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重症肌无力相关自身抗体及其检测方法的研究进展

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上海交通大学学报（医学版） 2018年第10期38卷 1252-1258页

作者：黄欣欣朱德生徐见容管阳太第二军医大学附属长海医院神经内科上海200433 上海交通大学医学院附属仁济医院神经内科上海200127 上海交通大学基础医学院药理学与化学生物学系上海200025

重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种以体液免疫介导为主的自身免疫性疾病,其临床特点为骨骼肌无力和易疲劳。其发病机制与体内产生针对神经-肌肉接头(neuromuscular junction,NMJ)突触后膜组分的自身抗体密切相关,包括乙酰胆碱受体... 详细信息

重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种以体液免疫介导为主的自身免疫性疾病,其临床特点为骨骼肌无力和易疲劳。其发病机制与体内产生针对神经-肌肉接头(neuromuscular junction,NMJ)突触后膜组分的自身抗体密切相关,包括乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR)抗体、肌肉特异性酪氨酸激酶(muscle-specific receptor tyrosine kinase,MuSK)抗体、低密度脂蛋白受体相关蛋白4(low-density lipoprotein receptor-related protein 4,LRP4)抗体等;近年来发现还存在针对集聚蛋白、乙酰胆碱酯酶相关胶原蛋白胶原链、皮层蛋白等抗原的自身抗体。MG基于血清抗体特征可分为AChR-MG、MuSK-MG、LRP4-MG及血清抗体阴性MG等亚型。MG自身抗体的检测对其分型诊断、治疗及预后判断非常重要。随着医疗技术的发展,抗体检测方法得到不断改进,为各类型MG的精准诊疗提供新的契机。该文对MG相关自身抗体分类及抗体检测方法的最新进展进行综述。

关键词：重症肌无力自身抗体检测方法疾病分型

人工神经网络用于连钱草中总黄酮和三萜酸类成分的含量预测

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分析科学学报 2007年第3期23卷 263-268页

作者：徐见容吴云霏肖玉秀武汉大学药学院武汉430072

以连钱草的毛细管电泳指纹图谱为输入数据,以总黄酮和三萜酸类成分含量为输出数据,构建了反向传播网络、径向基函数网络和广义回归网络三种人工神经网络模型。采用三种网络模型和两种预测方法对未知样本的总黄酮和三萜酸类成分含量进行... 详细信息

以连钱草的毛细管电泳指纹图谱为输入数据,以总黄酮和三萜酸类成分含量为输出数据,构建了反向传播网络、径向基函数网络和广义回归网络三种人工神经网络模型。采用三种网络模型和两种预测方法对未知样本的总黄酮和三萜酸类成分含量进行了预测,并分别比较了三种网络和两种预测方法的预测结果。另外,结合聚类分析结果和输入数据的相似度,分析了预测误差的来源。结果表明:三种网络对大部分样本的预测值与实际值都比较接近,而广义回归网络的预测效果最优;扣除奇异值后,广义回归网络的两种预测方法对未知样本的总黄酮和三萜酸类成分含量的平均预测误差分别为10.9%和0.00073%。

关键词：人工神经网络连钱草总黄酮三萜酸类

α-倒捻子素对肌萎缩侧索硬化的作用及其机制

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上海交通大学学报（医学版） 2022年第9期42卷 1265-1274页

作者：王大元徐见容江淦宋清香陈钧宋华华谷晓高小玲上海交通大学医学院药理学与化学生物学系上海200025 复旦大学药学院上海201203

目的·探究α-倒捻子素(α-mangostin,AM)对超氧化物歧化酶1 (superoxide dismutase 1,SOD1)突变型肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)的干预作用及可能的机制。方法·通过试剂盒检测小胶质细胞ATP水平变化,探究AM对SOD... 详细信息

目的·探究α-倒捻子素(α-mangostin,AM)对超氧化物歧化酶1 (superoxide dismutase 1,SOD1)突变型肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)的干预作用及可能的机制。方法·通过试剂盒检测小胶质细胞ATP水平变化,探究AM对SOD1聚集体处理的小胶质细胞(SOD1-ALS小胶质细胞模型)能量平衡的调控作用。通过Western blotting检测AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)及其代谢调节通路中关键分子肝脏激酶B1和PPARγ协同激活因子-1α的激活水平,探究AM对疾病状态小胶质细胞AMPK通路的调控作用。通过化合物C抑制AMPK激活后检测ATP变化,探究AMPK在AM调控疾病状态小胶质细胞能量平衡中的作用。抑制AMPK激活的同时通过ELISA检测SOD1-ALS小胶质细胞对SOD1的摄取率和降解率,探究AMPK介导的能量调控在AM调节SOD1-ALS小胶质细胞清除SOD1中的作用。通过Western blotting和免疫荧光检测探究AM对疾病状态小胶质细胞自噬的作用及自噬在AM调节小胶质细胞降解SOD1中的作用。通过制备纳米颗粒包载的AM (NPAM)实现AM的体内给药。通过尾静脉注射的方式对SOD1^(*)G93A ALS模型小鼠连续给予NPAM 30 d,1次/d。通过免疫组织化学染色检测NPAM给药后ALS小鼠腰段脊髓SOD1蛋白的聚集情况,通过尼氏染色和NeuN免疫组织化学染色检测神经元的损伤和丢失程度,通过转棒实验和后肢握紧实验评价ALS小鼠的运动能力,通过记录体质量和生存期评价ALS小鼠的疾病进程。结果·AM恢复了疾病状态小胶质细胞的ATP水平,增强了其对SOD1聚集体的摄取和通过自噬的降解;抑制AMPK通路后,AM的这些作用消失。NPAM减少了SOD1^(*)G93A ALS模型小鼠腰段脊髓SOD1聚集体,减少了腰段脊髓神经元的损伤和丢失,还缓解了ALS小鼠的运动损伤和体质量丢失。结论·AM通过AMPK介导的能量平衡恢复作用增强了SOD1-ALS小胶质细胞模型对SOD1聚集体的清除,并显著改善了ALS模型小鼠的神经病理变化及疾病症状。

关键词：肌萎缩侧索硬化 α-倒捻子素小胶质细胞超氧化物歧化酶1 能量平衡 AMP活化蛋白激酶

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抗铜绿假单胞菌PcrV的scFv-Fc抗体的制备及体外活性研究

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中国抗生素杂志 2020年第1期45卷 26-32页

作者：翟贯星陆璐高斐朱建伟徐见容路慧丽陈代杰上海师范大学生命科学学院上海200234 华东理工大学生物工程学院上海200237 上海交通大学药学院上海200240 上海交通大学基础医学院上海200025

目的制备靶向铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)III型分泌系统组件蛋白PcrV的scFv-Fc形式的单克隆抗体MFa,并研究其体外对铜绿假单胞菌生物膜形成及细胞黏附和侵入的影响。方法将编码MFa的DNA序列合成后,插入到真核表达载体中,获得... 详细信息

目的制备靶向铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)III型分泌系统组件蛋白PcrV的scFv-Fc形式的单克隆抗体MFa,并研究其体外对铜绿假单胞菌生物膜形成及细胞黏附和侵入的影响。方法将编码MFa的DNA序列合成后,插入到真核表达载体中,获得重组质粒,再采用聚乙烯亚胺(PEI)将质粒转染HEK293E细胞并获得瞬时表达;表达的产物通过HiTrap MabSelect SuRe柱进行纯化,所得到的抗体采用SDS-PAGE分析纯度,采用BCA法测定蛋白浓度。为了检测MFa抗体与PcrV抗原的亲和力,对PcrV抗原进行表达纯化,方法是将PcrV目的序列插入到pET28a表达载体中,转化*** BL21(DE3)获得宿主菌,在0.5mmol/L IPTG 15℃的条件下诱导过夜,并通过His-Tag标签进行亲和纯化。对于纯化的MFa抗体与PcrV抗原通过Western blot、ELISA、SPR(表面等离子共振)研究抗体与抗原的亲和力,并研究抗体体外对生物膜形成的影响,对铜绿假单胞菌黏附与侵入HeLa细胞的影响。结果MFa抗体在HEK293瞬转系统成功获得表达与纯化,且对PcrV蛋白具有较好的亲和活性,KD值为492.2nmol/L。功能实验证实,MFa抗体能够降低铜绿假单胞菌生物膜的形成,降低铜绿假单胞菌对HeLa细胞黏附与侵入作用。结论靶向PcrV的scFv-Fc抗体MFa具有对铜绿假单胞菌引起的感染的潜在效用,具有进一步开发为抗铜绿假单胞菌治疗药物的价值。

关键词：铜绿假单胞菌 PcrV 单克隆抗体生物膜黏附侵入

M1胆碱受体选择性别构激动剂的虚拟筛选和体外活性研究

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现代生物医学进展 2018年第9期18卷 1601-1606页

作者：熊彩虹陆绍永赵娜徐见容赵兰雪邱瑜上海交通大学医学院药理学与化学生物学系上海200025 上海交通大学医学院病理生理系上海200025

目的:M1毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M1受体)在改善学习和记忆等高级认知功能障碍中起重要作用,本文利用计算机辅助药物设计和高表达各M受体亚型的CHO细胞(Chinese hamster ovary cell,中国仓鼠卵巢细胞),以期筛选获得新型M1受体选择性别构激... 详细信息

目的:M1毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M1受体)在改善学习和记忆等高级认知功能障碍中起重要作用,本文利用计算机辅助药物设计和高表达各M受体亚型的CHO细胞(Chinese hamster ovary cell,中国仓鼠卵巢细胞),以期筛选获得新型M1受体选择性别构激动剂。方法:通过计算机辅助药物设计方法,对已知具有M1受体选择性作用别构激动剂与M1受体的晶体结构进行对接,确定活性对接口袋,据此进行化合物库虚拟筛选;利用高表达各M受体亚型的CHO细胞,对化合物进行体外活性检测。结果:虚拟筛选得到184个化合物,其中,体外实验显示化合物AJ-292和AG-205-6对M1受体有明显的激动效果,而对M3、M5受体则无影响。结论:综合利用虚拟筛选、结构分析以及特异性活性分析,筛选出具有M1受体高选择性激动作用的化合物AJ-292和AG-205-6,为设计开发新型的M1选择性别构激动剂奠定了基础。

关键词： M1受体虚拟筛选别构激动剂 CHO细胞体外活性

基于HPLC-MS/MS法的新型双胆碱酯酶抑制剂DDDA3大鼠药代动力学研究

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第11期39卷 1233-1238页

作者：胡梦薇李苗苗黄婉莹王宇胡勇博张瑞侯丽娜陈红专张永芳王领谭文徐见容王昊上海交通大学医学院药理学与化学生物学系上海200025 华南理工大学生物科学与生物工程学院广东省发酵与酶工程重点实验室创新药物与医药孵化基地广州510006

目的·研究新型多靶点胆碱酯酶抑制剂氨基甲酰酯-查尔酮衍生物DDDA3的药代动力学特征,为DDDA3的体内抗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)活性评价及制剂开发提供实验依据。方法·建立并验证了一种高效液相色谱-串联质谱(high perfor... 详细信息

目的·研究新型多靶点胆碱酯酶抑制剂氨基甲酰酯-查尔酮衍生物DDDA3的药代动力学特征,为DDDA3的体内抗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)活性评价及制剂开发提供实验依据。方法·建立并验证了一种高效液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定DDDA3的方法,并将该方法应用于大鼠体内DDDA3的药代动力学研究。采用蛋白质沉淀法制备血浆样品,通过样品浓缩降低检测限。运用Zorbax SB-Aq色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5μm)分离DDDA3,流动相由甲醇和水相(体积比为75:25)组成,水相中含有0.1%的甲酸和10 mmol/L的甲酸铵。采用电喷雾离子源,在正离子模式下进行多反应监测。结果·此方法定量下限为0.5 ng/mL,线性范围为0.5~500 ng/mL。DDDA3在SD大鼠体内的绝对口服生物利用度为78.4%。结论·DDDA3口服生物利用度高,口服吸收快,血药浓度维持时间长,具有较好的抗AD开发潜力,但仍需优化制剂工艺,改善水溶性。

关键词： DDDA3 阿尔茨海默病高效液相色谱-质谱联用药代动力学血浆大鼠

Aβ寡聚体调控M1胆碱受体下游信号转导通路的机制研究

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现代生物医学进展 2022年第17期22卷 3201-3207页

作者：蒋敏洁张永芳王冬雪王昊徐见容赵兰雪上海交通大学医学院药理学与化学生物学系上海200025 上海中医药大学交叉科学研究院上海201204 上海中医药大学中西医结合研究院上海201204

目的:阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)病理状态下M1胆碱受体功能受损,无法对配体做出正确响应。本研究模拟AD早期Aβ寡聚体富集的病理状态,考察对M1胆碱受体下游信号通路关键分子活性的影响,以期为AD病理状态下M1胆碱受体信号偶... 详细信息

目的:阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)病理状态下M1胆碱受体功能受损,无法对配体做出正确响应。本研究模拟AD早期Aβ寡聚体富集的病理状态,考察对M1胆碱受体下游信号通路关键分子活性的影响,以期为AD病理状态下M1胆碱受体信号偶联障碍机制提供新的见解。方法:制备Aβ寡聚体(Aβoligomers,AβOs),1μM AβOs预处理CHO-M1细胞30 min、24 h和48 h,加入胆碱受体激动剂乙酰胆碱或者卡巴胆碱激活M1胆碱受体,利用Ca^(2+)检测实验、IP-One-Gq KIT检测实验及Western blot实验检测受体激动后下游关键信号分子Ca^(2+)、IP_(1)的释放量以及ERK磷酸化的动态变化。结果:AβOs预处理导致激活细胞内M1胆碱受体其下游Ca^(2+)和IP_(1)的释放量减少、ERK被更快激活。结论:AβOs预处理导致激活M1胆碱受体下游关键信号分子释放水平、磷酸化水平异常,揭示在阿尔茨海默病早期M1胆碱受体便出现功能障碍,无法正确激活信号转导通路。

关键词： Aβ寡聚体 M1毒蕈碱型乙酰胆碱受体信号转导通路阿尔茨海默病 G蛋白偶联受体

新型M5胆碱受体选择性拮抗剂的发现及药理活性研究

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现代生物医学进展 2020年第12期20卷 2207-2213,2257页

作者：李苗苗黄辰季培逸赵兰雪徐见容唐德伟王昊上海交通大学医学院药理学与化学生物学系上海200025 上海健康医学院上海201318 上海交通大学医学院附属仁济医院核医学科上海200127

目的:选择性拮抗M5胆碱受体可成为治疗药物成瘾的新途径,本文旨在利用虚拟筛选、结构优化、分子与细胞水平的药理活性评价,以期获得新型M5胆碱受体选择性拮抗剂。方法:通过虚拟筛选获得具有新型骨架的候选化合物,以该结构为基础进行结... 详细信息

目的:选择性拮抗M5胆碱受体可成为治疗药物成瘾的新途径,本文旨在利用虚拟筛选、结构优化、分子与细胞水平的药理活性评价,以期获得新型M5胆碱受体选择性拮抗剂。方法:通过虚拟筛选获得具有新型骨架的候选化合物,以该结构为基础进行结构优化;利用放射配基实验对系列化合物进行活性测定;进一步评价其亲和力对各胆碱受体亚型的选择性,并利用细胞内钙离子释放实验评价其拮抗活性。结果:通过虚拟筛选得到具有新型骨架的M5胆碱受体拮抗剂WXY-1-1,对其进行三轮结构优化共合成20个化合物;放射配基实验表明,其中化合物WXY-3-5对M5胆碱受体亚型具有亚微摩尔级亲和力(Ki=0.7μM)且具有亚型选择性(高出其他4个亚型9-35倍);钙流实验表明,化合物WXY-3-5对M5胆碱受体亚型具有拮抗活性(IC50=6.1μM)。结论:通过虚拟筛选、结构优化以及药理活性评价,获得具有新骨架的M5胆碱受体选择性拮抗剂,为后续药物开发提供了新的先导结构。

关键词： M5胆碱受体拮抗剂药理活性亚型选择性虚拟筛选

M1毒蕈碱乙酰胆碱受体同源建模模板的选取及验证

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现代生物医学进展 2017年第32期17卷 6201-6208页

作者：赵恒毅胡梦薇史玉欢王宇祁红荣征星徐见容王昊上海交通大学医学院药理学教研室上海200025

目的:探讨不同同源模板所获得M1毒蕈碱乙酰胆碱受体模型的合理性及可靠性。方法:以牛视紫红素受体、人源β2-肾上腺素受体、M2胆碱受体和M3胆碱受体为模板,分别对M1胆碱受体进行同源建模;采用分子对接获得各M1胆碱受体同源模板与配体的... 详细信息

目的:探讨不同同源模板所获得M1毒蕈碱乙酰胆碱受体模型的合理性及可靠性。方法:以牛视紫红素受体、人源β2-肾上腺素受体、M2胆碱受体和M3胆碱受体为模板,分别对M1胆碱受体进行同源建模;采用分子对接获得各M1胆碱受体同源模板与配体的互作模式,并与已报道的M胆碱受体晶体结构进行静态比对,得到最佳M1胆碱受体同源模板;采用分子动力学模拟分析配体与关键残基距离的变化,对M1胆碱受体同源模板进行动态验证。结果:M2胆碱受体与M1胆碱受体的序列相似度较高,为67.9%;以Inactive M2胆碱受体为模板构建的M1胆碱受体(M1R_(inactive-M2R))与其他晶体结构间RMSD值的均值最低,为1.39;M1R_(inactive-M2R)别构位点K392及E397残基侧链与结合口袋距离更近,与配体结合构象更匹配;分子对接结果显示,双位点别构激动剂VU0184670与M1R_(inactive-M2R)别构结合位点Y85、Y381的距离分别为4.8、6.8,优于其他模型;分子动力学模拟后,配体与Q177残基的距离由7.4降至2.9,提示配体VU0184670向Q177方向偏转,与文献结果一致。结论:以Inactive M2受体结构为模板构建的M1胆碱受体模型最为合理,更接近M1胆碱受体的晶体结构。本研究为M1胆碱受体药物开发提供重要工具,为其他GPCRs受体同源建模提供创新范式。

关键词： M1胆碱受体同源建模分子对接分子动力学模拟