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杆状病毒AcMNPV pk-1基因的结构与功能研究

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杆状病毒AcMNPV pk-1基因的结构与功能研究

作者：戴雪娟扬州大学

学位级别：硕士

在病毒与细胞的相互作用过程中,病毒和细胞蛋白的磷酸化/去磷酸化与病毒的生命周期紧密相关。许多病毒在其纯化的病毒粒子中都含有蛋白激酶(protein kinase, PK)的活性。这一类的蛋白激酶被称为病毒粒子相关蛋白激酶(VAPK)。AcMNPV中的V... 详细信息

在病毒与细胞的相互作用过程中,病毒和细胞蛋白的磷酸化/去磷酸化与病毒的生命周期紧密相关。许多病毒在其纯化的病毒粒子中都含有蛋白激酶(protein kinase, PK)的活性。这一类的蛋白激酶被称为病毒粒子相关蛋白激酶(VAPK)。AcMNPV中的VAPK蛋白是PK-1,该激酶由病毒编码,它是一个非常保守的基因,为蛋白激酶的同源基因。AcMNPV的pk-1基因是一个必需基因,它的缺失将导致病毒不能正常的感染复制和组装。本研究旨在探讨pk-1基因行使正常功能的必需功能域的位置,以及PK-1激酶活性对病毒复制的影响。另外,探讨pk-1基因对不同时期启动子的影响,从而揭示pk-1基因的部分功能也是本研究的目的之一。论文共分四个章节：第一章主要在杆状病毒的分类、生活史及复制周期、基因组、杆状病毒表达载体系统以及杆状病毒的应用等方面对杆状病毒做了概括性的介绍。同时还介绍了AcMNPV的pk-1基因的背景知识及研究的目的意义等。第二章是对AcMNPV pk-1基因功能域的鉴定分析。通过bac-to-bac操作系统将各截短型pk-1基因插入到缺失了pk-1的病毒基因组中,得到一系列的重组bacmids。转染感染实验表明包含PK-1蛋白51-183aa片段的截短型能对pk-1的缺失进行拯救;超薄电镜切片观察结果显示能拯救的重组病毒均产生了正常形态的病毒粒子,而不能拯救的重组病毒形态结构异常;一步生长曲线表明各能有效拯救的截短型重组病毒在96h时都能达到很高的滴度。第三章是对AcMNPV pk-1基因功能的研究。将突变型的pk-1基因插入到缺失了pk-1的病毒基因组中,得到vAc△pk-1-D137A,转染感染实验说明PK-1蛋白的激酶活性对病毒复制是至关重要的;用不同时期启动子启动egfp,将这段基因片段插入到pk-1缺失的病毒基因组中,从转染实验结果可知,在pk-1缺失的情况下,各不同时期的启动子都能很好地启动,发挥作用。第四章是对实验结果的总结和讨论。

关键词： AcMNPV pk-1基因截短型点突变

酵母双杂交系统筛选与水稻条纹病毒Pc2互作的寄主蛋白基因片段

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热带作物学报 2012年第3期33卷 540-544页

作者：梁昌镛赵淑玲侯艳玲戴雪娟扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009

水稻条纹病毒编码的Pc2蛋白在病毒侵染及宿主症状发生中起作用。研究其与寄主间的分子互作有助于揭示病毒侵染与致病的分子机制。分别将编码Pc2N端（Pc2-N）与Pc2C端（Pc2-C）的基因片段克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上．并构建水稻叶... 详细信息

水稻条纹病毒编码的Pc2蛋白在病毒侵染及宿主症状发生中起作用。研究其与寄主间的分子互作有助于揭示病毒侵染与致病的分子机制。分别将编码Pc2N端（Pc2-N）与Pc2C端（Pc2-C）的基因片段克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上．并构建水稻叶片cDNA文库．然后分别用Pc2-N和Pc2-C为诱饵筛选文库寻找与其互作的寄主因子。结果表明．诱饵载体中插入的Pc2-N和Pc2-C编码框和氨基酸序列均正确。Pc2-N对酵母菌株AHl09无毒性和自主激活能力，但Pc2-C对酵母具有细胞毒性。文库滴度为4x107CFU／mL．且大多数插入片段在500～2000bp之间。利用Pc2-N为诱饵筛选水稻cDNA文库．获得有8个候选阳性克隆。经序列测定和BLAST分析结果表明．这些克隆共编码5种蛋白．主要为胁迫相关蛋白与光系统相关蛋白。

关键词：水稻条纹病毒 Pc2 cDNA文库酵母双杂交筛选诱饵质粒

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运用绘本促进低年级学生写话能力的提升策略

语文世界(教师之窗) 2017年第10期 54-55页

作者：戴雪娟江苏省南京市五塘小学

提高学生写话能力是为学生提高写作能力奠定基础的。针对小学低年级的学生,应该重在培养学生的兴趣,通过引导学生进行编写、仿写等一系列写话训练,来提高他们的写话能力,促进他们思维能力的提高。可是,现阶段很多教师并没有探索出较为... 详细信息

提高学生写话能力是为学生提高写作能力奠定基础的。针对小学低年级的学生,应该重在培养学生的兴趣,通过引导学生进行编写、仿写等一系列写话训练,来提高他们的写话能力,促进他们思维能力的提高。可是,现阶段很多教师并没有探索出较为有效的途径去提高低年级学生的写话能力,问题集中表现为:主题老

关键词：低年级学生提升策略

例探“小先生制”在小学语文写作教学中的应用

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小学教学研究 2023年第31期 29-30页

作者：戴雪娟江苏省南京市五塘小学

“小先生制”通过师生角色转换,鼓励学生参与学习活动、自主学习、解决问题,以不断提高学习水平。将“小先生制”应用到小学语文写作教学的选材、评改与表述三个环节中,有利于激发学生的写作热情,提升学生的写作能力、评改能力和表达能... 详细信息

“小先生制”通过师生角色转换,鼓励学生参与学习活动、自主学习、解决问题,以不断提高学习水平。将“小先生制”应用到小学语文写作教学的选材、评改与表述三个环节中,有利于激发学生的写作热情,提升学生的写作能力、评改能力和表达能力,进而提升学生的语文综合素养。

关键词： “小先生制” 小学语文写作教学应用

知行合一:小学生社会主义核心价值观教育实践初探

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求知导刊 2020年第4期 89-90页

作者：戴雪娟江苏省南京市五塘小学江苏南京210000

社会主义核心价值观教育是当前学校面临的新形势、新任务,所以学校要把社会主义核心价值观渗透到学校教育的全过程中,将其内化为学生的自觉行为和自我追求。学校在文化建设、课程渗透、活动设计、评价推动及多方协同等方面“知行合一”... 详细信息

社会主义核心价值观教育是当前学校面临的新形势、新任务,所以学校要把社会主义核心价值观渗透到学校教育的全过程中,将其内化为学生的自觉行为和自我追求。学校在文化建设、课程渗透、活动设计、评价推动及多方协同等方面“知行合一”地开展社会主义核心价值观的教育,可形成行之有效的教育实践路径。

关键词：小学生社会主义核心价值观实践路径

舆论监督异化:企业“拜山头”——“新闻敲诈”之考辨

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东南传播 2015年第10期 84-86页

作者：戴雪娟戴紫娟武汉大学新闻与传播学院湖北武汉430072 中石油西南管道兰州输油气分公司甘肃兰州730000

新闻学界普遍认为,"新闻敲诈"的概念最早由马克思使用,该词是据马克思作品翻译而来。言下之意,该词当属德系外来词。然据笔者考察,马克思关于"新闻敲诈"的概念与近现代学界、业界、官方所使用的"新闻敲诈"含义并不匹配,也不存在明显的... 详细信息

新闻学界普遍认为,"新闻敲诈"的概念最早由马克思使用,该词是据马克思作品翻译而来。言下之意,该词当属德系外来词。然据笔者考察,马克思关于"新闻敲诈"的概念与近现代学界、业界、官方所使用的"新闻敲诈"含义并不匹配,也不存在明显的承继关系。根据《马克思恩格斯全集》(以下简称《马恩全集》)的记载,其中文版是在俄文版基础上转译,虽参考德文手稿,但笔者猜测该词的含义已偏离了原义;同时,从词汇学的角度看,中国本土亦具备产生"新闻敲诈"一词的客观条件。

关键词： “新闻敲诈” “新闻欺诈” 马克思词源

缺失pk-1影响AcMNPV启动子表达的分析

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生物技术 2015年第4期25卷 330-333页

作者：赵淑玲戴雪娟薛亚男郝佳慧扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009

[目的]分析缺失pk-1对AcMNPV早期、晚期及极晚期基因表达的影响。[方法]将egfp基因片段分别插入到pFastBacDual载体上的p10和ph启动子下游,得到供体质粒pBac-Pp10-egfp和pBac-Pph-egfp。PCR扩增ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39启动子片段,插入到pBac-egfp载体上的egfp基因上游,得到供体质粒pBac-Pie1-egfp、pBac-Pie2-egfp、pBac-Plef2-egfp、pBac-Pp6.9-egfp、pBac-Pvp39-egfp。将供体质粒分别转化含缺失pk-1基因的AcMNPV bacmid和Helper质粒的大肠杆菌DH10Bac中,得到一系列重组的AcMNPV bacmid。提取Bacmid DNA,转染Sf9细胞,转染120h后荧光显微镜下观察eGFP蛋白的表达。[结果]缺失pk-1后ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39、p10、ph启动子均能启动下游egfp基因的表达。[结论]缺失pk-1不影响ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39、p10、ph启动子启动的基因表达。

关键词： AcMNPV pk-1 启动子表达