属第一医院临床患者各类标本中分离的阴沟肠杆菌复合群菌株,Vitek 2-Compact全自动微生物分析仪检测菌株对临床常用抗菌药物的敏感性;共筛选出对碳青霉烯类和黏菌素共同耐药的阴沟肠杆菌复合群菌株19株,采用琼脂稀释法检测碳青霉烯类和黏菌素对19株菌株的最低抑菌浓度(MIC),微量棋盘稀释法评估黏菌素分别与3种碳青霉烯类药物联用对碳青霉烯类和黏菌素共同耐药阴沟肠杆菌复合群菌株的体外抗菌活性。结果19株菌株对一、三代头孢菌素的耐药率均高于90%;对厄他培南、美罗培南和亚胺培南的耐药率分别为100%、26.3%和31.6%;黏菌素与亚胺培南、美罗培南和厄他培南对阴沟肠杆菌复合群的联合用药主要表现为协同作用或相加作用,美罗培南/黏菌素与亚胺培南/黏菌素组合各对1株菌株表现为无关作用。结论碳青霉烯类与黏菌素的联合使用对碳青霉烯类和黏菌素共同耐药阴沟肠杆菌复合群具有较好的作用效果,可作为此类多重耐药菌株感染的潜在治疗策略。

关键词：碳青霉烯类黏菌素阴沟肠杆菌复合群联合治疗

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MepRAB外排系统突变导致体外诱导金黄色葡萄球菌获得替加环素耐药性

MepRAB外排系统突变导致体外诱导金黄色葡萄球菌获得替加环素耐药...

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2019年浙江省医学会医学微生物与免疫学分会学术大会

作者：方人驰孙瑶郑相阔田学斌张秀彩王冲曹建明周铁丽温州医科大学附属第一医院医学检验中心温州医科大学检验医学、生命科学学院

目的描述医院源性金黄色葡萄球菌分离株在选择性压力下,对替加环素耐药性的演变途径和生物学特征的改变。方法使用梯度浓度的替加环素对3株临床金黄色葡萄球菌与1株标准金黄色葡萄球菌菌株(ATCC29213)进行体外替加环素耐药突变体的诱导...

目的描述医院源性金黄色葡萄球菌分离株在选择性压力下,对替加环素耐药性的演变途径和生物学特征的改变。方法使用梯度浓度的替加环素对3株临床金黄色葡萄球菌与1株标准金黄色葡萄球菌菌株(ATCC29213)进行体外替加环素耐药突变体的诱导。同时检测诱导菌株的耐药性变化及耐药相关基因mepRAB操纵子和rpsJ的遗传改变。此外,也对亲代与突变菌株的mepA相对表达量、生长与毒力的适合度代价进行了研究。结果体外诱导突变株的替加环素MIC相较于亲本菌株升高了64-128倍。在转录抑制子mepR和外排泵基因mepA中发现了替换突变,在核糖体S10蛋白编码基因rpsJ中也出现一个K57M氨基酸突变。值得注意的是除了一株菌株以外,其他菌株的生长并未受到体外替加环素耐药诱导的影响。除此之外,替加环素诱导后的金黄色葡萄球菌的毒力以及其他常用抗菌药物MIC也并未受到影响。结论体外诱导的金黄色葡萄球菌的替加环素耐药性演变与外排泵转录抑制子mepR的失功能突变和外排泵编码基因mepA的错义突变有关。我们的研究进一步明确了金黄色葡萄球菌对替加环素的耐药机制,同时报道了在先前研究中未被发现过的突变。

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龙血竭对分离自伤口感染的铜绿假单胞菌的抗菌活性研究

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中国抗生素杂志 2020年第10期45卷 1078-1083页

作者：郑相阔田学斌方人驰陈栎江张思琴陈涛曾未良周铁丽温州医科大学附属第一医院医学检验中心温州325035 温州医科大学检验医学院生命科学学院温州325035

目的探究龙血竭对分离自伤口感染的铜绿假单胞菌的抗菌活性,为临床合理使用龙血竭抗感染治疗提供依据。方法收集2017年温州医科大学附属第一医院分离自伤口标本的铜绿假单胞菌26株,琼脂稀释法检测龙血竭对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MI... 详细信息

目的探究龙血竭对分离自伤口感染的铜绿假单胞菌的抗菌活性,为临床合理使用龙血竭抗感染治疗提供依据。方法收集2017年温州医科大学附属第一医院分离自伤口标本的铜绿假单胞菌26株,琼脂稀释法检测龙血竭对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC);生长曲线试验、半定量结晶紫染色法和细菌泳动试验分别检测龙血竭对铜绿假单胞菌的生长、生物膜形成能力、泳动能力的影响;实时荧光定量PCR方法检测生物膜形成相关基因的表达情况。结果龙血竭对铜绿假单胞菌的MIC值为>5000μg/mL;512μg/mL龙血竭能降低铜绿假单胞菌的生长速率和最大生长量;各浓度的龙血竭能降低铜绿假单胞菌的生物膜形成能力;经龙血竭处理的铜绿假单胞菌的生物膜形成相关基因pslA、pelA、algD、algU的表达量有所降低;铜绿假单胞菌在含≥128μg/mL龙血竭的泳动平板表面的扩散直径减小。结论龙血竭对铜绿假单胞菌的生长具有一定的抑制作用,并能通过降低pslA、pelA、algD、algU基因的表达水平降低其生物膜形成能力,同时可以降低细菌的泳动能力,进而在治疗铜绿假单胞菌所致的伤口感染中发挥作用。

关键词：龙血竭伤口感染铜绿假单胞菌生物膜形成能力

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龙血竭单独和联合左氧氟沙星对分离自伤口感染的铜绿假单胞菌的抗菌活性研究

龙血竭单独和联合左氧氟沙星对分离自伤口感染的铜绿假单胞菌的抗...

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2019年浙江省检验医学学术大会

作者：郑相阔田学斌方人驰陈栎江张思琴陈涛曾未良周铁丽温州医科大学检验医学院、生命科学学院温州医科大学附属第一医院医学检验中心

目的 :了解龙血竭对分离自伤口感染的铜绿假单胞菌的体外抗菌活性,并评价其与左氧氟沙星联合使用的效果,为临床合理使用龙血竭抗感染治疗提供依据。方法 :收集2017年温州医科大学附属第一医院分离自伤口标本的铜绿假单胞菌26株,琼脂稀... 详细信息

目的 :了解龙血竭对分离自伤口感染的铜绿假单胞菌的体外抗菌活性,并评价其与左氧氟沙星联合使用的效果,为临床合理使用龙血竭抗感染治疗提供依据。方法 :收集2017年温州医科大学附属第一医院分离自伤口标本的铜绿假单胞菌26株,琼脂稀释法检测龙血竭和左氧氟沙星对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC);生长曲线试验、半定量结晶紫染色法和细菌泳动试验分别检测龙血竭对铜绿假单胞菌的生长、生物膜形成能力、泳动能力的影响;实时荧光定量PCR方法检测生物膜形成相关基因的表达情况;微量棋盘法联合药敏试验评价龙血竭与左氧氟沙星联合使用对铜绿假单胞菌的作用效果。结果 :龙血竭和左氧氟沙星对铜绿假单胞菌的MIC值分别为>5000μg/mL和0.25μg/mL-256μg/mL;512μg/mL龙血竭能降低铜绿假单胞菌的生长速率和最大生长量;铜绿假单胞菌在含不同浓度龙血竭的LB平板中的生物膜形成能力降低;经龙血竭处理的铜绿假单胞菌的生物膜形成相关基因pslA,pelA,algD,algU的表达量有所降低;铜绿假单胞菌在含≥128μg/mL龙血竭的泳动平板表面的扩散直径减小;龙血竭与左氧氟沙星联合使用对铜绿假单胞菌的部分抑菌浓度指数(FICI)均介于1.0-2.0之间。结论 :龙血竭对铜绿假单胞菌表现出一定的抑菌作用,通过降低pslA,pelA,algD,algU表达水平进而降低生物膜形成能力,同时可以降低细菌的泳动能力,龙血竭与左氧氟沙星联合使用对铜绿假单胞菌表现为无关作用。

关键词：龙血竭伤口感染铜绿假单胞菌生物膜形成能力左氧氟沙星

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肠球菌中磷霉素耐药的分子机制和流行病学研究

肠球菌中磷霉素耐药的分子机制和流行病学研究

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2019年浙江省医学会医学微生物与免疫学分会学术大会

作者：张秀彩毕文姿陈栎江张艺之方人驰曹建明周铁丽温州医科大学附属第一医院医学检验中心浙江大学附属第四医院检验科温州医科大学检验医学院、生命与科学学院

背景肠球菌有可能抵抗几乎所有临床上有用的抗菌药物。随着临床多重耐药细菌的传播和有效的抗菌药物的缺乏,磷霉素作为一种"老药"逐渐引起人们的关注。因此,对耐磷霉素肠球菌的耐药机制和流行病学进行研究是迫切需要的。方法在本研究中...

背景肠球菌有可能抵抗几乎所有临床上有用的抗菌药物。随着临床多重耐药细菌的传播和有效的抗菌药物的缺乏,磷霉素作为一种"老药"逐渐引起人们的关注。因此,对耐磷霉素肠球菌的耐药机制和流行病学进行研究是迫切需要的。方法在本研究中,我们收集了总共761株非重复肠球菌临床分离株,并使用琼脂稀释法检测了磷霉素的耐药性。我们通过抗菌药物敏感性试验检测磷霉素对肠球菌的体外活性,通过聚合酶链反应(PCR),检测编码磷霉素靶酶的murA突变以及实时荧光定量PCR来研究肠球菌对磷霉素的耐药机制。此外,进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分析磷霉素耐药分离株的分子流行病学。结果研究结果显示,本院临床分离的761株临床分离株中鉴定出0.3%(1/372)的粪肠球菌和4.9%(19/389)的屎肠球菌对磷霉素耐药。20株磷霉素耐药肠球菌均携带fosX基因,其中有5株fosB基因阳性,未检出fosA、fosC基因。20株同期分离的敏感株中也均检出fosX基因,未检测到其他fos耐药基因。与磷霉素非耐药标准菌株ATCC29212的MurA序列比对,发现有10株耐药肠球菌存在磷霉素靶酶MurA突变。在6个分离株的MurA中同时发现Cys263Arg和Ser281Gly氨基酸取代。20个磷霉素抗性分离株的PFGE模式显示两个主要簇,其中16个密切相关的分离株具有> 80%的相似性:这些分离株主要是ST78克隆型。结论我们的结果证明fosB基因,磷霉素靶酶MurA的突变和fosX的高水平表达是肠球菌中磷霉素耐药的机制。靶酶可被视为增加磷霉素对病原体的功效的潜在治疗靶标。

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嗜麦芽寡养单胞菌对黏菌素的耐药特征及体外联合抗菌活性研究

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中国抗生素杂志 2020年第5期45卷 508-512页

作者：徐雯雅徐春泉林婕张秀彩曹建明方人驰张艺之周铁丽温州医科大学附属第一医院医学检验中心温州325000 温州医科大学检验医学院生命科学学院温州325035

目的研究黏菌素分别与氯霉素、左氧氟沙星、头孢他啶、米诺环素及复方磺胺甲噁唑联用对多重耐药嗜麦芽寡养单胞菌的体外抗菌活性。方法收集2015-2018年分离自温州医科大学附属第一医院的431株嗜麦芽寡养单胞菌;采用微量肉汤稀释法检测... 详细信息

目的研究黏菌素分别与氯霉素、左氧氟沙星、头孢他啶、米诺环素及复方磺胺甲噁唑联用对多重耐药嗜麦芽寡养单胞菌的体外抗菌活性。方法收集2015-2018年分离自温州医科大学附属第一医院的431株嗜麦芽寡养单胞菌;采用微量肉汤稀释法检测黏菌素对嗜麦芽寡养单胞菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),计算逐年耐药率;通过棋盘法和微量肉汤稀释法检测黏菌素分别与氯霉素、左氧氟沙星、头孢他啶、米诺环素与复方磺胺甲噁唑联用及各自单用时对多重耐药嗜麦芽寡养单胞菌的MIC值,并通过计算部分抑菌浓度指数(FICI)评价联合抑菌效果。结果2015-2018年间,我院嗜麦芽寡养单胞菌对黏菌素的耐药率呈现逐年上升趋势;黏菌素与氯霉素、左氧氟沙星及米诺环素联用后均表现为协同或相加作用;与头孢他啶及复方磺胺甲噁唑联用都存在无关作用,未发现拮抗作用。结论黏菌素与氯霉素、左氧氟沙星、米诺环素联合对多重耐药嗜麦芽寡养单胞菌具有较好的体外抗菌活性,将对临床联合用药治疗多重耐药嗜麦芽寡养单胞菌的选择更具指导意义。

关键词：黏菌素多重耐药嗜麦芽寡养单胞菌联合用药

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Ⅵ型分泌系统在鲍曼不动杆菌致病及耐药性中的作用研究

Ⅵ型分泌系统在鲍曼不动杆菌致病及耐药性中的作用研究

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2019年浙江省检验医学学术大会

作者：喻凯航陈栎江方人驰毕文姿张秀彩张艺之周铁丽曹建明温州医科大学检验医学院生命科学学院温州医科大学附属第一医院医学检验中心浙江大学医学院附属第四医院检验科

目的 :研究Ⅵ型分泌系统(T6SS)在鲍曼不动杆菌致病性和耐药性中的作用。方法 :收集分离自血流感染患者血液标本分离的鲍曼不动杆菌45株,采用ⅥTEK 2 Compact全自动微生物分析仪测定其对临床常用抗菌药物敏感性;PCR检测菌株T6SS主要效应...

目的 :研究Ⅵ型分泌系统(T6SS)在鲍曼不动杆菌致病性和耐药性中的作用。方法 :收集分离自血流感染患者血液标本分离的鲍曼不动杆菌45株,采用ⅥTEK 2 Compact全自动微生物分析仪测定其对临床常用抗菌药物敏感性;PCR检测菌株T6SS主要效应蛋白编码基因hcp的携带情况;对T6SS阳性鲍曼不动杆菌和T6SS阴性鲍曼不动杆菌分别进行生物膜形成能力检测、抗血清试验和体外竞争试验;收集并分析鲍曼不动杆菌血流感染患者的临床资料及转归情况。结果:45株鲍曼不动杆菌中T6SS阳性率为53.3%(24/45);T6SS阳性鲍曼不动杆菌的生物膜形成能力、血清抗性和竞争能力均高于T6SS阴性鲍曼不动杆菌(P<0.05、P<0.01和P<0.05);T6SS阳性鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物的耐药率高于T6SS阴性鲍曼不动杆菌(P<0.05);ICU病房来源鲍曼不动杆菌的T6SS阳性率高于非ICU来源菌株(P<0.05),但鲍曼不动杆菌是否携带T6SS对患者的预后无明显影响(P=0.188)。结论 :T6SS与鲍曼不动杆菌的致病性有关,且较高的耐药率使得治疗极为困难,亟需引起临床尤其是ICU病房的高度重视。

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Ⅵ型分泌系统在鲍曼不动杆菌致病及耐药性中的作用研究

Ⅵ型分泌系统在鲍曼不动杆菌致病及耐药性中的作用研究

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2019年浙江省医学会医学微生物与免疫学分会学术大会

目的研究Ⅵ型分泌系统(T6SS)在鲍曼不动杆菌致病性和耐药性中的作用。方法收集分离自血流感染患者血液标本分离的鲍曼不动杆菌45株,采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪测定其对临床常用抗菌药物敏感性;PCR检测菌株T6SS主要效应蛋白...

目的研究Ⅵ型分泌系统(T6SS)在鲍曼不动杆菌致病性和耐药性中的作用。方法收集分离自血流感染患者血液标本分离的鲍曼不动杆菌45株,采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪测定其对临床常用抗菌药物敏感性;PCR检测菌株T6SS主要效应蛋白编码基因hcp的携带情况;对T6SS阳性鲍曼不动杆菌和T6SS阴性鲍曼不动杆菌分别进行生物膜形成能力检测、抗血清试验和体外竞争试验;收集并分析鲍曼不动杆菌血流感染患者的临床资料及转归情况。结果 45株鲍曼不动杆菌中T6SS阳性率为53.3%(24/45);T6SS阳性鲍曼不动杆菌的生物膜形成能力、血清抗性和竞争能力均高于T6SS阴性鲍曼不动杆菌(P<0.05、P<0.01和P<0.05);T6SS阳性鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物的耐药率高于T6SS阴性鲍曼不动杆菌(P<0.05);ICU病房来源鲍曼不动杆菌的T6SS阳性率高于非ICU来源菌株(P<0.05),但鲍曼不动杆菌是否携带T6SS对患者的预后无明显影响(P=0.188)。结论 T6SS与鲍曼不动杆菌的致病性有关,且较高的耐药率使得治疗极为困难,亟需引起临床尤其是ICU病房的高度重视。

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分离自浙江温州铜绿假单胞菌的黏菌素耐药和异质性耐药机制研究

分离自浙江温州铜绿假单胞菌的黏菌素耐药和异质性耐药机制研究

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2019年浙江省医学会医学微生物与免疫学分会学术大会

作者：林婕徐春泉方人驰曹建明张秀彩赵雅洁董郭枫孙瑶周铁丽浙江省温州市温州医科大学附属第一医院临床检验中心浙江省温州市温州医科大学检验医学院、生命科学学院

目的研究铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)临床分离株的黏菌素耐药和异质性耐药机制。方法从温州医科大学附属第一医院2015-2017年住院患者分离出736株铜绿假单胞菌分离株。通过微量肉汤稀释法测定黏菌素耐药性。菌谱分析法(PAP)... 详细信息

目的研究铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)临床分离株的黏菌素耐药和异质性耐药机制。方法从温州医科大学附属第一医院2015-2017年住院患者分离出736株铜绿假单胞菌分离株。通过微量肉汤稀释法测定黏菌素耐药性。菌谱分析法(PAP)评估黏菌素异质性耐药。进行时间杀菌试验。聚合酶链反应(PCR)测序检测耐药和异质性耐药分离株中的耐药基因,荧光定量PCR (qRT-PCR)确定它们的表达水平。通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)进行同源性分析。MALDITOF MS分析脂质A谱。结果本研究分别筛选出2株黏菌素耐药株和9株黏菌素异质性耐药株。2株耐药株中检测到PmrB突变。在9株异质性耐药分离株中,有8株具有非同义PmrB突变,2株分离株存在PhoQ改变,其中1株同时存在PmrB和PhoQ突变。qRT-PCR结果表明,在PmrB-或(和)PhoQ-突变的分离株中pmrA或phoP表达水平均上调,且所有分离株pmrH基因的转录水平增加。MALDI-TOFMS分析表明(异质性)耐药分离株中脂质A谱存在额外的4-氨基-4-脱氧-L-阿拉伯糖(L-Ara4N)部分。结论综上所述,本研究中铜绿假单胞菌的黏菌素耐药和异质性耐药都与PmrAB和PhoPQ调控系统的改变有关。与脂质A合成相关基因的突变与脂质A成分的修饰之间存在密切相关性。未来将进一步关注铜绿假单胞菌从异质性耐药向完全耐药的转变。

关键词：铜绿假单胞菌黏菌素耐药性异质性耐药分子机制脂质A修饰

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关于快速多粘菌素NP法检测黏菌素耐药鲍曼不动杆菌的性能评估与改良估

关于快速多粘菌素NP法检测黏菌素耐药鲍曼不动杆菌的性能评估与改...

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2019年浙江省医学会医学微生物与免疫学分会学术大会

作者：方人驰田学斌陈栎江赵雅洁郑相阔王冲董郭枫刘海洋曹建明周铁丽温州医科大学附属第一医院医院医学检验中心温州医科大学检验医学院、生命科学学院

背景鲍曼不动杆菌对多粘菌素耐药性的出现正成为临床治疗中不可忽视的挑战。由于多粘菌素在琼脂中的扩散能力较低,E-test和纸片扩散法等常规药敏试验的结果并不可靠,而微量肉汤稀释法的耗时长以及操作要求高。近期,Nordmann和Poirel开...

背景鲍曼不动杆菌对多粘菌素耐药性的出现正成为临床治疗中不可忽视的挑战。由于多粘菌素在琼脂中的扩散能力较低,E-test和纸片扩散法等常规药敏试验的结果并不可靠,而微量肉汤稀释法的耗时长以及操作要求高。近期,Nordmann和Poirel开发了一种快速检测(2小时)肠杆菌科细菌多粘菌素耐药性的方法。我们的研究目的在于评估使用该方法检测鲍曼不动杆菌的黏菌素耐药性(多粘菌素E)的可行性。方法对共计28株2014-2015年间收集自温州医科大学附属第一医院的不同标本的鲍曼不动杆菌分离株进行检测。根据我们的实验设计需要,轻微调整快速多粘菌素NP法,观察三个分别含有1%、2%和4%葡萄糖的分组24小时。通过PH指示剂的颜色改变解释结果。结果 4小时内所有待测分离株含/不含黏菌素的孔均显示微弱/无颜色变化。当孵育至16小时,与微量肉汤稀释法相比,含4%葡萄糖组具有较高的粗一致率(92.86%),敏感性(100%)和特异性(90%)。结论快速多粘菌素NP法无法快速确定鲍曼不动杆菌的黏菌素敏感性,但通过适量增加葡萄糖浓度和延长孵育时间可以使结果与参考方法结果高度一致。调整后的快速多粘菌素NP法在鲍曼不动杆菌黏菌素敏感性的检测中具有潜在的临床应用价值。

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