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急进性肾小球肾炎的免疫学诊断

新医学 2006年第10期37卷 682-683页

作者：张松照浙江大学附属第二医院检验科 310009

1引言急进性肾小球肾炎(rapidly progressive glomerulonephritis,RPGN)是一组由各种原因、不同疾病引起的以肾病为主的临床综合征,病情发展急骤,在数日或数周内进行性血清肌酐升高、少尿或无尿、血压升高、贫血等,导致快速进展性肾衰竭... 详细信息

1引言急进性肾小球肾炎(rapidly progressive glomerulonephritis,RPGN)是一组由各种原因、不同疾病引起的以肾病为主的临床综合征,病情发展急骤,在数日或数周内进行性血清肌酐升高、少尿或无尿、血压升高、贫血等,导致快速进展性肾衰竭.RPGN的发生率虽然不高,但预后较差,一般认为就诊时血清肌酐升高程度是决定肾存活的重要指标.如何早期诊断RPGN及确定其分类,是指导治疗和判断预后的基础和关键.因此,特别强调的是针对病因和发病机制的免疫学诊断.

关键词：肾病急进性肾小球肾炎血清肌酐肾衰竭免疫学

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血管活性肠肽真核表达质粒的构建及鉴定

血管活性肠肽真核表达质粒的构建及鉴定

作者：张松照浙江大学

学位级别：硕士

血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide，VIP)由Said及Mutt于1970年从猪小肠中分离出来的一种为28个氨基酸的多肽，其主要活性成分为VIP7-28，具高度同源性，因有扩张血管及降低血压的作用而命名为血管活性肠肽。近年来，VIP在免... 详细信息

血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide，VIP)由Said及Mutt于1970年从猪小肠中分离出来的一种为28个氨基酸的多肽，其主要活性成分为VIP7-28，具高度同源性，因有扩张血管及降低血压的作用而命名为血管活性肠肽。近年来，VIP在免疫系统中的发现，使得对它生理作用的认识又进一步深入。研究表明，血管活性肠肽(VIP)有抗炎和调节免疫效应的功能，在急、慢性炎症和自身免疫疾病的治疗上取得显著的疗效，具有潜在的临床应用前景。已有研究表明在类风湿性关节炎的动物模型上发现VIP显著缓解和防治实验性关节炎，输注VIP可望成为治疗类风湿性关节炎的目前最为有效的治疗手段;VIP和VIP类似物将被证明在治疗炎症和脓毒血症中的作用，成为控制感染性休克有效的治疗途径;但同时也指出：长期的VIP蛋白治疗可引起胃肠道紊乱和机体免疫力下降，而且体内极易降解。基因治疗可弥补VIP蛋白治疗的缺陷，目前国内外未见有此类报道。越来越多研究表明在细胞或局部组织内的基因治疗将是未来有效治疗自身免疫疾病和炎症的策略和方向。国外学者利用IL-1受体拮抗剂基因来治疗RA，先后在动物实验和Ⅰ期临床试验中取得了满意的结果。为此，我们构建了真核表达质粒pcDNA3.1-VIP，并在体外对表达的VIP活性进行了研究，为下一步的动物实验和临床试验研究打下了坚实基础。方法 1．目的基因的获得：用TRIzol液提取小鼠胸腺淋巴细胞的总RNA，逆转录得到cDNA，设计一对引物(含Hind Ⅲ、EcoR Ⅰ酶切位点及信号肽序列)，行PCR扩增反应产生编码28肽的VIP-28 DNA，回收纯化PCR产物。 2．真核表达质粒的构建：分别回收、纯化经双酶切切下的VIP-28 DNA和晰忆乙J吮月卜闷叹d匕学位论文真核表达质粒PcDNA3.1片断:回收产物连接构建真核表达质粒peDNA3.l一VIP;酶切并测序鉴定真核表达质粒。 3.真核表达质粒peDNA3.l一VIP的瞬时表达:用脂质体将真核表达质粒PcDNA3.1一vIP转染cos一7细胞，48h后心收集细胞及上清液，超声裂解细胞，低温高速离心，得到上清及细胞提取液。ELISA和认化StemBlot鉴定表达蛋白。 4.真核表达蛋白VIP的生物学活性鉴定:将含表达蛋白V于的上清液加入LPS刺激下的巨噬细胞培养液中，观察剂量依赖的TNFQ释放抑制效应;加入VIP中和抗体，观察TNFQ释放抑制效应是否消失。结果从小鼠胸腺淋巴细胞中提取到VIP mRNA，经Rl，一PCR扩增，得到预期的约160bp的vIP一28 DNA产物，同时与空质粒peDNA3.1双酶切后连接，构建了含viP一28 DNA的真核表达质粒peDNA3.1一vIP。酶切及测序鉴定表明:插入片段为带有信号肤的VIP一28序列，经翻译后的28个氨基酸顺序完全一致。经脂质体转染COS一7细胞48h后，分离上清和超声破碎细胞，ELISA和W七sternBlot分析表明细胞提取液及上清液中存在VIP一28蛋白(分子量约为3.3Kda)，同时表明可在细胞外液中分泌表达。经peDNA3 .1一v伊转染的Cos一7细胞上清能显著抑制MO经LPS诱导的TNF一a的产生，且呈剂量依赖性，表明该重组质粒的表达产物具有生物学活性:VIP的中和抗体能中和上述抑制效应。结论 1.成功构建真核表达质粒peDNA3.1一VIP。 2.表达的V护具有良好的生物学活性。 3.初步摸索并建立了构建真核表达质粒peDNA3.1一vIP的一套实验方法，为进一步开展V理基因治疗奠定了基础。

关键词：血管活性肠肽炎症自身免疫真核表达

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皮肌炎合并肺间质病变一例诊断与治疗评析

中华检验医学杂志 2008年第2期31卷 230-233页

作者：薛静吴华香张松照浙江大学医学院附属第二医院风湿免疫科杭州310009 浙江大学医学院附属第二医院检验科杭州310009

患者，女性，58岁，因双手遇冷变白、变紫5年，四肢乏力伴气急3个月，于2007年3月20日入住本院。患者5年前无明显诱因开始出现双手遇寒冷后变白、变紫，伴手指麻木疼痛感，保暖后皮肤变红，不伴明显皮疹、关节痛、口腔溃疡等，未予重视... 详细信息

患者，女性，58岁，因双手遇冷变白、变紫5年，四肢乏力伴气急3个月，于2007年3月20日入住本院。患者5年前无明显诱因开始出现双手遇寒冷后变白、变紫，伴手指麻木疼痛感，保暖后皮肤变红，不伴明显皮疹、关节痛、口腔溃疡等，未予重视及诊治。3个月前患者无明显诱因出现四肢肌肉酸痛乏力、纳差，伴有双手关节伸面皮疹，无痛痒感，自觉伴周身关节疼痛，上下楼梯时明显，双臂上举尚可，下蹲起立费力，且活动后气急。

关键词：肺间质病变皮肌炎治疗诊断四肢乏力手指麻木口腔溃疡肌肉酸痛

胶乳凝集法与酶联免疫吸附试验检测抗髓过氧化物酶抗体的比较

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上海医学检验杂志 2001年第4期16卷 245-246页

作者：张松照黄永禄浙江大学医学院附属第二医院检验科杭州310009

抗中性粒细胞浆抗体(ANCA)是最早由Davies等［1］发现的一组自身抗体，且根据间接免疫荧光可将其分为胞浆型ANCA(c-ANCA)和核周型ANCA(p-ANCA)。p-ANCA已经明确与多动脉管炎和坏死性新月体性肾炎有关，其主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)... 详细信息

抗中性粒细胞浆抗体(ANCA)是最早由Davies等［1］发现的一组自身抗体，且根据间接免疫荧光可将其分为胞浆型ANCA(c-ANCA)和核周型ANCA(p-ANCA)。p-ANCA已经明确与多动脉管炎和坏死性新月体性肾炎有关，其主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)，临床上可以通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其抗体。我们尝试用胶乳凝集法(LAST)来检测MPO抗体，并与ELISA比较，探讨其可行性。

关键词：胶乳凝集法 ELISA 抗髓过氧化物酶抗体

血清高敏C-反应蛋白在心血管病变中的表达特性

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中华检验医学杂志 2002年第6期25卷 357-359页

作者：金亚平秦光明张松照浙江大学医学院附属第二医院检验科杭州310009

目的　探讨心血管病变血清高敏C 反应蛋白 (hs CRP)的表达特性。方法　采用胶乳增强免疫 (超敏 )比浊法 ,定量检测健康对照组 340名、冠脉造影患者 341例、心肌梗死患者 86例血清hs CRP。结果　 (1 )健康对照组hs CRP呈明显的偏态分布 ,... 详细信息

目的　探讨心血管病变血清高敏C 反应蛋白 (hs CRP)的表达特性。方法　采用胶乳增强免疫 (超敏 )比浊法 ,定量检测健康对照组 340名、冠脉造影患者 341例、心肌梗死患者 86例血清hs CRP。结果　 (1 )健康对照组hs CRP呈明显的偏态分布 ,hs CRP中位数 :0 45mg/L ,95 %位数 :3 0 7mg/L ,经对数转换hs CRP均数为 (0 76± 1 2 9)mg/L ,存在性别和年龄差别。 (2 )冠脉造影阳性组 (2 1 4例 )hs CRP :(2 1 8± 2 71 )mg/L ,冠脉造影阴性组 (1 2 7例 )hs CRP :(1 46± 1 66)mg/L ,差异有显著意义(t=2 638,P <0 0 1 )。急性心肌梗死组hs CRP :(6 0 8± 4 55)mg/L。脉造影阳性组hs CRP随阳性支数增加而增高。hs CRP对冠心病的临床评价ROC曲线下面积为 0 81 0。结论　hs CRP对健康人心血管病变的存在和发生心血管意外预测和预防具有重要意义。

关键词： C反应蛋白心血管病变冠心病胶乳增强免疫比浊法

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冠心病危险因素的临床评价

中华预防医学杂志 2003年第2期37卷 98-101页

作者：金亚平秦光明张松照李崇剑徐耕江大学医学院附属第二医院检验科杭州310009

目的　探讨冠心病危险因素与冠状动脉病变的关系。方法　对 341例冠状动脉造影患者可能伴有的危险因素进行询问和检测。结果　 ( 1)冠状动脉造影显示有病变者 2 14例 ,冠状动脉造影显示无病变者 12 7例。两组的年龄、糖尿病病史、高脂... 详细信息

目的　探讨冠心病危险因素与冠状动脉病变的关系。方法　对 341例冠状动脉造影患者可能伴有的危险因素进行询问和检测。结果　 ( 1)冠状动脉造影显示有病变者 2 14例 ,冠状动脉造影显示无病变者 12 7例。两组的年龄、糖尿病病史、高脂血症史、冠心病家族史、吸烟史、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)、总胆固醇 /高密度脂蛋白胆固醇比率 (TC/HDL C)、脂蛋白 (a) [Lp(a) ]、纤维蛋白原 (Fbg)、高敏C反应蛋白 (hs CRP)比较 ,差异均有显著性。 ( 2 )冠状动脉造影显示有病变者其病变积分与危险因素的相关性依次排列为hs CRP、Lp(a)、TC/HDL C、Fbg、高脂血症史、TC、LDL C和甘油三酯 (r=0 338、0 2 5 0、0 2 41、0 2 0 7、0 16 7、0 147、0 140和 0 139)。 ( 3)对冠状动脉造影患者与危险因素应用ROC曲线分析结果依次为hs CRP、TC/HDL C、Lp(a)、Fbg、LDL C、高脂血症史 ,其ROC曲线下面积比分别是 0 810、0 6 6 9、0 6 2 6、0 6 2 5、0 6 19和 0 6 18。结论　高脂血症史是冠心病发生的预告信号 ,脂质检查项目中对冠心病的预测作用以TC/HDL C和Lp(a)为优 ;提示当前冠状动脉炎性损伤以hs CRP为优。

关键词：冠心病危险因素冠状动脉造影高脂血症总胆固醇高密度脂蛋白胆固醇高敏C反应蛋白

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急进性肾小球肾炎1例报告

新医学 2005年第1期36卷 39-40页

作者：张松照蒋颜沈汉超浙江大学医学院附属第二医院检验科 310009 浙江大学医学院附属第二医院肾内科 310009

1病例报告患者,男,73岁.因畏寒、发热、乏力4日,加重伴气促1日后拟诊'慢性支气管炎急性发作'入本院呼吸科治疗.体格检查:体温38.7℃,脉搏100次/分,呼吸24次/分,血压19/8 kPa.轻度贫血貌,咽充血,双侧扁桃体Ⅰ度肿大,浅表淋巴结无肿大.两... 详细信息

1病例报告患者,男,73岁.因畏寒、发热、乏力4日,加重伴气促1日后拟诊'慢性支气管炎急性发作'入本院呼吸科治疗.体格检查:体温38.7℃,脉搏100次/分,呼吸24次/分,血压19/8 kPa.轻度贫血貌,咽充血,双侧扁桃体Ⅰ度肿大,浅表淋巴结无肿大.两肺呼吸音粗,可闻及少量干啰音,左肺底部闻及较多湿啰音.腹软,脐周及右上腹有压痛,右侧1肾区叩痛,双下肢轻度压凹性水肿.

关键词：轻度急进性肾小球肾炎治疗双侧慢性支气管炎急性发作浅表淋巴结乏力肺呼吸底部

不稳定性心绞痛患者心脏肌钙蛋白Ⅰ低水平的临床研究

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中华检验医学杂志 2007年第2期30卷 186-188页

作者：张松照郦敏秦光明金亚平浙江大学医学院附属第二医院检验科杭州310009

目前，新一代心肌钙蛋白（cTnⅠ）的测定日益受到关注，对心肌细胞的损伤检测具有很高的敏感度和特异性，可以观察到微小心肌的缺血性损伤。最新研究”训表明，这种灵敏的低浓度的cTnⅠ检测与同期的心电图和患者的临床体征相比，更确切... 详细信息

目前，新一代心肌钙蛋白（cTnⅠ）的测定日益受到关注，对心肌细胞的损伤检测具有很高的敏感度和特异性，可以观察到微小心肌的缺血性损伤。最新研究”训表明，这种灵敏的低浓度的cTnⅠ检测与同期的心电图和患者的临床体征相比，更确切的提供有意义的临床实验诊断依据；不同的肌钙蛋白水平和急性冠脉综合征患者的死亡风险之间存在着对应的定量关系。本试验通过研究不稳定性型心绞痛（UA）患者的血清cTnⅠ含量与其他临床及实验室资料，以评价UA患者低水平肌钙蛋白Ⅰ的临床特征及与严重心脏事件发生的危险性联系。

关键词：心脏肌钙蛋白Ⅰ 临床研究低水平心绞痛患者不稳定性急性冠脉综合征稳定性型心绞痛心肌钙蛋白

基质金属蛋白酶-3在评价Etanercept治疗强直性脊柱炎疗效中的价值

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浙江大学学报（医学版） 2010年第4期39卷 409-414页

作者：王巧宏张松照薛静吴华香浙江大学医学院附属第二医院风湿科浙江杭州310009

目的:通过检测强直性脊柱炎(AS)患者血清和关节液,以及Etanercept治疗前后基质金属蛋白酶-3(MMP-3)浓度的变化,分析与AS疾病活动的相关性,探讨MMP-3在评价肿瘤坏死因子抑制剂治疗强直性脊柱炎疗效中的价值。方法:采用酶联免疫吸附试验(E... 详细信息

目的:通过检测强直性脊柱炎(AS)患者血清和关节液,以及Etanercept治疗前后基质金属蛋白酶-3(MMP-3)浓度的变化,分析与AS疾病活动的相关性,探讨MMP-3在评价肿瘤坏死因子抑制剂治疗强直性脊柱炎疗效中的价值。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测48例AS患者在Etanercept治疗前0周,治疗后6周、12周的血清MMP-3浓度,同时对比检测30例健康志愿者外周血清标本和10例AS患者膝关节液中MMP-3水平。结果:48例AS患者血清MMP-3表达水平均明显高于正常对照组,AS患者膝关节液中MMP-3浓度也显著高于其血清中的浓度。有外周关节炎组AS患者的血清MMP-3浓度明显高于无关节炎组(P<0.001),而红细胞沉降率(ESR)与C反应蛋白(CRP)在两组比较中差异无统计学意义。AS患者在Etanercept治疗后第6周、第12周,血清MMP-3的表达水平明显下降(P<0.01),ESR和CRP,以及评价AS疾病的活动指数(BASDAI)和功能指数(BASFI),也均有下降趋势,并有统计学意义(均P<0.01)。在Etanercept治疗前(0周),血清MMP-3浓度与ESR、CRP、BASDAI、BASFI之间均具有显著相关性(P<0.05),ESR与CRP、BASFI亦有相关性,但与BASDAI的相关性无统计学意义(r=0.361,P=0.071)。在治疗12周后,血清MMP-3浓度仍与ESR、CRP、BASDAI呈很好的相关性(P<0.05),但与BASFI的相关性无统计学意义(P=0.339);ESR与CRP之间具有显著相关性,但与BASDAI、BASFI无统计学意义。BASDAI与BASFI有显著相关性(r=0.818,P=0.001)。结论:MMP-3可以作为评价AS患者病情活动性的客观指标,并且有可能比常规评价指标如ESR和CRP具有更强相关性。MMP-3也可以检测Etanercept治疗AS患者后的疗效,有可能成为客观评价昂贵生物制剂疗效的指标之一。

关键词：脊柱炎,强直性/治疗基质溶解素1 肿瘤坏死因子α/拮抗剂和抑制剂肿瘤坏死因子α/治疗应用基质金属蛋白酶肿瘤坏死因子