EGFRvIII胞外区基因重组腺病毒的构建及单域抗体的制备
Construction of recombinant adenovirus expressing EGFRvIII extracellular domain gene and preparation of single domain antibody作者机构：内蒙古农业大学兽医学院 内蒙古农业大学农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室
出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)
年 卷 期：2022年
核心收录：
学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
基 金：国家自然科学基金(81660297) 内蒙古农业大学兽医学院青年人才创新基金(2015QNJJ01)
摘 要：本研究旨在构建能够表达人表皮生长因子EGFRvIII胞外区基因的重组腺病毒，并通过免疫骆驼构建噬菌体单域抗体库，筛选和制备EGFRvIII胞外区特异性单域抗体并对其进行鉴定。从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA，反转录为cDNA，以cDNA为模板扩增EGFRvIII胞外区基因，并连接pAdTrack-CMV质粒载体，转化含有pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞，获得同源重组质粒转染HEK293A细胞，得到表达EGFRvIII胞外区蛋白的重组腺病毒。利用重组腺病毒免疫双峰驼，构建EGFRvIII胞外区特异性噬菌体单域抗体库，并以EGFRvIII蛋白为筛选抗原，对其进行筛选，对筛选得到的单域抗体进行诱导表达、纯化及鉴定。结果表明获得了表达EGFRvIII胞外区基因的重组腺病毒。构建得到的EGFRvIII特异性噬菌体单域抗体库的库容为1.4×10;；经过3轮富集和筛选，通过phageELISA筛选出31个与EGFRvIII胞外区蛋白结合的阳性克隆，并对OD;值较高的重组单域抗体E14进行了表达和纯化。经ELISA 鉴定，重组单域抗体E14可与EGFRvIII胞外区蛋白产生抗原抗体结合反应，具有较高的亲和力。说明制备的EGFRvIII特异性噬菌体单域抗体库具有较高的库容和多样性，且筛选得到的单域抗体具有较高的抗原活性和免疫学反应性，为今后以EGFRvIII为靶点的恶性肿瘤的诊断和治疗提供新的实验依据。
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