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有氧运动对二甲基苯蒽诱导大鼠乳腺癌发生及其机制探讨

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中华肿瘤防治杂志 2013年第24期20卷 1878-1881页

作者：齐殿君张清富冯亮刘冰中国医科大学附属第一医院全科医学科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院病理科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院乳腺外科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院普通外科辽宁沈阳110001

目的:研究中等强度有氧运动对二甲基苯蒽(7,12-dimethyl-benz{a}anthracene,DMBA)诱导大鼠乳腺癌发生的影响。方法:120只7周龄无特定病原体级(SPF)雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠按2×2析因设计随机数字表法分为空白对照组(CON)、运动对照... 详细信息

目的:研究中等强度有氧运动对二甲基苯蒽(7,12-dimethyl-benz{a}anthracene,DMBA)诱导大鼠乳腺癌发生的影响。方法:120只7周龄无特定病原体级(SPF)雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠按2×2析因设计随机数字表法分为空白对照组(CON)、运动对照组(ECON)、药物诱导组(DI)和运动+药物诱导组(EDI),每组30只。ECON组和EDI组进行有氧运动训练,每周5d,25mL/min,30min/d。药物诱导组和运动+药物诱导组给予1mL的10mg/mL DMBA麻油溶液灌胃2次。每2周观察1次大鼠的体质量、乳腺肿瘤体积和荷瘤数。18周后处死所有大鼠,对所有乳房肿瘤进行病理诊断,并测定脂肪湿重、脂肪指数、Lee’s指数、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和血清雌二醇(E2)水平。结果:实验终末CON组、ECON组、DI组和EDI组的体质量分别为(352.67±32.93)、(322.30±29.18)、(296.50±28.60)和(289.30±27.05)g。析因分析显示,有氧运动(F=12.149,P=0.001)和DMBA(F=68.442,P0.05。有氧运动可以显著影响大鼠血清TG、TC、HDL-C和LDL-C和雌激素水平,P0.05。结论:有氧运动可以抑制二甲基苯蒽诱导的大鼠乳腺癌的发生,其机制可能与有氧运动通过影响大鼠体脂水平而降低体内E2水平有关。

关键词：乳腺肿瘤有氧运动二甲基苯蒽雌二醇大鼠裸

RNA干扰技术抑制乙酰肝素酶表达对肺癌细胞生物学行为的影响

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RNA干扰技术抑制乙酰肝素酶表达对肺癌细胞生物学行为的影响

作者：张清富中国医科大学

学位级别：硕士

前言侵袭和转移是影响肺癌预后的一个重要恶性行为,目前肿瘤侵袭转移的机制尚不完全清楚,降解细胞外基质(extracellular marix,ECM)组成和基底膜(basementmembrane,BM)是一个重要的步骤,乙酰肝素酶是一种内源性β-葡萄糖苷酸内切酶,能... 详细信息

前言侵袭和转移是影响肺癌预后的一个重要恶性行为,目前肿瘤侵袭转移的机制尚不完全清楚,降解细胞外基质(extracellular marix,ECM)组成和基底膜(basementmembrane,BM)是一个重要的步骤,乙酰肝素酶是一种内源性β-葡萄糖苷酸内切酶,能在一些特定位点可切割硫酸乙酰肝素蛋白多糖的硫酸乙酰肝素侧链,同时释放出一些与硫酸乙酰肝素结合的生长因子(如VEGF、bFGF等),从而促进细胞侵袭性及肿瘤血管形成。然而目前乙酰肝素酶在肺癌中的作用尚不清楚。本研究我们通过构建靶向人乙酰肝素酶基因短发夹状双链RNA(shRNA)真核表达质粒(pshRNA-Hpa),探讨RNA干扰(RNAi)抑制肺癌细胞乙酰肝素酶基因的表达及其对肺癌细胞生物学行为的影响。材料与方法 1、细胞与裸鼠:人肺巨细胞癌BE1细胞系用含有10%胎牛血清的DMEM培养基,37℃,5%CO的培养箱内培养。BALB/c裸鼠购自中国医学科学院实验动物研究所,在恒温、恒湿、无特定病原体的空气洁净层流架内饲养。 2、重组表达质粒pshRNA-Hpa的构建:选取人乙酰肝素酶mRNA中的特异性核苷酸片段为靶标,用siRNA Target Finder软件分析,设计、合成4对siRNA,分别瞬时转染BE1细胞系,从中筛选出1对高效链。用该高效链设计shRNA序列构建重组表达质粒,测序确定序列正确性。 3、转染:按照LipofectAMINE2000说明书操作,G418筛选,挑取存活细胞克隆,收集细胞,RT-PCR、Western-blot检测乙酰肝素酶mRNA及蛋白表达情况,鉴定阳性克隆,挑选获得稳定转染的肺癌细胞株。 4、流式细胞仪检测:按照凋亡试剂盒操作说明进行,Annexin-FITC/PI双标后经流式细胞仪检测凋亡发生的比例。 5、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法:接种各组细胞至96孔培养板,培养24-120h,按照操作说明进行,用酶联免疫检测仪测量各孔在490nm处的吸光值(A490),根据吸光值绘制细胞增殖曲线。 6、Transwell小室检测:接种各组细胞分别至Matrigel包被的含有微孔滤膜的Transwell小室,分别培养24h后,4%多聚甲醇固定,苏木素染色,显微镜观察细胞体外侵袭能力的变化。 7、裸鼠接种及HE染色:实验动物分4组,每组5只,动物接种后5周处死动物,分别取各裸鼠的各器官做HE染色,观察肿瘤的转移情况。 8、使用SPSS14.0统计软件进行数据处理,以P＜0.05为有统计学意义。结果 1、成功构建重组质粒pshRNA-Hpa 测序结果表明,重组质粒pshRNA-Hpa编码序列与设计的DNA片段完全一致.表明已成功建立乙酰肝素酶特异的shRNA表达重组载体。 2、转染pshRNA-Hpa抑制乙酰肝素酶表达 RT-PCR和蛋白质印迹分析显示转染pshRNA-Hpa的BE1细胞乙酰肝素酶mRNA及蛋白表达明显降低,与未转染对照组、转染空载体组、转染阴性对照shRNA组比较差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。而各对照组乙酰肝素酶mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)。 3、转染pshRNA-Hpa重组体抑制BE1细胞的增殖侵袭能力,诱导细胞凋亡。 MTT法测定结果显示,pshRNA-Hpa重组质粒转染的细胞增殖能力明显低于空载体转染组和空白对照组(P值均＜0.01);而各对照细胞相比无明显差异(P值均＞0.05)。流式细胞仪检测结果显示转染pshRNA-Hpa重组体组细胞凋亡率11.28%±1.05%,明显高于各对照组细胞(P＜0.01)。Transwell侵袭试验结果显示:BE1细胞侵袭相对数为37.0±2.6,转染pshRNA-Hpa重组体细胞侵袭相对数为8.7±3.5。转染pshRNA-Hpa重组体组细胞侵袭细胞数明显低于其他对照组细胞,差异具有显著性(P值均＜0.01)。 4、抑制乙酰肝素酶表达可抑制肺癌生长和转移裸鼠体内实验结果表明:pshRNA-Hpa重组质粒可以显著抑制肿瘤生长(抑制率为38.13%),肿瘤转移能力也明显减弱。结论靶向乙酰肝素酶重组shRNA质粒pshRNA-Hpa能有效抑制BE1细胞中乙酰肝素酶的表达,并能抑制肿瘤的增殖、侵袭、转移,促进细胞的凋亡,RNAi为肺癌的基因治疗提供了一种新策略。

关键词：肺肿瘤 RNA干扰乙酰肝素酶侵袭转移

有氧运动对DMBA诱导大鼠乳腺癌发生的影响及其机制的研究

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中国妇幼保健 2014年第18期29卷 2981-2983页

作者：齐殿君张清富冯亮刘冰中国医科大学附属第一医院辽宁沈阳110001

目的:研究有氧运动对二甲基苯蒽(DMBA)诱导大鼠乳腺癌发生的影响并探讨其可能的机制。方法:将120只8周龄雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为空白对照组(CON)、运动对照组(ECON)、药物诱导组(DI)和运动+药物诱导组(EDI),每组30只。ECON... 详细信息

目的:研究有氧运动对二甲基苯蒽(DMBA)诱导大鼠乳腺癌发生的影响并探讨其可能的机制。方法:将120只8周龄雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为空白对照组(CON)、运动对照组(ECON)、药物诱导组(DI)和运动+药物诱导组(EDI),每组30只。ECON组和EDI组进行有氧运动训练,运动强度为25 m/min,30 min/d,每周5天。DI组和EDI组分别给予1 ml 10 mg/ml的DMBA麻油溶液灌胃2次。每2周记录1次大鼠的体重、荷瘤数和乳腺肿瘤体。18周后处死所有大鼠,对大鼠乳房肿瘤进行病理诊断,处死大鼠前测定血清TNF-а、IL-6、CRP和sE-selectin水平。结果:实验结束时ECON组体重为(353.8±31.13)g,CON组体重为(325.7±28.52)g,两组相比体重明显下降,差异有统计学意义,P0.05。DI组诱发乳腺癌概率(30/30)显著高于EDI组(24/30),两组之间比较,差异有统计学意义,P<0.05。DI组的潜伏期为(13.83±2.83)天,EDI组的潜伏期为(15.58±2.21)天,组间差异有统计学意义(P<0.05)。DI组的荷瘤数为3.03±1.16,EDI组的荷瘤数为2.21±1.06,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。DI组的肿瘤体积为(2 185.03±528.21)mm3,EDI组的肿瘤体积为(1 763.08±519.44)mm3,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ECON组与CON组相比及EDI组与DI组相比,TNF-а、CRP、sE-selectin水平显著降低,血清IL-6水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:有氧运动可以抑制DMBA诱导大鼠乳腺癌的发生,降低全身慢性炎症水平可能是其作用机制之一。

关键词：乳腺癌有氧运动炎症因子大鼠

CD20阳性的结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤一例

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中华病理学杂志 2019年第5期48卷 404-406页

作者：朱桂香张清富邱雪杉中国医科大学附属第一医院病理科暨基础医学院病理学教研室沈阳110001

报道1例发生于鼻腔鼻窦部的CD20阳性的结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤(extranodal natural killer/T-celllymphoma,nasal type,ENKTCL)□患者女,41岁。以鼻塞为主要表现,免疫表型:***3弥漫强阳性表达,CD56.T细胞胞质内抗原(TIA)1、CD2,bcl-6及bcl-2弥漫阳性表达,EB病毒编码的小RNA(EBER)原位杂交阳性,PAX5、CD99、CD30、CD5、CD7、CD79a及CD10均为阴性,Ki-67阳性指数约85%。基因检测结果示TCRy及IgH基因重排均为阴性。诊断CD20阳性的ENKTCL需结合组织形态学、免疫组织化学.EBER及基因重排等多种检测CD20阳性的ENKTCL可能为治疗提供了靶点,具有潜在的治疗意义。

关键词：鼻型NK/T细胞淋巴瘤阳性表达 CD20 结外 IgH基因重排免疫组织化学 EBER 检测结果

白细胞介素7及其受体在非小细胞肺癌中调控细胞增殖和促进淋巴管形成

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中华病理学杂志 2012年第8期41卷 511-518页

作者：明健张清富姜彦多姜国成邱雪杉中国医科大学基础医学院病理学教研室沈阳110001 解放军第二O二医院

目的应用体内外实验研究非小细胞肺癌（NSCLC）中白细胞介素7及其受体（IL-7／IL-7R）对调控细胞增殖和促进淋巴管形成的作用机制。方法应用免疫组织化学SP法观察95例NSCLC组织中IL-7、IL-7R、cyclin D1和血管内皮生长因子（VEGF）-D的... 详细信息

目的应用体内外实验研究非小细胞肺癌（NSCLC）中白细胞介素7及其受体（IL-7／IL-7R）对调控细胞增殖和促进淋巴管形成的作用机制。方法应用免疫组织化学SP法观察95例NSCLC组织中IL-7、IL-7R、cyclin D1和血管内皮生长因子（VEGF）-D的表达，分析IL-7／IL-7R与各因素的关系。然后应用四甲基偶氮唑盐法、流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Western blot法、染色质免疫沉淀法、免疫共沉淀法及裸鼠体内移植实验研究肺癌中IL-7／IL-7R调控细胞增殖和促进淋巴管形成的作用机制。结果IL-7（63．2％，60／95）、IL-7R（61．1％，58／95）、cyclin D1（52．6％，50／95）和VEGF—D（58．9％，56／95）在NSCLC中高表达。IL-7／IL-7R的表达与cyclin D1（P〈0．01，P〈0．01）、VEGF—D（P〈0．01，P〈0．01）、淋巴管密度（P=0．005，P=0．013）和肿瘤临床分期（P=0．008，P=0．005）、转移（P〈0．01，P〈0．01）相关。IL-7／IL-7R能促进A549细胞生长；同时能增加cyclin D1和VEGF—D的表达；同时能促进c—Fos／c—Jun的表达和磷酸化及c—Fos／c—Jun形成异二聚体并促使c—Fos／c—Jnn与cyclin D1和VEGF—D的启动子结合调控其转录；还能促进肺癌移植瘤生长及移植瘤淋巴管形成。结论在NSCLC中，ILG／IL-7R通过调控c—Fos／c—Jun的表达及活性进一步调控cyclin D1促进肿瘤细胞生长，调控VEGF—D促进淋巴管形成。

关键词：白细胞介素7 受体白细胞介素癌非小细胞肺

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基于自适应遗传算法的抽题组卷策略

广东广播电视大学学报 2009年第5期18卷 101-105页

作者：张清富阳江广播电视大学广东阳江529500

为克服经典遗传算法求解智能组卷时存在的盲目搜索、收敛速度慢和个体易"早熟"等缺点,文章提出了基于动态自适应技术遗传算法。利用求解问题的特征改进经典遗传算法的多个关键部分,采用动态自适应技术,提高算法的寻优速度。实验结果表明... 详细信息

为克服经典遗传算法求解智能组卷时存在的盲目搜索、收敛速度慢和个体易"早熟"等缺点,文章提出了基于动态自适应技术遗传算法。利用求解问题的特征改进经典遗传算法的多个关键部分,采用动态自适应技术,提高算法的寻优速度。实验结果表明,采用改进式的自适应遗传算法实现的组卷策略具有收敛速度快、搜索精度高、鲁棒性强等特点,具有很好的性能与实用性。

关键词：自适应遗传算法题库智能组卷策略

1例家兔大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合感染的诊治

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养殖与饲料 2024年第7期23卷 98-101页

作者：张清富贵州省赫章县结构彝族苗族乡农业农村综合服务中心贵州赫章553206

2023年5月末,贵州省赫章县某兔场养殖家兔突然出现精神沉郁、采食量减少、腹泻及死亡的临床症状。为了确定家兔急性死亡的病因,本研究进行了病例的流行病学调查、临床症状和病理剖检变化观察,以及病变组织样品的细菌分离培养、涂片镜检... 详细信息

2023年5月末,贵州省赫章县某兔场养殖家兔突然出现精神沉郁、采食量减少、腹泻及死亡的临床症状。为了确定家兔急性死亡的病因,本研究进行了病例的流行病学调查、临床症状和病理剖检变化观察,以及病变组织样品的细菌分离培养、涂片镜检、PCR鉴定、动物试验,同时对分离菌株进行药敏试验,从而筛选特效治疗药物。结果表明:通过该兔场的病例情况及细菌的分离培养及鉴定,确定该试验分离菌株为具有一定毒力的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,确诊该病例为家兔大肠杆菌与金黄色葡萄球菌混合感染。2种菌株均对头孢哌酮、米诺环素、环丙沙星、多黏菌素B较为敏感,可作为该养殖场的临床治疗参考药物。

关键词：家兔大肠杆菌金黄色葡萄球菌混合感染诊治

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中职多媒体教学的利弊分析及对策

广东教育（职教） 2012年第2期 23-24页

作者：张清富阳江市广播电视大学

多媒体教学具有传统教学方式无法比拟的优势，但是尚存不足。本文在分析多媒体教学利弊的基础上，结合传统教学的可取之处，提出切实可行的对策与建议，以寻找一条行之有效的多媒体教学新途径。

关键词：中职多媒体教学

小生境自适应遗传算法在QoS多播路由中的应用

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现代计算机 2011年第24期17卷 3-6页

作者：张清富广东阳江市广播电视大学阳江529500

建立QoS多播路由的数学模型,引入遗传算法并设计多种改进方案,包括新的编码方案、适应度函数设计方案、初始化群体方案、小生境技术、自适应交叉与变异概率设计方案以及有选择计算个体适应度设计方案。仿真结果表明,该算法有较好的性能... 详细信息

建立QoS多播路由的数学模型,引入遗传算法并设计多种改进方案,包括新的编码方案、适应度函数设计方案、初始化群体方案、小生境技术、自适应交叉与变异概率设计方案以及有选择计算个体适应度设计方案。仿真结果表明,该算法有较好的性能,能够满足QoS多播路由问题的多重约束条件,能大幅提高QoS多播路由选择的效率。

关键词：遗传算法自适应小生境 QoS多播路由