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不同嫩度牦牛背最长肌中SERPINE1基因克隆、生物信息学及表达分析

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中国畜牧兽医 2024年第6期51卷 2308-2318页

作者：敬科民张鹏李雨谦田园董文静柴志欣王吉坤钟金城蔡欣西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省/教育部重点实验室成都610041

【目的】克隆牦牛丝氨酸蛋白酶抑制剂家族E成员1(serpin family E member 1,SERPINE1)基因序列,同时探究不同嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因核苷酸序列差异,为进一步研究其对牦牛肉嫩度的影响提供试验数据。【方法】根据GenBank中... 详细信息

【目的】克隆牦牛丝氨酸蛋白酶抑制剂家族E成员1(serpin family E member 1,SERPINE1)基因序列,同时探究不同嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因核苷酸序列差异,为进一步研究其对牦牛肉嫩度的影响提供试验数据。【方法】根据GenBank中牦牛SERPINE1基因序列设计特异性引物,通过PCR扩增克隆获得高、低嫩度牦牛背最长肌中的SERPINE1基因序列全长,并对其结构及编码蛋白进行生物信息学分析,通过实时荧光定量PCR检测不同嫩度牦牛背最长肌中SERPINE1基因表达量。【结果】高、低嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因全长分别为8 315和8 318 bp,均编码402个氨基酸且氨基酸序列完全相同。高、低嫩度背最长肌组织中SERPINE1基因非编码序列中存在3个碱基缺失及22个碱基突变(4个碱基颠换、18个碱基转换)。牦牛SERPINE1基因核苷酸序列与普通牛、瘤牛、美洲野牛、绵羊、山羊、家猪、人、小鼠的相似性分别为99.26%、99.26%、99.59%、96.94%、97.02%、90.49%、86.52%和80.10%。SERPINE1蛋白是一个含有23个氨基酸信号肽的亲水性稳定膜外蛋白,位于细胞外,具有34个潜在磷酸化位点,包含1个反应中心环(reactive center loop, RCL)。SERPINE1蛋白二级结构主要由α-螺旋(44.78%)和无规则卷曲(35.32%)构成。实时荧光定量PCR结果显示,SERPINE1基因在高嫩度牦牛背最长肌中表达量极显著高于低嫩度牦牛背最长肌(P<0.01)。【结论】本研究成功从高、低嫩度牦牛背最长肌组织中克隆SERPINE1基因全长并进行了生物信息学特征分析,为后续研究SERPINE1基因参与调控牦牛肉嫩度机制提供理论参考。

关键词：牦牛 SERPINE1基因嫩度生物信息学表达

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FGFs/FGFRs及其介导信号通路基因的异常表达影响犏牛未分化精原细胞增殖活性

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畜牧兽医学报 2023年第7期54卷 2886-2897页

作者：张鹏王明秀敬科民彭巍田园李雨谦付长其舒适钟金城蔡欣西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省、教育部重点实验室成都610041 青海大学畜牧兽医科学院西宁810016

旨在研究FGFs(fibroblast growth factors)/FGFRs(fibroblast growth factor receptors)及其介导的Ras和MAPK信号通路基因在牦牛和犏牛未分化精原细胞的差异表达,以探讨犏牛生精停滞的原因。本研究采集健康的24月龄3头公麦洼牦牛和3头F... 详细信息

旨在研究FGFs(fibroblast growth factors)/FGFRs(fibroblast growth factor receptors)及其介导的Ras和MAPK信号通路基因在牦牛和犏牛未分化精原细胞的差异表达,以探讨犏牛生精停滞的原因。本研究采集健康的24月龄3头公麦洼牦牛和3头F1代公犏牛的睾丸组织,分为牦牛和犏牛两个样品组,每组3个生物学重复。采用HE染色检测牦牛和犏牛精子发生的差异;采用细胞群体倍增时间、CCK-8和EDU染色检测牦牛和犏牛未分化精原细胞增殖能力的差异;采用荧光定量PCR检测6种FGF家族成员、3种FGFR、FGFs/FGFRs介导的Ras和MAPK信号通路基因在牦牛和犏牛未分化精原细胞中的差异表达。与牦牛相比,犏牛生精小管发育异常,生殖细胞类型单一,未分化精原细胞增殖活性显著低于牦牛(P<0.05)。FGF2、FGF4、FGF5、FGF8、FGF9和FGF21在犏牛睾丸组织及FGFs受体FGFR1、FGFR2和FGFR3在犏牛未分化精原细胞的表达都显著低于牦牛(P<0.01)。FGFs/FGFRs介导Ras信号通路基因中,除HRas和ARaf以外,其余基因(Raf1、BRaf、MEK1和ERK)都是在犏牛未分化精原细胞中以更低的水平表达(P<0.01)。FGFs/FGFRs介导MAPK信号通路基因中,p38、MEKK3、MEKK6和ASK1也是在犏牛未分化精原细胞中低表达(P<0.01)。受Ras通路调控的与细胞增殖相关的基因中,只有SHISA6、ID4在犏牛未分化精原细胞中高表达(P<0.01),其余基因(TAF4B、Etv4、GFRα1和Ret)都是在牦牛未分化精原细胞中表达量高(P<0.01)。受Ras和MAPK通路共同调控的与细胞增殖相关的基因中,ETV5和BCL6B都是在牦牛未分化精原细胞中高表达(P<0.01)。受Ras通路调控的与细胞分化相关的基因中,除PIWIL4外,SOX3、NGN3和Stra8都在牦牛未分化精原细胞中高表达(P<0.01)。因此FGFs/FGFRs及其介导的Ras和MAPK通路基因在犏牛未分化精原细胞中的异常表达,降低了未分化精原细胞增殖活性,导致了犏牛没有足够数量的未分化精原细胞进入分化阶段。这可能是犏牛生精停滞的重要原因之一。

关键词：成纤维细胞生长因子未分化精原细胞信号通路细胞增殖犏牛牦牛

BMP4在牦牛和犏牛睾丸组织及支持细胞中的差异表达分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2023年第4期51卷 8-15,44页

作者：王明秀张鹏陈雪梅敬科民刘欣睿钟金城蔡欣西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省教育部重点实验室四川成都610041

【目的】从牦牛和犏牛睾丸组织中分离培养支持细胞,检测骨形态发生蛋白4基因(BMP4)及其受体基因在牦牛、犏牛睾丸组织及支持细胞中的表达情况,为深入研究BMP4对犏牛精子发生过程的作用提供理论基础。【方法】采集12月龄牦牛和犏牛睾丸组... 详细信息

【目的】从牦牛和犏牛睾丸组织中分离培养支持细胞,检测骨形态发生蛋白4基因(BMP4)及其受体基因在牦牛、犏牛睾丸组织及支持细胞中的表达情况,为深入研究BMP4对犏牛精子发生过程的作用提供理论基础。【方法】采集12月龄牦牛和犏牛睾丸组织,使用Trizol法提取各睾丸组织总RNA,利用RT-PCR技术检测BMP4及其受体基因(骨形态发生蛋白受体1B型(ALK6)、骨形态发生蛋白受体2型(BMPR2)、激活素A受体2A型(ACVR2A)、激活素A受体2B型(ACVR2B))的mRNA表达水平。通过两步酶法消化睾丸组织制备细胞悬液,经差速贴壁、饥饿处理和胰酶消化分离纯化牦牛和犏牛睾丸支持细胞。采用HE染色、油红O染色、碱性磷酸酶(ALP)染色、免疫荧光染色鉴定支持细胞,用Trizol法提取细胞总RNA,RT-PCR检测支持细胞、生精细胞、间质细胞、类肌细胞标志基因和BMP4及其受体基因的mRNA表达水平。采用实时荧光定量PCR检测BMP4及其受体基因在牦牛和犏牛睾丸支持细胞中的差异表达情况。【结果】HE染色结果显示,第3代(F3)支持细胞呈长条形或梭形。油红O染色结果显示,体外培养的细胞胞质中有明显脂滴积累,且在细胞核内可观察到支持细胞特有的双极小体结构。ALP染色结果显示,细胞不着色。免疫荧光染色结果显示,支持细胞标志蛋白GATA结合蛋白4(GATA4)呈阳性表达。RT-PCR检测结果显示,支持细胞标志基因BMP4、SRY-box转录因子9基因(SOX9)、波形蛋白基因(Vimentin)、Wilm肿瘤抑制基因(WT1)、FAS细胞表面死亡受体基因(FAS)和胶质细胞源性神经营养因子基因(GDNF)存在明显表达,而生精细胞标志基因出局区解旋酶4(DDX4)和类肌细胞标志基因半胱氨酸的血管生成诱导剂61(CYR61)无明显表达,间质细胞标志基因细胞色素P450家族11亚家族A成员1(CYP11A1)则有少量表达。BMP4在牦牛和犏牛睾丸支持细胞中都有表达,且在牦牛支持细胞中的表达量显著高于犏牛支持细胞,而其受体基因ALK6、BMPR2、ACVR2A和ACVR2B在牦牛支持细胞中的表达量显著或极显著低于犏牛支持细胞。【结论】从牦牛和犏牛睾丸组织中分离获得支持细胞,BMP4在牦牛支持细胞中表达量较高,暗示BMP4对犏牛精子发生具有潜在调控作用。

关键词：牦牛犏牛骨形态发生蛋白4基因支持细胞动物遗传育种

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海藻酸钠/明胶/聚乙烯醇-CaSiO3复合水凝胶制备用于加速伤口愈合的研究

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海藻酸钠/明胶/聚乙烯醇-CaSiO3复合水凝胶制备用于加速伤口愈合...

作者：潘敬科成都大学

学位级别：硕士

在调节伤口愈合及再生过程中,皮肤起着至关重要的作用。当皮肤破损,其保护功能失去作用,从而导致伤口的形成。现如今,临床上大多使用的传统敷料成本低,但其具有保湿特性,容易吸收伤口处的渗出液从而与肉芽组织相互粘黏,在更换过程中易... 详细信息

在调节伤口愈合及再生过程中,皮肤起着至关重要的作用。当皮肤破损,其保护功能失去作用,从而导致伤口的形成。现如今,临床上大多使用的传统敷料成本低,但其具有保湿特性,容易吸收伤口处的渗出液从而与肉芽组织相互粘黏,在更换过程中易于对伤口造成二次伤害。随着对水凝胶的研究不断深入,制备出具有良好的生物相容性及加速伤口修复的水凝胶敷料成为了研究热点。因此,本文提供了一种新的思路,选择以海藻酸钠/明胶/聚乙烯醇为基底材料,协同封装生物活性生长因子硅酸钙（CS）。制备出不同比例的硅酸钙复合水凝胶,通过分析复合水凝胶的理化性质和生物学评价,并且通过大鼠背部创面修复实验验证愈合效果。为了在生理条件下更易于凝胶化以及提升水凝胶的黏附能力,分别通过添加二价阳离子交联剂(Ca)与海藻酸钠进行物理交联以及添加低浓度戊二醛与明胶进行化学交联交联。同时,添加聚乙烯醇可改善材料的机械性能,以及具有良好的生物相容性,并且能够缓释硅酸钙生长因子。通过对复合水凝胶理化性能等表征:利用扫描电镜、傅里叶红外、X射线衍射、力学性能、亲水性、溶胀性能、降解以及离子释放对复合水凝胶（PSG）进行检测分析;并通过将复合水凝胶与细胞进行共培养,对其生物相容性、细胞增殖以及细胞黏附,来评价复合水凝胶的生物学性能;构建大鼠背部伤口皮肤损伤模型,观察实验大鼠创面修复,利用H&M染色和Masson染色检测伤口皮肤组织重新上皮化状况和各组肉芽组织中的胶原沉积量,考察了愈合过程中Ki67和CD31免疫组化染色检测创面新增殖细胞和再生血管。实验结果表明:通过双交联后的复合水凝胶具有优异的凝胶特性。由扫描电镜分析可知,复合水凝胶断面表现出为网络贯通结构,当加入0.5%的CS时,复合水凝胶内部结构收缩,而CS含量为0.1%,CS无法均匀负载到复合水凝胶内部,这可能降低力学性能。红外光谱和X射线衍射分析可知,经交联处理后,复合水凝胶的组分和结构稳定,未有新物质产生,且其晶体结构没有被破坏。制备的复合水凝胶有着良好的亲水性,随着CS的加入,能有效调节其溶胀性能。随着CS含量增加,复合水凝胶的拉升强度逐渐升高而后降低,且PSG-0.3%复合具有最水凝胶大拉伸强度（455.65±52.21KPa）。生物实验表明:CCK-8细胞增殖及毒性检测结果表明各组分支架均是无毒的,均表现出优异的细胞增殖的能力,且添加了CS的支架对细胞增殖表现出明显的促进作用。PSG/CS复合水凝胶支架显著的刺激了成纤维细胞的增殖,表明支架具有优良的细胞相容性与细胞黏附性。此外,通过大鼠背部伤口的模型,在第6天和12天后取材,对不同组分伤口拍照宏观对比,以及伤口组织进行了组织学和免疫组织化学的染色,结果证明:CS对创面修复具有很大的促进作用,这可能是由于CS水凝胶具有血管生成、细胞增殖、诱导细胞外基质（ECM）形成的综合作用,水凝胶创面敷料提供了足够的水分,并在创面上建立了渗出物。PSG/CS复合水凝胶具有减少感染伤口部位炎症反应、加速胶原蛋白沉积并促进上皮组织修复,从而加快慢性感染伤口的愈合。PSG/CS复合水凝胶在加速创面修复促进血管生成和新生细胞生成方面的优势。因此,这种复合水凝胶在加速伤口愈合中具有很大的潜力。

关键词：天然生物材料合成生物材料硅酸盐血管生成伤口愈合

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2023,谁是显眼包

中国石油石化 2024年第5期 16-29页

作者：敬民不详

2023年全球迎来新冠疫情防控转段,经济复苏成为各国关键词。但新冠疫情留下的“疤痕效应”,难以完全退去。在此情形下,全球油气市场受制于俄乌冲突、美西方制裁、新一轮巴以冲突等多方因素扰动,导致供需不平衡加剧、价格波动频繁,市场... 详细信息

2023年全球迎来新冠疫情防控转段,经济复苏成为各国关键词。但新冠疫情留下的“疤痕效应”,难以完全退去。在此情形下,全球油气市场受制于俄乌冲突、美西方制裁、新一轮巴以冲突等多方因素扰动,导致供需不平衡加剧、价格波动频繁,市场行情充满不确定性。

关键词：供需不平衡巴以冲突疫情防控市场行情价格波动不确定性经济复苏西方制裁

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核磁共振测速技术在燃料组件冷却剂通道流场实验研究的应用

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实验流体力学 2024年

作者：王子瑞张科段敬添武俊梅兰治科西安交通大学航天航空学院西安交通大学复杂服役环境重大装备结构强度与寿命全国重点实验室西安交通大学陕西省先进飞行器服役环境与控制重点实验室中国核动力研究设计院

核磁共振成像测速技术（Magnetic Resonance Velocimetry, MRV）作为复杂结构内三维全流场测量的前沿技术，是流场可视化研究、流动换热机理分析和数值模型验证的重要手段。近年来，MRV技术也被应用于核反应堆堆芯燃料组件冷却剂通道流... 详细信息

核磁共振成像测速技术（Magnetic Resonance Velocimetry, MRV）作为复杂结构内三维全流场测量的前沿技术，是流场可视化研究、流动换热机理分析和数值模型验证的重要手段。近年来，MRV技术也被应用于核反应堆堆芯燃料组件冷却剂通道流场实验研究中，为堆芯热工水力性能研究和安全分析提供基础数据。本文整理了MRV技术在堆芯燃料组件冷却剂通道流场实验中的研究进展，在雷诺数12 500和25 000工况下，利用MRV技术对2×2简单棒束燃料组件冷却剂通道内的全空间三维流场进行了测量，并与文献中相同模型的PIV测量结果进行了定量对比，研究影响MRV测量精度的关键参数。研究结果表明：MRV技术可以精确解析棒束通道全空间三维流场，本文棒束通道内无量纲轴向速度的MRV测量结果与文献中PIV测量结果的最大误差为5.05%。

关键词：核磁共振测速实验技术棒束通道三维流场测量

中国西南地区CCUS区域中心建设路径与政策建议

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天然气工业 2024年第4期44卷 171-179页

作者：文绍牧李森圣何润民敬兴胜王盟浩胡俊坤中国石油西南油气田公司中国石油西南油气田公司天然气经济研究所中国石油西南油气田公司发展计划部

西南地区正在加快推动成渝地区双城经济圈和国家天然气(页岩气)千亿立方米产能基地等国家战略实施,面临能源消费量增长硬需求和碳减排硬约束之间的矛盾,推动CCUS产业发展是解决该问题的必由之路,而建设CCUS区域中心是CCUS产业规模化、... 详细信息

西南地区正在加快推动成渝地区双城经济圈和国家天然气(页岩气)千亿立方米产能基地等国家战略实施,面临能源消费量增长硬需求和碳减排硬约束之间的矛盾,推动CCUS产业发展是解决该问题的必由之路,而建设CCUS区域中心是CCUS产业规模化、集群化发展的必然趋势,其中四川盆地是西南地区打造CCUS区域中心的最佳选择。为了加快建设中国西南地区CCUS区域中心,系统梳理了国外的经验做法,分析了其优势和挑战,结合我国西南地区的CO_(2)排放及分布情况、封存地质条件、源汇匹配关系,针对性提出了建设路径和政策建议。研究结果表明:①打造中国西南地区CCUS区域中心具有企业减碳和增产的需求巨大、高耗能行业企业碳源丰富且较为集中、地质封存潜力大且分布集中、源汇匹配情况较好、地方政府积极支持等5大优势;②当前面临的主要问题是缺乏顶层设计和统一规划、缺乏全产业链协同技术攻关的共享平台、缺乏碳减排的激励和约束政策体系等;③下一步应聚焦CCUS-EGR、CCS、DACCS等3条路径,分启动、扩展、规模化发展3个阶段打造西南地区CCUS区域中心,形成两个千万吨级产业集群和3个百万吨级产业集群,并比选技术路径和商业化路径。结论认为,要重点从完善顶层设计,出台统一的战略规划;强化科技攻关体系建设,加快形成技术成熟、经济可行的CCUS全链条技术;强化政策支持、推动国际合作等3个方面入手,加快推动中国西南地区CCUS区域中心建设。

关键词：西南地区四川盆地 CCUS 区域中心产业集群源汇匹配建设路径政策建议

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燃气事故连发,漏洞在哪儿

中国石油石化 2024年第9期 42-43页

作者：敬民不详

近期一连串发生的燃气爆炸事故,为城市燃气安全管理敲响了警钟。我国是天然气消费大国,2023年天然气消费接近4000亿立方米。随着“双碳”目标的提出和实施力度的加大,天然气消费将保持较长时期平稳增长。这其中包括城镇中天然气对液化... 详细信息

近期一连串发生的燃气爆炸事故,为城市燃气安全管理敲响了警钟。我国是天然气消费大国,2023年天然气消费接近4000亿立方米。随着“双碳”目标的提出和实施力度的加大,天然气消费将保持较长时期平稳增长。这其中包括城镇中天然气对液化石油气和人工煤气的替代。在此形势下,燃气安全事故预防及处置的重要性日益突出。

关键词：天然气消费平稳增长人工煤气燃气爆炸燃气事故液化石油气实施力度

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2024，哪块更抢眼

中国石油石化 2024年第5期 26-29页

作者：敬民

地缘政治风险仍在，石油市场将在不确定性的环境中追求进步。时光的隧道步入2024年，疫情之后各行业面临着复苏的冲动。然而，地缘政治风险加大、疫情的阴影依旧是造成世界经济增长放缓的重大元凶。2024年，国际石油市场究竟会怎样？地...

地缘政治风险仍在，石油市场将在不确定性的环境中追求进步。时光的隧道步入2024年，疫情之后各行业面临着复苏的冲动。然而，地缘政治风险加大、疫情的阴影依旧是造成世界经济增长放缓的重大元凶。2024年，国际石油市场究竟会怎样？地缘政治难平，欧佩克依旧保持限产保价2023年俄乌冲突扰动欧洲的同时，中东地区再次被“点燃”，1973年赎罪日战争后烈度最大的巴以冲突再次爆发且持续发酵。就目前局势看，巴以冲突短期内难有平息的可能，很有可能演变成拉锯战，当事双方你来我往，影响区域安全，红海及曼德海峡成为高风险区。

关键词：