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yRad52、Ad4 E1B55K和Ad4 E4orf6与Cas9共表达、融合表达对HDR效率的影响

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yRad52、Ad4 E1B55K和Ad4 E4orf6与Cas9共表达、融合表达对HDR效...

作者：房圆圆西北农林科技大学

学位级别：硕士

CRISPR/Cas9系统作为新一代基因组编辑工具问世以来,引起了生命科学领域的狂潮,特别是在哺乳动物细胞中的应用。哺乳动物细胞通过多种途径修复双链断裂（Double strand break,DSB）,主要包括易错的非同源末端连接（Non-homologous end j... 详细信息

CRISPR/Cas9系统作为新一代基因组编辑工具问世以来,引起了生命科学领域的狂潮,特别是在哺乳动物细胞中的应用。哺乳动物细胞通过多种途径修复双链断裂（Double strand break,DSB）,主要包括易错的非同源末端连接（Non-homologous end joining,NHEJ）和高保真的同源介导修复（Homology-directed repair,HDR）途径。通过CRISPR/Cas9成DSB后,主要通过NHEJ途径进行修复,这种途径易引入随机性的插入或缺失,是一种不精确的修复方式。在提供与目标基因座同源性的DNA模板的情况下,HDR途径则可以实现精确的基因组编辑。然而,HDR参与DSB修复的效率要远低于NHEJ。HDR的低效性仍然是精确基因组编辑技术的瓶颈,如何提高HDR效率成为研究者探索的热点。近年来,科学家们研究出多种策略来提高HDR效率,如抑制NHEJ通路、强化HDR通路、控制细胞周期等,均可在不同程度上提高HDR效率。本研究在相关研究的基础上,成功将酿酒酵母源Rad52（yRad52）、腺病毒4（Ad4）E4orf6和Ad4 E1B55K蛋白分别整合在CRISPR/Cas9系统中,比较了Cas9蛋白与重组蛋白yRad52、Ad4 E4orf6、Ad4 E1B55K蛋白共表达策略和融合表达策略对HDR效率的影响,期望为提高基因组精确编辑效率提供新的技术手段。本研究的主要结果如下:1.为了在报告载体水平上初步验证猜想,设计并构建了HDR效率检测荧光报告系统。将构建好的Cas9与yRad52蛋白、Ad4 E1B55K、Ad4 E4orf6蛋白共表达载体、融合表达载体分别与报告载体以及供体载体共转染至HEK293T细胞中,通过流式细胞仪分析荧光细胞数比较各组细胞HDR效率。对流式数据进行统计学分析,结果表明,在报告载体水平上,融合表达Cas9-Rad52能够使HDR效率显著增强约1.5倍,共表达Cas9-T2A-E4使HDR效率增强约1.4倍。2.在基因组水平进一步验证结论,将Cas9与yRad52蛋白、Ad4 E1B55K、Ad4E4orf6蛋白共表达载体、融合表达载体分别与HDR-USR1报告载体以及供体载体共转染HEK293T细胞,对EMX1位点进行点编辑,HDR-USR1是实验室新研发的通用筛选报告载体,可对HDR阳性细胞进行筛选富集。酶切结果灰度分析得出,融合表达Cas9-Rad52在HEK293T细胞基因组EMX1位点HDR效率为17.1±0.5%,较对照组增强约2倍;共表达Cas9-T2A-Rad52、Cas9-T2A-E1B的HDR效率为12.3±0.7%、12.1±0.7%,较对照组增强约1.4倍。3.将Cas9-Rad52融合表达载体与Ad4 E1B55K蛋白联合使用,灰度分析结果显示其HDR效率为16.3%,较对照组提高3.9倍,表明在HEK293T细胞EMX1位点,yRad52蛋白与Ad4 E1B55K蛋白具有协同作用,可进一步提高HDR精确编辑效率。总之,Cas9与yRad52的共表达、融合表达策略以及Cas9-T2A-E1B共表达策略均可以增强哺乳动物细胞基因组中的HDR效率,其中融合表达Cas9-Rad52增强效果最强。并且yRad52与Ad4 E1B55K蛋白的联合使用对促进HDR效率具有协同作用。本研究为提高HDR精确编辑效率提供了有效策略,有助于推动基因编辑在基础功能研究、精准医疗以及动物遗传育种方面的应用。

关键词： CRISPR/Cas9系统 HDR Cas-Rad52融合表达 Cas9-T2A-E1B共表达协同作用

当前我国机构养老的发展态势及对策研究 ——以太仓市Y护理院为例

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当前我国机构养老的发展态势及对策研究 ——以太仓市Y护理院为例

作者：房圆圆安徽大学

学位级别：硕士

人口老龄化是社会发展到一定阶段的必然产物,我国自20世纪90年代就已步入人口老龄化时代。随之而来的是老年群体的养老问题,它关系着国家与社会的和谐与稳定、进步与发展。而当前我国的养老模式发展相对薄弱,文章以太仓市Y护理院为研究... 详细信息

人口老龄化是社会发展到一定阶段的必然产物,我国自20世纪90年代就已步入人口老龄化时代。随之而来的是老年群体的养老问题,它关系着国家与社会的和谐与稳定、进步与发展。而当前我国的养老模式发展相对薄弱,文章以太仓市Y护理院为研究对象。借助调查法、访谈法等专业研究方法了解了老人的养老需求。并收集了原始资料与数据,在社会工作专业价值观与相关理论的支撑下开展了具体的研究工作,旨在通过研究来发现机构养老发展过程中面临的问题。并探索出一条适合机构养老的发展对策,为老人营造一个舒心的养老环境,并为日后的探索与研究打下基础。文章大致分为四个章节。第一章,首先从文章的研究背景入手,介绍了当前我国人口老龄化的现状、机构养老的发展契机以及选择研究Y护理院的具体原因。其次,介绍了研究机构养老发展态势与对策的重要意义,指明了研究目的。第三,通过查阅相关文献资料,对国内外有关机构养老发展的研究现状进行了阐述,突出了进行研究的价值和必要性。最后,介绍了支撑本次研究的理论依据和研究方法,并对研究的具体思路进行了介绍,为后续的实证研究打下了坚实的学术基础。文章第二章是通过前期数据资料收集与实地调研,了解了太仓市Y护理院机构养老的基本情况,具体包括机构养老的类型与特点、Y护理院的规模、入住条件等基本信息,为接下来的分析研究提供了资料和数据基础。第三章,运用SWOT分析工具,对太仓市Y护理院的发展情况展开了分析讨论。通过分析,有助于我们清晰地把握全局,明确Y护理院在发展过程中内部资源的优势与劣势,抓住外界环境提供的机遇并尽可能防范潜藏的风险,这对Y护理院的稳步发展具有极其重要的意义。第四章,主要是针对SWOT分析结果中的W(Weaknesses,劣势)、T(Threats,风险),从政府、机构和社会三方面提出了一系列应对策略,如:加大政府支持力度,注重资源链接及社会工作专业人才培养等。紧接着,对实际研究进行了整理与总结,认识到促进机构养老的发展是满足灵活多样的机构养老服务需求的永恒主题。另外,对未来机构养老的发展进行了展望和思考。综上所述,在当前人口老龄化程度日益严峻的大背景下,解决好人们的养老问题是当前工作的重心,社会工作者作为主力军在其中发挥着至关重要的作用。文章以满足服务对象的需求为出发点和落脚点。通过借鉴国内外先进发展经验,注重多渠道资源链接,不断引进社工专业人才,建立入住老人的支持网络等途径可以有效完善机构养老模式。为此,经过前期调研与资料整理分析,我们可以有效把握老年人的实际养老需求。实践证明,以老人的需求为研究核心,探索研究适合太仓市Y护理院的发展对策,顺应了时代发展的趋势,能够满足人们对养老服务的多样性、专业性需求。这为日后的研究提供了参考依据,为机构养老的发展与完善打下了基础,促进了养老服务体系的健全和社会工作专业的发展。

关键词：机构养老发展态势 SWOT理论

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新时代大学生法治素养培育研究

新时代大学生法治素养培育研究

作者：房圆圆西安工业大学

学位级别：硕士

党的二十大报告提出“全面依法治国是国家治理的一场深刻革命”,习近平总书记强调“要使尊法、信法、守法、用法、护法成为全体人民的共同追求和自觉行动”,并指出“要提高全民族法治素养”。大学生法治素养的培育与法治中国建设进程紧... 详细信息

党的二十大报告提出“全面依法治国是国家治理的一场深刻革命”,习近平总书记强调“要使尊法、信法、守法、用法、护法成为全体人民的共同追求和自觉行动”,并指出“要提高全民族法治素养”。大学生法治素养的培育与法治中国建设进程紧密相连,是全民法治素养提升的关键一环。在新时代的背景下,全面依法治国的目标和任务对大学生的法治素养提出了更高的要求和期望,培育大学生法治素养不仅是高校思想政治工作的重要任务,更是全面推进法治社会建设的关键内容和全面依法治国的必然要求。基于马克思恩格斯法治理论、习近平法治思想和中华优秀传统法治文化的理论基础,聚焦于新时代大学生法治素养的培育,通过法治认知、法治情感、法治意志和法治行为四个维度探索新时代大学生法治素养培育,有利于推进法治建设、构建社会主义现代化国家;有利于凝聚共同价值,践行社会主义核心价值观;有利于实现依法治校,落实立德树人的根本任务;有利于培育时代新人,促进人的全面发展。尽管我国在法治建设上已取得显著成就,但在大学生法治素养培育方面,仍需保持清醒认识。新时代大学生法治素养具有提升空间,在考察其存在问题及成因的基础上从国家、学校、社会、家庭和个人五个层面进行深入剖析和系统分析,构建一个全方位、多层次的法治素养培育体系。具体而言,国家领航,确立新时代大学生法治素养培育的战略导向;学校主导,构建新时代大学生法治素养培育的系统工程;社会联动,汇聚新时代大学生法治素养培育的多元力量;家庭助力,筑牢新时代大学生法治素养培育的家庭基础;学生自主,激发新时代大学生法治素养培育的内在动力。提升新时代大学生的法治素养,为推进法治中国建设贡献智慧和力量,为实现中华民族伟大复兴的中国梦提供坚实的人才保障。

关键词：新时代大学生法治素养培育

考虑受拉薄膜效应的板块平衡法修正及在混凝土双向板中的应用

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工程力学 2017年第3期34卷 204-210,240页

作者：张大山董毓利房圆圆华侨大学土木工程学院福建厦门361021

经典塑性铰线理论中的板块平衡法无法考虑钢筋混凝土板在大变形时产生的受拉薄膜效应的影响。为解决这一问题,该文提出了一种可以考虑受拉薄膜效应的修正板块平衡法。该方法将钢筋混凝土板的受力行为分为屈服前和屈服后两个阶段。假设... 详细信息

经典塑性铰线理论中的板块平衡法无法考虑钢筋混凝土板在大变形时产生的受拉薄膜效应的影响。为解决这一问题,该文提出了一种可以考虑受拉薄膜效应的修正板块平衡法。该方法将钢筋混凝土板的受力行为分为屈服前和屈服后两个阶段。假设钢筋混凝土板在屈服前的变形为弹性,分别采用Navier法和板块平衡法确定板的屈服挠度和屈服承载力。为考虑屈服后钢筋混凝土板中产生的受拉薄膜效应,假设板底塑性铰线截面上钢筋的竖向分力为产生受拉薄膜效应的主要原因,而钢筋的水平分力则与截面上混凝土的压力组成力偶构成了钢筋混凝土板的截面抵抗弯矩。通过上述修正,可以获得由考虑受拉薄膜效应的修正板块平衡法计算的钢筋混凝土板的全过程荷载-挠度曲线。为验证该文方法,对大挠度足尺混凝土双向板进行了应用研究。通过对比可知,理论分析结果与试验结果较为接近,从而验证了修正板块平衡法的有效性。

关键词：混凝土双向板受拉薄膜效应板块平衡法 Navier法大挠度

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普通钢板墙柱型剪切耗能装置抗震性能研究

工程力学 2017年第5期34卷 84-94页

作者：张大山董毓利房圆圆秦德峰华侨大学土木工程学院厦门361021 西南电力设计院有限公司成都610021

提出了一种上、下由普通钢板焊接的刚度较大的约束板、中部核心耗能区段由退火热处理后的普通钢板制作的墙柱型剪切耗能装置。完成了不同加劲肋方式的8个足尺试件的拟静力试验,并从滞回曲线、承载力、延性等方面分析耗能装置的抗震性能... 详细信息

提出了一种上、下由普通钢板焊接的刚度较大的约束板、中部核心耗能区段由退火热处理后的普通钢板制作的墙柱型剪切耗能装置。完成了不同加劲肋方式的8个足尺试件的拟静力试验,并从滞回曲线、承载力、延性等方面分析耗能装置的抗震性能。研究表明:该装置具有初始刚度大、承载力高和耗能性能优良等特点;改变中间耗能区段上的加劲肋方式和尺寸,有助于改善钢板剪力墙的承载力和刚度,延缓并减轻滞回曲线中的"捏缩效应";当耗能装置丧失承载力,大多会出现中部耗能区段的局部小区格内钢板疲劳开裂、中部耗能板整体出现面外屈曲失稳、板角焊缝被撕裂等现象。

关键词：普通钢板退火墙柱型耗能装置抗震性能

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文物冷冻干燥水蒸气扩散系数的测量

化工学报 2012年第S1期63卷 28-31页

作者：张绍志房圆圆陈光明卢衡浙江大学制冷与低温研究所浙江杭州310027 浙江省博物馆浙江杭州310007

采用聚乙二醇(PEG)溶液进行预处理,然后加以冷冻干燥,是保护出土饱水木质文物的有效方法。在自制的冷冻干燥装置上进行了仿木质文物的冻干实验,根据实验数据拟合得到了干燥区的水蒸气扩散系数。该数据将为文物冻干过程的时间预测和控制... 详细信息

采用聚乙二醇(PEG)溶液进行预处理,然后加以冷冻干燥,是保护出土饱水木质文物的有效方法。在自制的冷冻干燥装置上进行了仿木质文物的冻干实验,根据实验数据拟合得到了干燥区的水蒸气扩散系数。该数据将为文物冻干过程的时间预测和控制优化提供帮助。

关键词：冷冻干燥木质文物扩散系数水蒸气

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“十冬会”赛事评估

统计与决策 2004年第4期20卷 64-65页

作者：程晓多房圆圆田金信周爱民哈尔滨工业大学管理学院青岛建筑工程学院

中华人民共和国第十届冬季运动会于2003年1月5日至1月19日在哈尔滨隆重召开.本次赛会是在北京申奥、上海申博成功,而哈尔滨申办2010年冬奥会未果的背景下举办的,同时它又是哈尔滨在新世纪第一次举办全国性、综合性的大型赛会.哈尔滨自... 详细信息

中华人民共和国第十届冬季运动会于2003年1月5日至1月19日在哈尔滨隆重召开.本次赛会是在北京申奥、上海申博成功,而哈尔滨申办2010年冬奥会未果的背景下举办的,同时它又是哈尔滨在新世纪第一次举办全国性、综合性的大型赛会.哈尔滨自然要充分利用举办这样一个大型赛事的机会,展示承办大型赛事的能力.与此同时,还要进一步发现自身的不足,以求改进.

关键词：中国第十届冬季运动会赛事评估指标体系国际奥委会哈尔滨市

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青岛近代建筑形成因素之浅析

青岛建筑工程学院学报 2001年第3期22卷 22-27页

作者：陈雳房圆圆青岛建筑工程学院青岛266033

青岛经历了动荡多变的近代社会 ,同时形成了丰富多采的近代建筑 ,究其成因可谓纷繁复杂 .笔者借鉴了弗列治茨有关建筑生成因素的观点 ,从自然和人文两个方面来分析青岛近代建筑生成的四个因素 ,即 :自然因素、文化因素。

关键词：近代建筑自然因素文化因素建筑思潮建筑法规青岛市

基于不同破坏准则的火灾下钢筋混凝土板可靠性评估

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防灾减灾工程学报 2022年第2期42卷 403-410页

作者：林旭华董毓利房圆圆张大山华侨大学土木工程学院福建厦门361021

为探究火灾下钢筋混凝土板的可靠性,计算了基于不同破坏准则下的可靠指标并进行对比评估。提出了一种随机有限元模型,考虑了火灾荷载与混凝土板设计中的多种随机参数,对钢筋混凝土板火灾下的热力学反应开展概率分析。首先,利用ABAQUS有... 详细信息

为探究火灾下钢筋混凝土板的可靠性,计算了基于不同破坏准则下的可靠指标并进行对比评估。提出了一种随机有限元模型,考虑了火灾荷载与混凝土板设计中的多种随机参数,对钢筋混凝土板火灾下的热力学反应开展概率分析。首先,利用ABAQUS有限元软件对混凝土板建立精细化模型,将数值模拟结果与火灾试验数据进行对比验证。接着,利用abaqus@python脚本,结合LHS法抽样处理随机参数并生成随机模型,循环运算得到随机钢筋温度曲线、背火面温度曲线与跨中挠度曲线。最后,基于MATLAB蒙特卡洛法计算得到失效概率与可靠指标。结果表明:提出的随机有限元模型能有效评估火灾下钢筋混凝土板的可靠性;以挠度变形为依据的破坏准则高估了钢筋混凝土板的临界温度;正常设计的钢筋混凝土板耐火极限为90 min的可靠指标为1.88,评估火灾下钢筋混凝土板可靠性时需要考虑火灾发生的频率。

关键词：火灾荷载钢筋混凝土板随机有限元破坏准则可靠指标