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小鼠体细胞核移植胚胎端粒酶活性的测定

小鼠体细胞核移植胚胎端粒酶活性的测定

作者：张日欣延边大学

学位级别：硕士

端粒酶作为生命的“生物钟”在胚胎发育的过程中起到了至关重要的作用,同时有保持染色体稳定性和细胞活性并能延长缩短的端粒。并且端粒酶对于研究体细胞克隆胚胎重编程有着重要意义。目的：为了解小鼠早期卵母细胞及体细胞核移植重构胚... 详细信息

端粒酶作为生命的“生物钟”在胚胎发育的过程中起到了至关重要的作用,同时有保持染色体稳定性和细胞活性并能延长缩短的端粒。并且端粒酶对于研究体细胞克隆胚胎重编程有着重要意义。目的：为了解小鼠早期卵母细胞及体细胞核移植重构胚(NT)早期端粒酶活性的变化特点,本研究对小鼠卵母细胞和体细胞核移植重构胚2-细胞,4-细胞,8-细胞,桑葚胚以及囊胚各阶段相对端粒酶活性变化规律。方法：依据PCR产物进行电泳,利用端粒酶重复序列扩增法(TRAP)-银染,电泳条带在成像系统下的光密度值,对总产品产量相对定量计算(TPG)。结果：1.阳性细胞对照标准条带中,相对端粒酶活性与细胞浓度呈正相关。2.小鼠卵母细胞、体内受精胚胎及核移植胚胎各细胞期端粒酶检测为阳性。随胚胎分裂端粒酶活性呈上升趋势,在囊胚期达到最高。在体内受精胚胎中,合.子期(1-cell)相对端粒酶活性较高。3.核移植胚胎与体内受精胚胎比较在2-细胞相对端粒酶活性有差异(P0.05)。4.体内受精胚胎与核移植胚胎在各自胚胎发育过程中呈现相似的规律：2-细胞、4-细胞、8-细胞相对端粒酶活性差异不显著(P>0.05)。囊胚期相对端粒酶活性与各胚胎时期差异显著(P<0.05)。5.胚胎的单卵裂球相对活性呈总下降趋势到囊胚达最低。胚胎2-细胞期差异显著(P<0.05)。6.通过对体内受精胚胎与体细胞重构囊胚的胚胎时期计数,体内受精胚胎单卵裂球细胞数多于体细胞核移植胚胎的囊胚,二者呈显著性差异(P<0.05)。

关键词：体细胞克隆胚胎端粒酶活性端粒重复序列法(TRAP) 银染法

肾脏缺血再灌注损伤过程中水通道蛋白1、2的表达变化

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肾脏缺血再灌注损伤过程中水通道蛋白1、2的表达变化

作者：张日欣大连医科大学

学位级别：硕士

目的:肾脏作为一种高灌注器官,对缺血非常敏感,所以在休克复苏、挤压综合征解压及肾移植术后等很容易发生缺血再灌注损伤(ischemical reperfusion injury ,IRI)。肾IRI是缺血性急性肾功能衰竭(acute renal failure ,ARF)的重要损伤环节[... 详细信息

目的:肾脏作为一种高灌注器官,对缺血非常敏感,所以在休克复苏、挤压综合征解压及肾移植术后等很容易发生缺血再灌注损伤(ischemical reperfusion injury ,IRI)。肾IRI是缺血性急性肾功能衰竭(acute renal failure ,ARF)的重要损伤环节[1] ,也是肾移植中影响移植肾早期功能恢复及长期存活的主要因素[2]。肾IRI损伤的病理生理机制非常复杂,目前对肾IRI病理生理机制的研究主要集中在活性氧(ROS)、中性粒细胞、补体系统等方面,而对肾脏存在的水通道蛋白(AQPs)在这一病理生理条件下的作用认识不足。为此,本研究通过建立大鼠的肾脏IRI模型观察其AQP-1、2的表达变化与肾功能变化的关系,以从新的角度探讨肾脏IRI及ARF的发病机理。方法:建立大鼠左侧肾脏40分钟缺血再灌注损伤模型。随机将实验动物分为对照和缺血再灌注1、2、3、5、7天组。术后留取大鼠尿液标本进行尿液检测;并于上述不同时间点处死大鼠,留取血清标本行肾功能检测;留取肾脏标本应用HE染色于光镜下观察肾脏的病理形态学变化,应用半定量RT-PCR方法测定AQP-1、AQP-2 mRNA的表达水平变化,以及免疫组织化学染色及Western blot测定AQP-1、AQP-2蛋白表达水平的变化。结果:1.尿液变化:(1)尿量变化:各对照组间,尿量变化无统计学意义(p>0.05);缺血再灌注损伤组大鼠尿量较对照组逐渐增多,并于术后第3天达到最高(p﹤0.01);以后逐渐减少,术后第7天恢复正常(p>0.05)。(2)尿渗透压变化:各对照组间,尿渗透压变化无统计学意义(p>0.05);缺血再灌注损伤组大鼠尿渗透压较对照组逐渐降低,术后第3天达到最低(p﹤0.01),以后逐渐增高,术后第7天恢复正常(p>0.05)。2.肾功能的变化:各对照组间,肾功能变化无统计学意义(p>0.05);缺血再灌注组大鼠术后血肌苷、尿素氮较对照组逐渐升高,于术后第三天达到最高(p﹤0.01),以后逐渐降低;术后第七天恢复正常(p>0.05)。3.肾组织学变化:术后HE染色可见缺血再灌注组大鼠的肾小管上皮细胞较对照组明显肿胀坏死脱落。***-1、AQP-2 mRNA表达变化:各对照组间,AQP-1、AQP-2 mRNA表达变化无统计学意义(p>0.05);缺血再灌注损伤组大鼠肾脏AQP-1、AQP-2 mRNA表达水平较对照组逐渐降低;AQP-1于术后第1天达到最低,以后又逐渐升高,于术后第5天恢复正常(p>0.05);AQP-2于术后第3天最低,以后逐渐增加于术后第7天恢复正常(p>0.05)。5.免疫组织化学及Western blot检测AQP-1、AQP-2的变化:各对照组间,AQP-1、AQP-2表达变化无统计学意义(p>0.05);缺血再灌注组大鼠肾脏AQP-1的表达量较对照组逐渐减少,于术后第1天达到最低(p﹤0.01),以后逐渐增高,于术后第5天恢复正常(p>0.05);AQP-2的表达量较对照组逐渐减少,于术后第3天达到最低(p﹤0.01),以后逐渐增高,于术后第7天恢复正常(p>0.05)。结论: 1.实验大鼠肾脏发生缺血再灌注损伤后,肾小管上皮细胞明显肿胀、坏死脱落;24h尿量、血肌苷、尿素氮升高;尿渗透压降低,提示缺血再灌注损伤是急性肾小管坏死及进一步导致急性肾功能衰竭的诱因之一。2.实验大鼠肾脏缺血再灌注损伤后出现尿量增多、尿渗透压降低等症状的同时伴有AQP-1、AQP-2表达的减少,提示肾脏发生缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞AQP-1、AQP-2表达减少所导致的水重吸收障碍,可能是急性肾衰竭时导致尿量增多、尿渗透压降低的重要因素之一。3.实验大鼠肾脏缺血再灌注损伤后肾功能发生损伤性变化的同时伴随有AQP-1、AQP-2的变化,提示AQP-1、AQP-2可能也是反映肾功能变化的重要指标,它们在肾脏缺血再灌注这一病理生理过程中起着非常重要的作用。

关键词：肾缺血再灌注损伤急性肾衰竭水通道蛋白-1 水通道蛋白-2

促红细胞生成素对缺血再灌注损伤大鼠肾脏水通道蛋白2表达的影响

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中华医学杂志 2008年第38期88卷 2710-2714页

作者：王海波王立明张日欣梁锐大连医科大学附属第二医院器官移植中心 116027

目的观察促红细胞生成素（EPO）对缺血再灌注损伤（IR）大鼠肾脏水通道蛋白（AQP2）表达的影响，以探讨EPO对IR的保护作用。方法制备大鼠肾IR模型，将Wistar大鼠随机分为假手术组、肾IR组及EPO治疗组，通过免疫组化、聚合酶链反应及West... 详细信息

目的观察促红细胞生成素（EPO）对缺血再灌注损伤（IR）大鼠肾脏水通道蛋白（AQP2）表达的影响，以探讨EPO对IR的保护作用。方法制备大鼠肾IR模型，将Wistar大鼠随机分为假手术组、肾IR组及EPO治疗组，通过免疫组化、聚合酶链反应及Western印迹等方法，检测肾组织中AQP，及其mRNA的变化，同时检测。肾功能及尿量、尿渗透压的改变和肾组织形态学变化。结果EPO治疗组肾脏中AQP2及其mRNA的变化、肾功能[血肌酐（51±5）μmol／L]及尿量[（26．0±2．3）μl·min^-1·kg^-1]、尿渗透压[（1508±121）mOsm／kgH2O]和肾组织形态学变化与肾IR组[血肌酐（141±5）μmol／L、尿量（59．1±1．3）μl·min^-1·kg^-1，尿渗透压（235±99）mOsm／kgH2O]相比均有明显改善（均P〈0．05）。结论EPO可以促进IR大鼠肾脏AQP2表达，EPO具有改善大鼠肾脏IR的作用，EPO促进AQP2表达这一机制可能参与了其改善大鼠肾脏IR作用。

关键词：再灌注损伤肾红细胞生成素水通道蛋白质2

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启发式、自主式实验教学方式探究

实验技术与管理 2005年第12期22卷 103-106页

作者：张日欣华中科技大学生命科学与技术学院武汉430074

文章围绕提高高校教学质量,培养符合市场需求的高素质人才,从实验教学的角度,对启发式、自主式实验教学方法进行了探索和实践,并结合专业特点介绍了本专业的实验教学方法和实践体会.

关键词：教学质量实验技能教学模式

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薪酬委员会对公司治理效应影响的研究综述

特区经济 2013年第7期 210-212页

作者：张日欣暨南大学管理学院会计学系

上市公司设立薪酬委员会的主要目的是健全公司董事及高管人员的绩效考核及薪酬管理制度,完善公司治理结构。本文在简略综述国外相关文献的基础上,重点从规范研究和实证研究两个方面叙述了国内学者对薪酬委员会的一系列研究成果,并提出... 详细信息

上市公司设立薪酬委员会的主要目的是健全公司董事及高管人员的绩效考核及薪酬管理制度,完善公司治理结构。本文在简略综述国外相关文献的基础上,重点从规范研究和实证研究两个方面叙述了国内学者对薪酬委员会的一系列研究成果,并提出了完善我国薪酬委员会制度的建议。

关键词：薪酬委员会独立性高管薪酬薪绩敏感度

基于MLX90614的非接触式体温测量系统设计

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软件导刊 2009年第3期8卷 105-107页

作者：张日欣华中科技大学生命科学与技术学院湖北武汉430074

根据辐射测温原理设计制作温度测量系统。采用Melexis公司的MLX90614非接触测量的红外温度传感器,通过SMBus协议与AT89S51单片机通讯,并通过单片机系统驱动液晶显示模块显示,实现了非接触的温度测量,测量精度可达到±0.1℃,可广泛地运... 详细信息

根据辐射测温原理设计制作温度测量系统。采用Melexis公司的MLX90614非接触测量的红外温度传感器,通过SMBus协议与AT89S51单片机通讯,并通过单片机系统驱动液晶显示模块显示,实现了非接触的温度测量,测量精度可达到±0.1℃,可广泛地运用于医学、化工等领域。

关键词：红外温度测量非接触温度测量 SMBus

小鼠卵母细胞及体细胞核移植重构早期端粒酶活性的测定

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中国兽医学报 2018年第3期38卷 586-590页

作者：刘宇张日欣李钟淑延边大学农学院动物科学系

采用端粒酶重复序列扩增（telomeric repeat amplification protocol,TRAP）-银染法,对小鼠卵母细胞、体内受精胚胎及重构胚的各阶段端粒酶活性进行测定,对PCR产物的电泳条带进行灰度值分析,计算端粒酶总产品总量。结果表明：（1）体内... 详细信息

采用端粒酶重复序列扩增（telomeric repeat amplification protocol,TRAP）-银染法,对小鼠卵母细胞、体内受精胚胎及重构胚的各阶段端粒酶活性进行测定,对PCR产物的电泳条带进行灰度值分析,计算端粒酶总产品总量。结果表明：（1）体内受精胚胎及核移植重构胚各阶段的端粒酶活性随胚胎分裂呈上升趋势,囊胚期最高（P〈0.05）;（2）体内受精胚胎的端粒酶活性高于体细胞核移植重构胚端粒酶活性。同时进行囊胚计数并测定单卵裂球相对端粒酶活性,结果表明：单卵裂球的端粒酶活性呈下降趋势,囊胚期端粒酶活性最低（P〈0.05）。以上结果说明小鼠卵母细胞及体细胞核移植重构胚端粒酶活性变化与细胞发育水平及细胞发育全能性有关。

关键词：核移植重构胚端粒酶活性 TRAP-银染法