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CpOGA与核心链霉亲和素Stv13融合表达用于检测蛋白质O-GlcNAc修饰

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中国生物化学与分子生物学报 2024年

作者：黎先感杨明鲁莹李玲马骞李静张连文首都师范大学生命科学学院DNA损伤应答北京市重点实验室南开大学药学院天津分子药物研究重点实验室

氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰(O-GlcNAc修饰)是一种发生在蛋白质丝氨酸、苏氨酸羟基上的一种动态、可逆的翻译后修饰。O-GlcNAc修饰在细胞的许多关键过程中发挥重要作用，也是研究阿尔茨海默病和糖尿病等的重要途径，但是常用于O-Glc... 详细信息

氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰(O-GlcNAc修饰)是一种发生在蛋白质丝氨酸、苏氨酸羟基上的一种动态、可逆的翻译后修饰。O-GlcNAc修饰在细胞的许多关键过程中发挥重要作用，也是研究阿尔茨海默病和糖尿病等的重要途径，但是常用于O-GlcNAc蛋白检测的抗体特异性或者检测分子量范围仍存在问题且耗时(～36h)过长，对后续研究造成困扰。在本研究中，我们设计构建了产气荚膜梭菌OGA(O-GlcNAcase)突变体(CpOGAD298N)与核心链霉亲和素Stv13融合表达质粒pET28a-CpOGAD298N-Stv13。将质粒pET28a-CpOGAD298N-Stv13转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达，获得了融合蛋白质CpOGAD298N-Stv13。通过CpOGAD298N特异性结合O-GlcNAc的能力及生物素-亲和素特异性亲和作用，设计了Far-estern blot(Far-WB)用于检测蛋白质O-GlcNAc修饰，利用sOGT(short form O-GlcNAc transferase)、去O-GlcNAc修饰sOGT、细胞裂解液样本及人肝细胞核因子1A(hepatocyte fuclear factor 1A，HNF1A)对该方法进行验证。本研究成功构建了一种蛋白质O-GlcNAc修饰检测方法，耗时相对O-GlcNAc特异性抗体缩短至5～7 h，丰富了蛋白质O-GlcNAc修饰的检测方法，为其后续研究奠定了基础。

关键词：氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰 CpOGA -Stv13 生物素 Far-Western blot

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新能源发电企业筹融资管理能力的提升途径

中国中小企业 2024年第4期 192-194页

作者：张连文浙江浙能新能源运营管理有限公司甘肃分公司

近几年,全球能源需求愈加迫切,所涉及的环境问题相对突出,使得各国愈加关注新能源产业,为新能源发电企业发展带来新契机。而新能源发电企业运行过程中,所涉及的资金量相对较多,不仅用于技术研发,而且可用于设备采购、新能源发电项目建设... 详细信息

近几年,全球能源需求愈加迫切,所涉及的环境问题相对突出,使得各国愈加关注新能源产业,为新能源发电企业发展带来新契机。而新能源发电企业运行过程中,所涉及的资金量相对较多,不仅用于技术研发,而且可用于设备采购、新能源发电项目建设等,对资金管理提出更高要求。若企业筹融资管理存在一定不足,难以为企业各项活动进行提供支持。故而,企业应提升对筹融资管理的重视程度,强化自身管理能力,对现金流问题加以解决,提升企业声誉。

关键词：企业声誉设备采购新能源发电新能源产业能源需求筹融资管理现金流问题资金量

CpOGA^(D298N)与核心链霉亲和素Stv13融合表达用于检测蛋白质O⁃GlcNAc修饰

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第4期40卷 513-519页

作者：黎先感杨明鲁莹李玲马骞李静张连文南开大学药学院天津分子药物研究重点实验室天津300350 首都师范大学生命科学学院 DNA损伤应答北京市重点实验室北京100048

氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰(O-GlcNAc修饰)是一种发生在蛋白质丝氨酸、苏氨酸羟基上的一种动态、可逆的翻译后修饰。O-GlcNAc修饰在细胞的许多关键过程中发挥重要作用,也是研究阿尔茨海默病和糖尿病等的重要途径,但是常用于O-GlcNA... 详细信息

氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰(O-GlcNAc修饰)是一种发生在蛋白质丝氨酸、苏氨酸羟基上的一种动态、可逆的翻译后修饰。O-GlcNAc修饰在细胞的许多关键过程中发挥重要作用,也是研究阿尔茨海默病和糖尿病等的重要途径,但是常用于O-GlcNAc蛋白检测的抗体特异性或者检测分子量范围仍存在问题且耗时(~36 h)过长,对后续研究造成困扰。在本研究中,我们设计构建了产气荚膜梭菌OGA(O-GlcNAcase)突变体(CpOGA^(D298N))与核心链霉亲和素Stv13融合表达质粒pET28a-CpOGA^(D298N)-Stv13。将质粒pET28a-CpOGA^(D298N)-Stv13转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,获得了融合蛋白质CpOGA^(D298N)-Stv13。通过CpOGA^(D298N)特异性结合O-GlcNAc的能力及生物素-亲和素特异性亲和作用,设计了Far-Western blot(Far-WB)用于检测蛋白质O-GlcNAc修饰,利用sOGT(short form O-GlcNAc transferase)、去O-GlcNAc修饰sOGT、细胞裂解液样本及人肝细胞核因子1A(hepatocyte fuclear factor 1A,HNF1A)对该方法进行验证。本研究成功构建了一种蛋白质O-GlcNAc修饰检测方法,耗时相对O-GlcNAc特异性抗体缩短至5~7 h,丰富了蛋白质O-GlcNAc修饰的检测方法,为其后续研究奠定了基础。

关键词：氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰 CpOGA^(D298N)-Stv13 生物素 Far-Western blot

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哈密瓜物流堆码运输包装件共振传递特性研究

包装与食品机械 2024年第1期42卷 1-6页

作者：张连文谢晓定武玉柱张超尚志勇徐斌李淳昊天津商业大学天津300134 新疆工程学院乌鲁木齐830023 新疆农业科学院农产品贮藏加工研究所乌鲁木齐830091

为优化设计缓冲包装件,以及减缓运输过程中由共振引起的哈密瓜贮藏品质下降,采用哈密瓜及其包装瓦楞纸箱作为研究对象,设置5层堆码高度,进行模拟运输变频振动试验,结合频谱分析加汉宁窗函数测定各堆码包装件的固有频率,随后进行模拟运... 详细信息

为优化设计缓冲包装件,以及减缓运输过程中由共振引起的哈密瓜贮藏品质下降,采用哈密瓜及其包装瓦楞纸箱作为研究对象,设置5层堆码高度,进行模拟运输变频振动试验,结合频谱分析加汉宁窗函数测定各堆码包装件的固有频率,随后进行模拟运输定频振动试验。结果表明,加汉宁窗函数有效提高了频谱分析精度,获得5层包装件的固有频率分别为9.88,54.75,10.06,10.31,10.42 Hz;10 Hz定频振动下,5层包装件的峰值加速度分别为5.99,3.18,6.37,6.56,6.81 g,振动传递率分别为53.61%,28.52%,57.07%,58.76%,61.02%;54.75 Hz定频振动下,5层包装件的峰值加速度分别为1.29,6.34,0.99,0.87,0.23 g,振动传递率分别为8.38%,45.04%,6.47%,6.04%,0.75%。研究为其他包装件寻求更精确的共振频率,从而为运输过程中有效避开共振频率,达到内装果品减损目的提供参考。

关键词：堆码包装件哈密瓜模拟运输共振传递特性加窗函数固有频率

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加标理论与关系结构及特征加标解析

解放军外国语学院学报 2022年第1期45卷 11-19,160页

作者：张连文济南大学外国语学院山东济南250022

本文基于特征加标和语段加标的交互作用以及简化运算阐释关系结构的加标和推导,聚焦关系结构的(重)加标构型和特征属性,结合附接语理论、加标算法及功能语类(重)投射拓展关系和附接加标的接口解释效应。中心语NRC提升连带边界SPEC-α实... 详细信息

本文基于特征加标和语段加标的交互作用以及简化运算阐释关系结构的加标和推导,聚焦关系结构的(重)加标构型和特征属性,结合附接语理论、加标算法及功能语类(重)投射拓展关系和附接加标的接口解释效应。中心语NRC提升连带边界SPEC-α实现(重)加标,附接语加标产生语义接口效应,其挂靠的结构高度决定了辖域。关系结构加标程序须整合语链识别投射层级、附接语加标和关系标准特征[Rel]。算子移位须获得加标允准,重标算法扩展解释了分词类简化关系结构,重标语类特征构成解释规则的允准条件。关系结构加标映射指称语义和严格限制性辖域关系。加标理论解决了部分量化结构中关系结构与附接结构的加标统一性。优选规则取决于加标层级和限定语D_([+N])的强语类特征,功能内显和外隐中心语以及范畴化重标明晰了自由关系结构的解释规则及其理据。关系结构加标等同性条件和特征运算强化了加标理论的语义接口条件。

关键词：加标理论关系结构语类特征强语段中心语标准特征

运输过程中振动对哈密瓜的机械损伤和贮藏品质的影响

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新疆农业科学 2022年第2期59卷 458-465页

作者：纪锋李志元尚志勇张连文新疆工程学院数理学院乌鲁木齐830023 新疆农业大学林学与园艺学院乌鲁木齐830052

【目的】研究运输过程中不同强度振动对哈密瓜机械损伤及贮藏品质的影响,为寻找减轻运输振动逆境对哈密瓜贮藏品质影响的方法提供理论依据。【方法】模拟哈密瓜在运输过程中的振动条件,哈密瓜的包装设置为半筐包装方式和全筐包装方式。... 详细信息

【目的】研究运输过程中不同强度振动对哈密瓜机械损伤及贮藏品质的影响,为寻找减轻运输振动逆境对哈密瓜贮藏品质影响的方法提供理论依据。【方法】模拟哈密瓜在运输过程中的振动条件,哈密瓜的包装设置为半筐包装方式和全筐包装方式。在经过2、4和6 h的振动处理后分析哈密瓜的机械损伤变化。测定与分析其失重率、可溶性固形物、硬度、果实果胶含量以及相关性水解酶。【结果】在采收后12 d,半筐处理6 h后(T_(3))的商品率下降到最低,为70.00%,腐烂指数为0.96,其硬度相比对照降低了12.64%;采收第9 d时,半筐振动6 h处理(T_(3))的失重率较对照增加幅度最大,增加幅度为8.1%。各个处理的哈密瓜的可溶性固形物含量在13.91~16.52%,总体变化趋势较小。此外,半框振动处理时(T_(3))的单果平均损伤数最高,可达4.65 g个,损伤面积最大为4.34%。振动还诱导了果胶酯酶(PE)和多聚半乳糖醛酸酶(PG)的大量积累,尤其在采收第9 d,半筐振动6 h处理(T_(3))的PE和PG相对对照分别增加了224.13%和361.29%,使细胞壁主要成分原果胶、总果胶含量快速降低,各个处理的哈密瓜的原果胶含量变化范围在0.62~2.13 mg/g和0.79~2.59 mg/g。相对于半筐的包装方式,全筐的包装方式会减轻果实在贮运中受到的机械损伤。【结论】运输振动不但造成哈密瓜的机械损伤,还会导致哈密瓜的快速软化,降低其储藏品质。相比于半筐处理方式,全筐方式进行哈密瓜包装会降低哈密瓜因运输振动造成的机械损伤,提高哈密瓜的商品价值。

关键词：振动哈密瓜机械损伤贮藏品质

HC2作为急性缺血性脑卒中诊断的潜在生物标志物

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南开大学学报（自然科学版） 2023年第3期56卷 34-38页

作者：鲁莹朱彧刘丽李玲张连文南开大学药学院天津市分子药物研究重点实验室天津300353 天津市环湖医院检验科天津300350

为了探究急性缺血性脑卒中(Acute ischemic stroke,AIS)患者和对照组静脉血血清中的O-GlcNAc糖蛋白差异,筛选AIS诊断的潜在生物标志物.首先对AIS和对照组血清中的O-GlcNAc糖基化修饰进行检测,发现AIS的O-GlcNAc修饰程度明显高于对照组(P... 详细信息

为了探究急性缺血性脑卒中(Acute ischemic stroke,AIS)患者和对照组静脉血血清中的O-GlcNAc糖蛋白差异,筛选AIS诊断的潜在生物标志物.首先对AIS和对照组血清中的O-GlcNAc糖基化修饰进行检测,发现AIS的O-GlcNAc修饰程度明显高于对照组(P<0.05),通过CpOGAD298N富集AIS和对照组血清中的OGlcNAc蛋白并进行质谱鉴定,得到差异蛋白肝素辅助因子Ⅱ(Heparin Cofactor Ⅱ,HC2),Western blot检测结果表明,富集蛋白中HC2丰度在AIS组显著高于对照组(P<0.01),ROC曲线分析显示,HC2对急性缺血性脑卒中具有潜在的诊断价值(AUC=0.882),并且高于常用的血脂指示标志.

关键词：急性缺血性脑卒中 O-GlcNAc糖蛋白 HC2 潜在生物标志物

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特指问句的语义所指依存限制

语言教学与研究 2007年第5期 31-38页

作者：张连文中国政法大学外国语学院 102249

本文以Jackendoff的句法、语义平行的语言生成机制、Csuri(1996)和Jackendoff(2002)所指依存和更简句法理论的语义限制为基础,对所指依存的语义限制做了系统的理顺,并对所指层的英语特指问句的所指依存进行了编码。论证了在特指问句的wh... 详细信息

本文以Jackendoff的句法、语义平行的语言生成机制、Csuri(1996)和Jackendoff(2002)所指依存和更简句法理论的语义限制为基础,对所指依存的语义限制做了系统的理顺,并对所指层的英语特指问句的所指依存进行了编码。论证了在特指问句的wh短-语提取除了受到句法的局部性限制还要受到概念结构CS所指层中和事件联系的算子—变量的语义所指依存限制。

关键词：特指问句所指层所指依存语义限制

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基于语段计算框架的句法-韵律接口效应

外语学刊 2013年第1期 21-36页

作者：张连文中国政法大学北京102249

本文在MP语段理论(PT)(Chomsky 2001,2004,2008,2010)框架中结合循环拼读模式(MSO)(Uriagereka 1999,2012)对韵律拼读、焦点重音等句法-韵律接口效应进行研究;在Selkirk(2001)和Kratzer&Selkirk(2007)以及Ishihara(2007)的基础上提出强语段的阻断效应,从跨语言视角系统分析基于语段拼读域(SOD)的韵律拼读、短语和焦点重音计算以及信息焦点语调(FI)等核心问题,旨在通过语段拼读域与韵律计算域的严格关系揭示句法-韵律接口及其制约条件的本质。证实韵律主短语MaP和焦点语调都是由多重拼读(MSO)在语段推导过程中循环形成的;研究得出基于MSO模式的语段拼读域(SOD)是韵律主短语MaP等音系计算和解释句法-韵律映射机制的关键局部域。

关键词：语段推导循环拼读拼读域句法-音韵接口韵律主短语