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畜牧兽医科技信息 2024年第4期 55-58页

作者：黄海岩李东丽徐嘉奇孙海生呼木吉乐吕艳洁黄碧月翁牛特旗农牧局内蒙古赤峰024500 松山区大庙镇人民政府内蒙古赤峰024042

【目的】本实验旨在研究国内收集的5株厚垣孢普可尼亚菌(P.chlammydosporia)在水琼脂培养基(WA)下菌丝形态特征、液体培养基下的产孢量及生物量。【方法】在无菌条件下将5株厚垣孢普可尼亚菌(P.chlammydosporia)接种于水琼脂培养基(WA)... 详细信息

【目的】本实验旨在研究国内收集的5株厚垣孢普可尼亚菌(P.chlammydosporia)在水琼脂培养基(WA)下菌丝形态特征、液体培养基下的产孢量及生物量。【方法】在无菌条件下将5株厚垣孢普可尼亚菌(P.chlammydosporia)接种于水琼脂培养基(WA),连续培养7 d,400×显微镜下观察其分生孢子、厚垣孢子及菌丝形态特征。将培养25 d的5株菌切成1cm×1cm的小块,按5块/瓶的量接入液体培养基,置于恒摇床28℃,200 r/min连续暗培养10 d,取出进行产孢量及生物量测算。【结果】5株厚垣孢普可尼亚菌(P.chlammydosporia)均见无色透明、无隔、有分支的菌丝;厚垣孢子间生、砖格状,体积为分生孢子的10倍左右;分生孢子呈圆形或椭圆形,顶生或间生,400×下可见清晰的分生孢子;分生孢子量依次为:PC30612>PC81921>PC30611>PC30601>PC30603,具体产值为:2.967x108个/mL,2.8x108个/mL,1.733x108,7.67x107个/mL,4.67x107个/mL;生物量依次为:PC81921>PC30611>PC30612>PC30601>PC30603,具体产值为:18.59 mg/mL,17.56 mg/mL,16.15 mg/mL,12.45 mg/mL,8.69 mg/mL。【结论】PC81921的分生孢子量最大体积最小,PC30603分生孢子量最小体积最大。PC81921的生物量最大,PC30603的生物量最小,分生孢子量与生物量成正比。

关键词：厚垣孢普可尼亚菌液体培养基菌丝形态产孢量生物量

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EGFRvⅢ胞外区特异性单域抗体的制备与鉴定

EGFRvⅢ胞外区特异性单域抗体的制备与鉴定

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作者：徐嘉奇内蒙古农业大学

学位级别：硕士

表皮生长因子受体(EGFR)是ErbB受体家族中的一种跨膜酪氨酸激酶受体,在人体组织正常的情况下仅表达在上皮细胞表面。大多数的胶质母细胞瘤(GBM)显著表达EGFR。当EGFR活化后,下游的信号通路与蛋白激酶才会相继活化,开始对相关基因的调控... 详细信息

表皮生长因子受体(EGFR)是ErbB受体家族中的一种跨膜酪氨酸激酶受体,在人体组织正常的情况下仅表达在上皮细胞表面。大多数的胶质母细胞瘤(GBM)显著表达EGFR。当EGFR活化后,下游的信号通路与蛋白激酶才会相继活化,开始对相关基因的调控,调节着肿瘤细胞的增殖和死亡。表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)是GBM中最为常见的EGFR突变。研究发现正常细胞中不表达EGFRvⅢ,EGFRvⅢ仅表达于癌细胞中,这一发现使其成为癌症治疗的理想生物标志物。随着对EGFRvⅢ和其信号通道研究的不断深入,逐渐确认恶性肿瘤组织中EGFRvⅢ的异常表现与恶性程度和信号通路有直接联系。单域抗体(Single domain antibody,sd Ab),分子量约12-15 kDa。是一种特殊的二聚体抗体。与传统的单克隆抗体(150 kDa)相比,sdAb具有体积小、亲和力高、易表达、渗透性好、稳定性高(热、pH和离液介质)、生产成本低等特点。基于此,我们通过免疫健康双峰驼并测定EGFRvⅢ胞外区蛋白的抗体效价,采取血液分离淋巴细胞、反转录成cDNA,扩增VHH基因与pMECS载体连接,成功建立EGFRvⅢ胞外区蛋白单域抗体库。使用EGFRvⅢ胞外区蛋白作为筛选抗原对单域抗体噬菌体抗体库进行筛选,选取了Phage ELISA鉴定结果中对EGFRvⅢ胞外区蛋白相对结合能力较强的一株克隆,通过质粒重组,将单域抗体基因片段与表达载体pET-22b载体连接,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,进行诱导表达和纯化,从而得到高结合活性的EGFRvⅢ胞外区蛋白特异性单域抗体。本试验制备的针对EGFRvⅢ胞外区特异性单域抗体为利用EGFRvⅢ为靶点的GBM诊断和治疗提供了一种新的选择。

关键词：胶质母细胞瘤 EGFRvⅢ 单域抗体噬菌体展示技术

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EGFRvⅢ胞外区基因重组腺病毒的构建及单域抗体的制备

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生物工程学报 2022年第9期38卷 3551-3562页

作者：张慧敏徐嘉奇程艺付山刘艳龙胡宇靖杜雅楠包福祥内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古农业大学农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

本研究旨在构建能够表达人表皮生长因子EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒,并通过免疫骆驼构建噬菌体单域抗体库,筛选和制备EGFRvⅢ胞外区特异性单域抗体并对其进行鉴定。从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模... 详细信息

本研究旨在构建能够表达人表皮生长因子EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒,并通过免疫骆驼构建噬菌体单域抗体库,筛选和制备EGFRvⅢ胞外区特异性单域抗体并对其进行鉴定。从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板扩增EGFRvⅢ胞外区基因,并连接pAdTrack-CMV质粒载体,转化含有pAdEasy-1的大肠杆菌(Escherichia coli)BJ5183感受态细胞,获得同源重组质粒转染HEK293A细胞,得到表达EGFRvⅢ胞外区蛋白的重组腺病毒。利用重组腺病毒免疫双峰驼,构建EGFRvⅢ胞外区特异性噬菌体单域抗体库,并以EGFRvⅢ蛋白为筛选抗原,对其进行筛选,对筛选得到的单域抗体进行诱导表达、纯化及鉴定。结果表明获得了表达EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒。构建得到的EGFRvⅢ特异性噬菌体单域抗体库的库容为1.4×109;经过3轮富集和筛选,通过噬菌体ELISA筛选出31个与EGFRvⅢ胞外区蛋白结合的阳性克隆,并对OD450值较高的重组单域抗体E14进行了表达和纯化。经ELISA鉴定,重组单域抗体E14可与EGFRvⅢ胞外区蛋白产生抗原抗体结合反应,具有较高的亲和力。说明制备的EGFRvⅢ特异性噬菌体单域抗体库具有较高的库容和多样性,且筛选得到的单域抗体具有较高的抗原活性和免疫学反应性,为今后以EGFRvⅢ为靶点的恶性肿瘤的诊断和治疗提供新的实验依据。

关键词： EGFRvⅢ EGFRvⅢ胞外区蛋白重组腺病毒单域抗体抗体库

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EGFRvIII胞外区基因重组腺病毒的构建及单域抗体的制备

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生物工程学报 2022年

作者：张慧敏徐嘉奇程艺付山刘艳龙胡宇靖杜雅楠包福祥内蒙古农业大学兽医学院内蒙古农业大学农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室

本研究旨在构建能够表达人表皮生长因子EGFRvIII胞外区基因的重组腺病毒，并通过免疫骆驼构建噬菌体单域抗体库，筛选和制备EGFRvIII胞外区特异性单域抗体并对其进行鉴定。从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA，反转录为cDNA，以cDN...

本研究旨在构建能够表达人表皮生长因子EGFRvIII胞外区基因的重组腺病毒，并通过免疫骆驼构建噬菌体单域抗体库，筛选和制备EGFRvIII胞外区特异性单域抗体并对其进行鉴定。从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA，反转录为cDNA，以cDNA为模板扩增EGFRvIII胞外区基因，并连接pAdTrack-CMV质粒载体，转化含有pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞，获得同源重组质粒转染HEK293A细胞，得到表达EGFRvIII胞外区蛋白的重组腺病毒。利用重组腺病毒免疫双峰驼，构建EGFRvIII胞外区特异性噬菌体单域抗体库，并以EGFRvIII蛋白为筛选抗原，对其进行筛选，对筛选得到的单域抗体进行诱导表达、纯化及鉴定。结果表明获得了表达EGFRvIII胞外区基因的重组腺病毒。构建得到的EGFRvIII特异性噬菌体单域抗体库的库容为1.4×10;；经过3轮富集和筛选，通过phageELISA筛选出31个与EGFRvIII胞外区蛋白结合的阳性克隆，并对OD;值较高的重组单域抗体E14进行了表达和纯化。经ELISA 鉴定，重组单域抗体E14可与EGFRvIII胞外区蛋白产生抗原抗体结合反应，具有较高的亲和力。说明制备的EGFRvIII特异性噬菌体单域抗体库具有较高的库容和多样性，且筛选得到的单域抗体具有较高的抗原活性和免疫学反应性，为今后以EGFRvIII为靶点的恶性肿瘤的诊断和治疗提供新的实验依据。

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我国农村金融问题及法律规制的研究

我国农村金融问题及法律规制的研究

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作者：徐嘉奇吉林财经大学

学位级别：硕士

坚持以科学发展观为指导，构建和谐社会主义社会以及建设社会主义新农村的战略方针将“三农问题”发展提到了前所未有的历史高度，并摆在了全新的现代化发展前沿。发展“三农”解决好“三农问题”首先要做的是搞活农村经济，从而带动发... 详细信息

坚持以科学发展观为指导，构建和谐社会主义社会以及建设社会主义新农村的战略方针将“三农问题”发展提到了前所未有的历史高度，并摆在了全新的现代化发展前沿。发展“三农”解决好“三农问题”首先要做的是搞活农村经济，从而带动发展。以这个角度出发，农村的经济发展脚步过慢这个问题出现在人们的视野中，而导致这一现象产生的直接原因是由于资金的不足制约其发展。因此，搞活农村经济，先要搞活农村金融。面对当前我国农村金融的困境，完善我国农村金融相关法律制度成为当下急需解决的主要问题。本文通过以新农村金融制度的构建方向为前提;并对现有我国农村金融法律制度的立法现状及缺陷进行分析，结合发达国家，如日本、美国的农村金融法律制度的发展经历，针对我国现实情况，对我国农村金融相关立法规范文件进行完善性的立法参考意见。就我国农村金融法律现状来讲，我国农村金融法律制度附属于商业金融法律体系中，导致农村金融法律中一部分内容并不适用于农村金融管理及规范;个别领域存在法律缺陷，会出现一些灰色地带，滋生了如高利贷等现象的产生;在农村非正规融资方面存在法律上的空白、以及农村金融市场监管混乱等问题。鉴于此，面对我国农村金融机构改革的现实需要。笔者提出了构建农村正规金融与非正规融资相结合的金融架构形式，使农村金融市场摆脱单一形式，建设一个稳定、竞争适度、并有良好发展前景的金融市场。在完善农村金融法律制度上，笔者认为，我国的农村金融律法制度适合走一条，综合立法与分业立法相结合的道路。在这个特殊时期里，应着重分业立法的进行。并针对农村合作金融与农村非正规融资提出了具体的完善路径。

关键词：农村金融合作金融法律规范

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我国农村金融问题及法律规制

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行政与法 2012年第5期 17-22页

作者：李晓楠徐嘉奇吉林省建设银行吉林长春130061 吉林财经大学吉林长春130117

构建和谐社会和建设社会主义新农村的战略方针,将"三农问题"摆在了现代化发展的最前沿。本文分析了我国农村金融立法的现状及存在的问题,并结合国外农村立法的经验,提出在我国应构建农村正规金融与非正规融资相结合的金融架构形式。在... 详细信息

构建和谐社会和建设社会主义新农村的战略方针,将"三农问题"摆在了现代化发展的最前沿。本文分析了我国农村金融立法的现状及存在的问题,并结合国外农村立法的经验,提出在我国应构建农村正规金融与非正规融资相结合的金融架构形式。在完善农村金融法律制度建设过程中,应走综合立法与分业立法相结合的道路。我国农村金融市场应尽快实现稳定发展,竞争适度的局面。

关键词：农村金融合作金融法律规范

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