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Spondin-2基因沉默对人结直肠癌SW480细胞的侵袭及上皮-间充质转化能力的影响

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中华实验外科杂志 2023年第7期40卷 1322-1325页

作者：周全博徐纪中袁维堂郑州大学第一附属医院结直肠肛门外科郑州450052

目的探讨Spondin-2(SPON2)基因沉默对人结直肠癌SW480细胞侵袭及上皮-间充质转化(EMT)能力的影响。方法体外培养人结直肠癌SW480细胞, 对细胞进行慢病毒转染, 并将细胞分为对照组、阴性转染组和shSPON2转染组。采用实时荧光定量聚合酶... 详细信息

目的探讨Spondin-2(SPON2)基因沉默对人结直肠癌SW480细胞侵袭及上皮-间充质转化(EMT)能力的影响。方法体外培养人结直肠癌SW480细胞, 对细胞进行慢病毒转染, 并将细胞分为对照组、阴性转染组和shSPON2转染组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测各组细胞中Spondin-2 mRNA的表达;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测培养24、48、72 h后各组细胞增殖情况, Transwell法检测培养48 h后各组细胞侵袭情况;蛋白免疫印迹法检测培养48 h后各组细胞中蛋白细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、pERK1/2、含ETS域蛋白1(ELK-1)、pELK-1及EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达。研究数据采用单因素方差分析进行比较。结果 shSPON2转染组SPON2 mRNA表达水平(0.43±0.04)低于对照组(1.00±0.05, t=21.805, P<0.05), 低于阴性转染组(0.97±0.03, t=26.454, P<0.05)。培养24、48、72 h后, 3组间同一时间吸光度(A)值比较, 差异有统计学意义(F=27.982、31.052、28.484, P<0.05)。同一时间下, 与对照组比较, shSPON2转染组细胞A值降低, 且低于阴性转染组(P<0.05)。shSPON2转染组SW480细胞侵袭数目[(55.93±11.24)个]低于对照组[(118.75±19.61)个, t=6.808, P<0.05], 低于阴性转染组[(105.87±15.36)个, t=6.427, P<0.05]。3组间SW480细胞蛋白pERK1/2、pELK-1表达水平比较, 差异有统计学意义(F=357.899、339.313, P<0.05)。与对照组比较, shSPON2转染组细胞蛋白pERK1/2、pELK-1表达降低, 且低于阴性转染组(P<0.05)。3组间E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平比较, 差异有统计学意义(F=316.867、533.522、416.446, P<0.05)。与对照组比较, shSPON2转染组细胞蛋白E-cadherin表达升高, N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05)。结论 SPON2基因沉默能够抑制SW480细胞增殖、侵袭, 抑制EMT过程, 可能与ERK/ELK-1信号通路的抑制有关。

关键词： Spondin-2 基因沉默结直肠癌 SW480 侵袭上皮-间充质转化

门静脉高压症血流动力学改变及脾静脉壁iNOS、NF-kB表达与上消化道出血的关系

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门静脉高压症血流动力学改变及脾静脉壁iNOS、NF-kB表达与上消化...

作者：徐纪中郑州大学

学位级别：硕士

背景及目的门静脉高压症(Portal hypertension, PHT)是一组以门脉系统压力病理性增高为特征的临床综合征,多见于肝炎后肝硬化患者。PHT患者门脉系统血流动力学处于高动力和高流量并存的状态。压力和流量增高可导致血管应力增加。随着对... 详细信息

背景及目的门静脉高压症(Portal hypertension, PHT)是一组以门脉系统压力病理性增高为特征的临床综合征,多见于肝炎后肝硬化患者。PHT患者门脉系统血流动力学处于高动力和高流量并存的状态。压力和流量增高可导致血管应力增加。随着对PHT研究的深入,人们发现PHT患者除血流动力学紊乱外,还存在着门静脉系统的血管性病变,称为门静脉高压性血管病变(Portal hypertension vasculopathy, PHV),并在PHT的发展中起重要作用。国内外研究证明门脉高压症发病机制主要包括“后向血流理论”和“前向血流理论”。其中前向血流理论认为门脉高压症时门脉侧支循环阻力与正常门静脉血管阻力没有差异,维持门静脉高压的原因是较多的门静脉流入量使得门静脉主动充血。食管胃底曲张静脉出血是门静脉高压症最为严重的并发症之一。门静脉高压症时不但存在门静脉系统及全身血流动力学的紊乱,同时还有各种血管活性物质的代谢异常,它们可能是促进或者影响出血的重要因素。门静脉高压症时门静脉和脾静脉直径、血流量、流速等还存在争议,是否与出血相关研究尚少。一氧化氮(nitric oxide,NO)释放过多可能是PHT时血管扩张和血管收缩性下降的主要原因之一。诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)是NO合成的关键酶,NO产生过多可能是iNOS表达增强的结果。核因子-κB(nuclear factor-KB, NF-κB)与iNOS的关系在其他领域研究较多,但它们在门静脉高压症时的脾静脉壁的表达的研究尚少,且是否与出血相关,有待进一步研究。方法实验组(PHT组)脾静脉标本48例,选取自郑州大学第一附属医院普外科收治的肝硬化门静脉高压症并择期行脾切除及贲门周围血管离断术病人。根据出血情况将门静脉高压症患者分为2组,A组无上消化道出血史者,B组为≥1次出血史者。术前对PHT各组进行门静脉系统各属支血流超声多普勒检查。对照组10例脾静脉标本取自该院同期外伤脾破裂行脾切除切除的病人。PHT组和对照组的脾静脉进行HE染色,光镜下观察脾静脉壁病理形态学改变,采用免疫组织化学技术检测iNOS和NF-κB在PHT组和对照组的表达情况,并进行相关性分析。结果 1.门静脉的直径A组14.87±0.44mm,B组14.69±0.44mm。在A、B两组无显著差别(p>0.05),门静脉平均血流速度A组11.43±0.52 cm/s,B组9.98±0.55 cm/s,A组门静脉血流速度高于B组,差异有统计学意义(p0.05)。脾静脉内径A组10.23±0.34 mm,B组10.74±0.41mm,A组的脾静脉内径小于B组,差异有统计学意义(p<0.05)。脾静脉的血流量A组492.52±20.76L/min,B组528.26±34.22 L/min,A组的脾静脉的血流量显著低于B组(p<0.05)。 3.A组的脾静脉血流量与门静脉血流量的比值0.42±0.03,B组为0.52±0.03,A组显著低于B组。 4.免疫组化染色镜下观察：iNOS的阳性信号见于细胞的胞浆,PHT患者脾静脉内皮细胞和平滑肌细胞iNOS的表达均呈阳性或强阳性,对照组血管则呈阴性或弱阳性表达,且B组的阳性区平均光密度值大于A组和对照组,差异均有统计学意义。 5. NF-κB免疫组化产物主要定位于内皮细胞胞浆和胞核,PHT组患者脾静脉内皮细胞呈阳性或强阳性,对照组则成阴性或弱阳性表达,且B组的阳性区平均光密度值大于A组和对照组,差异均有统计学意义。 6.相关分析结果显示,PHT患者A、B两组的脾静脉iNOS和NF-κB蛋白表达呈正相关(r=0.969,P<0.01)。结论 1.有出血史PHT组患者的门静脉血流变慢,血流量减少,提示上消化道出血与门静脉血流动力学变化有关。 2.PHT组的脾静脉血流量增多,说明脾脏与门静脉高压高动力循环有关,PHT出血组的脾静脉血流量占门静脉血流量的比例明显增大,说明脾静脉的血流量增加与上消化道出血有关。 3.PHT组的脾静脉壁的iNOS和NF-κB表达均高于对照组,且有出血史组高于无出血史组,提示两者可能与上消化道出血相关。 4.PHT组患者iNOS和NF-κB表达水平成正相关,推测两者之间有协同作用。

关键词：门静脉高压症血流动力学脾静脉 iNOS NF-κB

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中华实验外科杂志 2020年第2期37卷 220-223页

作者：徐纪中王贵宪袁维堂周全博胡晟云郑州大学第一附属医院结直肠外科 450052

目的观察胶质瘤相关癌基因1特异性阻断剂(GANT-61)对结直肠癌肿瘤干细胞(CRC-CSCs)分化及对Hedgehog信号通路的调控作用的影响。方法磁珠分选法获得CD133+CRC-CSCs,用含不同浓度(0、10、20、40μmol/L)的GANT-61的干细胞培养液干预,设... 详细信息

目的观察胶质瘤相关癌基因1特异性阻断剂(GANT-61)对结直肠癌肿瘤干细胞(CRC-CSCs)分化及对Hedgehog信号通路的调控作用的影响。方法磁珠分选法获得CD133+CRC-CSCs,用含不同浓度(0、10、20、40μmol/L)的GANT-61的干细胞培养液干预,设为对照组、低、中、高剂量组,测定干预不同时刻细胞活性、CRC-CSCs球形成率、CD133+占比、核转录因子1(Gli1)、Hh受体蛋白(Ptch1)、c-Myc、细胞角蛋白20(CK20)mRNA和蛋白表达。多样本计量资料比较采用单因素方差分析,两两样本比较采用SNK-q检验。结果与对照组比较,GANT-61各剂量组不同时刻CCK-8试验吸光度(A)值均降低(24 h:t=2.445、4.985、6.903;48 h:t=2.859、5.270、7.488;72 h:t=3.324、8.053、12.042,P中剂量组CCK-8试验A值随干预时间延长升高,且干预不同时刻CCK-8试验A值比较差异均有统计学意义(F=44.598、31.844,P0.05),差异无统计学意义。对照组、GANT-61低、中、高剂量组CRC-CSCs球形成率分别为(13.57±1.55)%、(11.22±1.01)%、(5.46±0.67)%、(1.60±0.30)%,CD133+占比分别为(96.20±3.07)%、(81.34±5.84)%、(62.01±5.03)%、(45.38±4.21)%;与对照组比较,GANT-61各剂量组CRC-CSCs球形成率及CD133+占比均降低(CRC-CSCs球形成率:t=2.840、10.739、16.954,P中剂量组t=5.271、5.587、6.163、6.500;高剂量组t=7.442、8.976、8.750、9.632,P中剂量组t=5.664、8.923、9.500、11.180;高剂量组t=14.435、14.137、15.727、14.142,P<0.05),且随GANT-61干预剂量升高而降低(mRNA:F=14.825、21.057、22.389、27.160,P<0.05;蛋白:F=65.340、95.789、151.230、119.877,P<0.05),差异有统计学意义。结论GANT-61可能通过下调Hedgehog信号通路基因Gli1、Ptch1、靶基因c-Myc、分化基因CK20 mRNA和蛋白的表达,从而起到抑制CRC-CSCs细胞自我更新能力、促进细胞分化作用。

关键词：胶质瘤相关癌基因1特异性阻断剂结直肠癌肿瘤干细胞分化 Hedgehog信号通路

河南汉族人群mir-34b/c基因rs4938723多态性与结直肠癌遗传易感性及预后的关系

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郑州大学学报（医学版） 2020年第4期55卷 495-498页

作者：徐纪中袁维堂王贵宪周全博胡晟云郑州大学第一附属医院结直肠肛门外科郑州450052

目的:探讨河南汉族人群mir-34b/c基因rs4938723多态性与结直肠癌(CRC)遗传易感性及预后的关系。方法:收集180例CRC患者术前及180例体检健康者(对照)空腹静脉血,采用PCR-RFLP法分析mir-34b/c基因启动子区rs4938723多态性;采用Kaplan-Meie... 详细信息

目的:探讨河南汉族人群mir-34b/c基因rs4938723多态性与结直肠癌(CRC)遗传易感性及预后的关系。方法:收集180例CRC患者术前及180例体检健康者(对照)空腹静脉血,采用PCR-RFLP法分析mir-34b/c基因启动子区rs4938723多态性;采用Kaplan-Meier法针对不同基因型患者绘制生存曲线并进行log-rank检验,采用Cox回归模型分析rs4938723多态性与CRC预后的关系。结果:CRC组C等位基因频率高于对照组(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,TT基因型与TC+CC基因型患者生存曲线差异有统计学意义(P<0.05),TC+CC基因型患者生存状况差于TT型患者。Cox回归分析结果显示,与TT基因型比较,TC、CC基因型是CRC预后不良的危险因素,HR(95%CI)分别为1.284(1.035~1.593)、2.042(1.415~2.946)。结论:mir-34b/c基因rs4938723多态性与河南汉族人群CRC遗传易感性及预后关系密切。

关键词：河南汉族人群 mir-34b/c 基因多态性结直肠癌遗传易感性预后

FHIT及Apollon蛋白在结直肠癌组织中的表达特征及预后预测价值

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郑州大学学报（医学版） 2020年第5期55卷 617-621页

作者：徐纪中袁维堂王贵宪周全博胡晟云郑州大学第一附属医院结直肠肛门外科郑州450052

目的:探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)及凋亡抑制蛋白Apollon在结直肠癌(CRC)组织中的表达特征及预后预测价值。方法:回顾性分析163例CRC患者癌组织、癌旁组织中FHIT及Apollon蛋白的表达情况;分析两蛋白表达与病理参数的关系及其对预后的影... 详细信息

目的:探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)及凋亡抑制蛋白Apollon在结直肠癌(CRC)组织中的表达特征及预后预测价值。方法:回顾性分析163例CRC患者癌组织、癌旁组织中FHIT及Apollon蛋白的表达情况;分析两蛋白表达与病理参数的关系及其对预后的影响。结果:CRC组织中,FHIT和Apollon蛋白阳性率分别为32.5%和84.7%,癌旁组织中分别为67.5%和48.5%;与癌旁组织比较,CRC组织中FHIT蛋白阳性率降低,Apollon蛋白阳性率升高(P中FHIT与Apollon蛋白表达存在负关联(rP=-0.183,P=0.017)。与浸润至肌层或浆膜外、Dukes分期A或B期、无淋巴结转移、无SCRLM的CRC组织比较,浸润至浆膜层、Dukes分期C或D期、有淋巴结转移、有SCRLM的CRC组织中FHIT阳性率降低,Apollon阳性率升高(P0.05)。结论:FHIT、Apollon蛋白表达与CRC侵袭、转移及预后关系密切,两者可作为预测CRC转移及预后的可靠标志物。

关键词：脆性组氨酸三联体 Apollon蛋白结直肠癌转移预后

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直肠癌吻合口漏临床治疗体会

河南医学研究 2016年第7期25卷 1242-1243页

作者：叶鹏飞张晓辉徐纪中王贵宪孟津县公疗医院肛肠外科河南洛阳471100 郑州大学第一附属医院肛肠外科河南郑州450052

目的：探讨直肠癌患者术后发生吻合口瘘的治疗效果，并对其发生原因及预防措施进行总结分析。方法选取孟津县公疗医院于2005年6月至2015年6月期间收治的180例行直肠癌保肛术患者，共有16例发生术后吻合口瘘，对其临床资料进行回顾性分... 详细信息

目的：探讨直肠癌患者术后发生吻合口瘘的治疗效果，并对其发生原因及预防措施进行总结分析。方法选取孟津县公疗医院于2005年6月至2015年6月期间收治的180例行直肠癌保肛术患者，共有16例发生术后吻合口瘘，对其临床资料进行回顾性分析。结果180例患者直肠癌保肛术后发生吻合口瘘共16例，占8．89％，15例经7～30 d保守治疗后获得治愈，1例行回肠造瘘术后治愈。结论直肠癌保肛术后造成吻合口瘘发生原因较多，加强围手术期的管理及手术实施细节，能够降低吻合口瘘的发生风险。大部分吻合口瘘患者可经保守治疗后恢复。

关键词：直肠癌吻合口漏临床体会

基于农户调查的长江流域双季稻生产碳、氮足迹分析——以江西和湖南为例

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作物杂志 2023年第2期 229-237页

作者：陈中督徐春春纪龙方福平中国水稻研究所浙江杭州311300

量化分析作物生产碳、氮足迹可以有效帮助减少农业温室气体和活性氮排放。基于足迹理论和方法,采用问卷调查方式定量研究长江流域水稻生产碳足迹和氮足迹大小及组成。研究表明,水稻单位产量碳足迹和氮足迹分别介于0.50~0.90kgCO_(2)-eq... 详细信息

量化分析作物生产碳、氮足迹可以有效帮助减少农业温室气体和活性氮排放。基于足迹理论和方法,采用问卷调查方式定量研究长江流域水稻生产碳足迹和氮足迹大小及组成。研究表明,水稻单位产量碳足迹和氮足迹分别介于0.50~0.90kgCO_(2)-eq/kg和5.20~13.17gN-eq/kg,其中CH_(4)和NH_(3)排放为主要贡献因子。种植规模与碳足迹和氮足迹呈现显著负相关关系,与一般农户(低于0.7hm^(2))水稻种植相比,种粮大户(高于3.3hm^(2))碳足迹和氮足迹分别降低了33.8%和44.1%。在调研的稻田中发现,53.1%的地块肥料投入过量,54.9%的地块灌溉投入过量,且产量较低,存在着较大的节能减排潜力。提高农户的受教育水平和低碳绿色农业认知能够显著降低水稻生产碳、氮足迹。因此,发展双季稻节肥节水技术,提高农业机械运行效率,构建规模化农作种植模式,同时提升农户知识文化水平和加强低碳绿色农业知识的普及力度以及不同类型适应性行为的指导,健全低碳绿色农业技术创新与推广机制,有利于缓解中国长江流域双季稻种植区的气候变化和富营养化污染。

关键词：碳足迹氮足迹双季稻生态评价生命周期

雌、孕激素下降对大鼠肾脏组织中水通道蛋白表达的影响

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郑州大学学报（医学版） 2014年第5期49卷 734-737页

作者：卫红王贵宪徐纪中袁维堂卫军河南司法警官职业学院实验中心郑州450000 郑州大学第一附属医院肛肠外科郑州450052 武警河南总队医院感染管理科郑州450052

目的:探讨卵巢切除后激素水平变化对肾脏组织水通道蛋白(AQP)表达和水代谢的影响。方法:60只大鼠随机分为2组。卵巢切除组大鼠切除卵巢后分别饲养0、2和4周(n=10);对照组大鼠只显露卵巢和输卵管,但不结扎切除,分别饲养0、2和4周(n=10)... 详细信息

目的:探讨卵巢切除后激素水平变化对肾脏组织水通道蛋白(AQP)表达和水代谢的影响。方法:60只大鼠随机分为2组。卵巢切除组大鼠切除卵巢后分别饲养0、2和4周(n=10);对照组大鼠只显露卵巢和输卵管,但不结扎切除,分别饲养0、2和4周(n=10)。分别收集2组尿、血液,取出肾脏,检测尿、血液渗透压,检测血浆雌、孕激素和血管加压素水平,免疫印迹和免疫组化检测肾脏组织AQP2、AQP1和AQP3的表达。结果:大鼠切除卵巢后2周,雌激素及孕激素水平均下降,血管加压素水平升高,体重增加,尿量减少,肾脏组织AQP2、AQP1和AQP3的表达上升(P均<0.05)。手术后4周,上述变化更加明显(P均<0.05)。结论:雌、孕激素水平下降可能通过血管加压素水平升高造成肾脏AQP高表达,进而导致尿量减少和体重增加。

关键词：水通道蛋白雌激素卵巢切除孕激素大鼠

PPH联合直肠黏膜柱状缝扎术治疗出口梗阻性便秘的临床效果分析

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河南医学研究 2017年第6期26卷 997-999页

作者：胡晟云王时俊徐纪中秦聪鹏王贵宪郑州大学第一附属医院河南郑州450052

目的探讨吻合器痔上黏膜环切术(PPH)联合直肠黏膜柱状缝扎术治疗出口梗阻性便秘的临床效果。方法选取郑州大学第一附属医院2014年6月至2015年6月行手术治疗的80例出口梗阻性便秘患者,其中PPH手术联合直肠黏膜柱状缝扎术40例(研究组),单... 详细信息

目的探讨吻合器痔上黏膜环切术(PPH)联合直肠黏膜柱状缝扎术治疗出口梗阻性便秘的临床效果。方法选取郑州大学第一附属医院2014年6月至2015年6月行手术治疗的80例出口梗阻性便秘患者,其中PPH手术联合直肠黏膜柱状缝扎术40例(研究组),单纯行PPH手术40例(对照组)。对比两组手术方式的治愈率、手术时间、术后24 h疼痛评分、住院天数及术后随访1、3、6、12个月的排便评分(Longo ODS评分)情况。结果研究组总缓解率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);研究组远期疗效优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用PPH联合直肠黏膜柱状缝扎术治疗出口梗阻性便秘能获得更优的远期疗效。

关键词：吻合器痔上黏膜环切术直肠黏膜柱状缝扎术出口梗阻型便秘