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环境与生活 2008年第11期 68-71页

作者：张振韬

著名科学家杨振宁和李政道是同门师兄弟,两人均是大师费米门下的高足。他们两人曾在一起合作过十多年,这期间作出了很多物理学中的重要贡献。而他们合作成果中最为重要的显然是让他们获得诺贝尔物理学奖金的"弱相互作用下宇称不守恒理论"。

关键词：宇称守恒定律杨振宁宇称不守恒李政道基本粒子

不同培养系统对鸡精原干细胞体外增殖作用的比较

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农业生物技术学报 2014年第6期22卷 736-743页

作者：施青青左其生李东张蕾黄晓梅张振韬张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物繁育与分子设计重点实验室

本研究比较了层粘连蛋白(laminin)、纤维连接蛋白(fibronectin)、胶原蛋白(collagen)以及睾丸支持细胞(sertoli cell)4种不同培养系统对鸡(Gallus gallus)精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外增殖的作用效果。采用三酶两步消化法分离SSCs,细胞经明胶差速纯化后培养,将传至3代的SSCs重新接种于层粘连蛋白、纤维连接蛋白和胶原蛋白包被的培养皿中以及睾丸支持细胞制备的饲养层上,通过形态学、5-乙基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)细胞增殖、qRT-PCR技术检测不同培养系统对鸡精原干细胞体外增殖的作用效果。结果表明,鸡SSCs的碱性磷酸酶(AKP)阳性克隆数在睾丸支持细胞组最高,达到每视野(32±3)个,层粘连蛋白组、纤维连接蛋白组和胶原蛋白组分别为(26±3)、(24±2)和(23±2)个,三组差异不显著(P>0.05);EDU检测睾丸支持细胞组细胞增殖率为(92.82±2.15)%,显著高于三组基质蛋白组(P<0.01);qRT-PCR结果显示,增殖标记基因原癌基因(myconcogene,c-myc)、Kruppel样因子4(kruppel-like factor 4,Klf4)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在睾丸支持细胞组的表达量最高,其次为层粘连蛋白组,c-myc和Klf4在纤维连接蛋白组中的表达要高于胶原蛋白组,PCNA则相反。实验结果表明:三组基质蛋白及睾丸支持细胞都能够促进鸡SSCs的体外增殖,其中睾丸支持细胞作用最佳,其次为层粘连蛋白,纤维连接蛋白和胶原蛋白两者作用效果差异不显著。该结果为进一步优化鸡胚SSCs的体外培养体系,阐明生殖细胞增殖机制提供了实验基础和理论支撑。

关键词：胶原蛋白纤维连接蛋白层粘连蛋白睾丸支持细胞鸡精原干细胞

徐淮山羊PPAR基因cDNA的克隆和生物信息学分析

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江苏农业科学 2011年第2期39卷 59-61页

作者：秦玉蓉许峰田智泉高波张振韬阴彦辉孙敏李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

为克隆徐淮山羊过氧化氢酶体激活增殖受体(PPAR)基因的cDNA,探讨徐淮山羊PPAR基因的生物信息学功能。根据GenBank中发表的绵羊PPAR基因序列,设计并合成1对引物,采用RT-PCR方法克隆徐淮山羊脂肪组织中PPAR基因cDNA,提交GenBank,并运用DNA... 详细信息

为克隆徐淮山羊过氧化氢酶体激活增殖受体(PPAR)基因的cDNA,探讨徐淮山羊PPAR基因的生物信息学功能。根据GenBank中发表的绵羊PPAR基因序列,设计并合成1对引物,采用RT-PCR方法克隆徐淮山羊脂肪组织中PPAR基因cDNA,提交GenBank,并运用DNAStar软件及在线工具进行生物信息学分析。成功克隆出徐淮山羊PPAR基因的编码区全序列cDNA,大小为1 428 bp,GenBank登录号为GU082382,有起始密码子ATG和终止密码子TAG,编码475个氨基酸;徐淮山羊PPAR基因序列与鸡、鼠、猪、牛、绵羊相应编码区(CDS)的同源性分别为81%、89%、92%、98%、99%,徐淮山羊PPAR氨基酸序列与鸡、鼠、猪、牛、绵羊的PPAR氨基酸序列同源性分别为92.9%、97.3%、98.3%、99.6%、99.8%;PPAR蛋白无信号肽区域,属于非分泌型蛋白。

关键词：徐淮山羊过氧化氢酶体激活增殖受体 cDNA 克隆生物信息学

湖羊MyoG基因CDS的克隆及其真核表达载体的构建

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中国畜牧杂志 2011年第9期47卷 24-28页

作者：许峰秦玉蓉阴彦辉张振韬宋正海范广习高波李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 苏州市吴中区东山动物防疫站江苏苏州215128

参阅GenBank发表的波尔山羊肌细胞生成素(MyoG)基因序列,设计3对具有互补末端的特异性引物,分别扩增出湖羊MyoG基因的3个外显子,利用重叠PCR技术,将此3个外显子连接,并构建成重组质粒pcDNA3.0-MyoG,转染NIH-3T3细胞,RT-PCR鉴定。结果表... 详细信息

参阅GenBank发表的波尔山羊肌细胞生成素(MyoG)基因序列,设计3对具有互补末端的特异性引物,分别扩增出湖羊MyoG基因的3个外显子,利用重叠PCR技术,将此3个外显子连接,并构建成重组质粒pcDNA3.0-MyoG,转染NIH-3T3细胞,RT-PCR鉴定。结果表明:成功克隆了湖羊MyoG基因的CDS,在离体细胞中MyoG基因发生了转录,这为进一步研究MyoG基因的体内外表达及生物学的活性奠定了基础。

关键词： MyoG基因重叠PCR 真核表达载体湖羊

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解忧杂货店

十几岁 2020年第13期 42-43页

作者：张振韬槟琪(图) 王瑶泉(指导) 岳阳市湘阴县杨林寨乡周家台小学长沙市望城区桥驿明德小学不详

我已经长大啦,是时候实现我的店长梦了!奶茶店,还是零食店?又或者……我突发奇想:开个解忧杂货店吧!打开解忧邮箱筒,发现有几封信。我坐在桌子前,轻轻地剪开信封——第一封信亲爱的叔叔:您好!我最近很烦恼。爸爸妈妈老是吵架,一吵就停... 详细信息

我已经长大啦,是时候实现我的店长梦了!奶茶店,还是零食店?又或者……我突发奇想:开个解忧杂货店吧!打开解忧邮箱筒,发现有几封信。我坐在桌子前,轻轻地剪开信封——第一封信亲爱的叔叔:您好!我最近很烦恼。爸爸妈妈老是吵架,一吵就停不下来,您能给我出出主意吗?敬祝工作顺利!

关键词：第一封信主意轻轻地

BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究

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畜牧兽医学报 2013年第11期44卷 1749-1757页

作者：施青青张振韬李鹏程郑蒙蒙王丹黄晓梅张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室扬州225009

旨在探讨BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的作用机理。采用单层贴壁培养作为分化模式，分别采用10、20、30和40ng·mL-1 BMP4浓度诱导雄性鸡胚胎干细胞，通过形态学、荧光定量PCR和免疫细胞化学检测诱导效果。根据细胞形态变化... 详细信息

旨在探讨BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的作用机理。采用单层贴壁培养作为分化模式，分别采用10、20、30和40ng·mL-1 BMP4浓度诱导雄性鸡胚胎干细胞，通过形态学、荧光定量PCR和免疫细胞化学检测诱导效果。根据细胞形态变化和差异基因表达量变化，确定了BMP4的适宜诱导浓度为40ng·mL-1。在适宜浓度诱导过程中，诱导4d类胚体开始出现，6～8d类胚体逐渐增大，数量增多，10d部分类胚体开始散开，变为小的圆形细胞，12d在散开后的类胚体周围可观察到少量生殖样细胞，14d生殖样细胞数目增多，且呈聚团生长的趋势。诱导过程中相应基因表达量也发生变化：胚胎干细胞标记基因Nanog、Sox2表达量显著下降（P〈O．01），生殖细胞特异基因Stra8、Dazl、integrina6、c-kit表达量均呈显著上升趋势（P〈O．01）。BMP4可以引起生殖细胞相应基因的表达，促进雄性鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞方向分化，结果为雄性生殖细胞的体外诱导研究提供试验参考，为进一步研究雄性生殖细胞发生和调控机制提供理论基础。

关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞分化 BMP4

视黄酸及Stra8基因联合作用对雄性鸡胚胎干细胞分化的影响

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畜牧兽医学报 2014年第1期45卷 38-45页

作者：张振韬王丹施青青 ELSAYED A K 张亚妮韦光辉朱睿左其生李东刘堃李碧春扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 College of Veterinary Medicine Suez Canal University

旨在研究视黄酸(All-trans retinoic acid,RA)及Stra8(Stimulated by retinoic acid gene 8)基因联合作用对雄性鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs)分化的影响。选用PCR方法鉴定雄性cESCs为研究对象,转染Stra 8基因,对Stra8基因阳性cESCs使用RA进行12d连续诱导,同时设立Stra8基因转染组、RA诱导组及空白组对照,各组均进行3次重复试验。细胞形态学、qRT-PCR检测RA及Sira8基因对cESCs分化的影响。结果表明。转染Stra8基因进行RA诱导,在诱导12d后,出现精原干细胞样的圆形小克隆,其他组cESCs出现类胚体或解体;qRT-PCR鉴定发现各组中干细胞标记基因表达量随着培养时间的延长逐渐下降,同时检测到生殖细胞相关基因表达,转染Stra8基因并使用RA诱导组中表达量均高于对照组(P<0.01),6d表达量达到最高,然后逐渐下降。Stra8基因和RA的联合作用能够促进cESCs向着生殖细胞方向的分化,不仅改变了原有细胞形态,同时出现了生殖相关基因的表达。通过该方法可以在体外建立一个。ESCs诱导分化模型,将为生殖细胞的发生、增殖、分化及调控机理的研究和人类不孕不育症的治疗奠定良好的基础。

关键词： cESCs Stra8基因 RA 联合作用分化基因表达

苏禽黄鸡CVH基因真核表达载体构建及亚细胞定位

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中国畜牧杂志 2014年第9期50卷 82-87页

作者：朱睿张振韬左其生刘志永韦光辉李东连超张亚妮李碧春扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

本研究通过PCR技术克隆苏禽黄鸡CVH基因的CDS区,分别构建真核表达载体pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH,并用pcDNA3.1-CVH载体免疫小鼠制备多克隆抗体。pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH分别转染COS-7细胞,进行间接免疫荧光实验和CVH-EGFP融合蛋白亚细胞定位,并通过RT-PCR、Western blot进一步检测蛋白的表达。结果表明:克隆出CVH基因的完整CDS,构建了真核表达载体pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH,成功制备了多克隆抗体,转染后观察CVH基因表达产物定位于细胞质中,RT-PCR和Western bolt分别检测到1 989 bp特异条带和100 ku的融合蛋白。真核表达载体制备的多克隆抗体特异性良好,效价为1∶200,CVH基因蛋白在细胞质中表达,为进一步探讨CVH基因的生物学特性建立基础。

关键词： CVH基因亚细胞定位 EGFP 间接免疫荧光多克隆抗体黄鸡

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鸡胚胎干细胞的分离及其嵌合体制备条件探索

中国畜牧杂志 2012年第21期48卷 28-31页

作者：张亚妮杨海燕施青青张振韬郑蒙蒙王丹李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

分离培养鸡胚胎干细胞(ESCs),体外培养传代后,进行碱性磷酸酶活性检测和SSEA-1染色鉴定;并用线性化的质粒pEGFP-N1转染鸡ESCs。受体种蛋经赤道面开窗后,将经转染的ESCs注射到受体鸡胚胚下腔,以便制作嵌合体鸡;对获得的嵌合体鸡分别提取... 详细信息

分离培养鸡胚胎干细胞(ESCs),体外培养传代后,进行碱性磷酸酶活性检测和SSEA-1染色鉴定;并用线性化的质粒pEGFP-N1转染鸡ESCs。受体种蛋经赤道面开窗后,将经转染的ESCs注射到受体鸡胚胚下腔,以便制作嵌合体鸡;对获得的嵌合体鸡分别提取血液和组织DNA后进行PCR检测。结果表明:5只存活的的嵌合体鸡血液中没有发生EGFP基因嵌合,但有4只嵌合体鸡的部分器官表达了EGFP基因,其中有2只鸡的性腺发生嵌合,表明利用赤道面开窗后对受体鸡进行胚下腔显微注射可以生产嵌合体鸡。

关键词：鸡胚胎干细胞分离培养显微注射嵌合体鸡

鸡瘦素蛋白输卵管特异性表达载体的构建及其表达的研究

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中国家禽 2010年第21期32卷 27-30页

作者：阴彦辉张振韬高波孙敏许峰秦玉蓉李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

研究旨在利用生物反应器原理获得大量的、供实验研究的人瘦素蛋白。根据GenBank公布的人瘦素蛋白基因序列(登录号为NM000230)设计一对特异性引物,构建鸡输卵管瘦素特异性表达载体pOV3-OB,将重组质粒采用PEI包裹后翅静脉注射试验用鸡,收... 详细信息

研究旨在利用生物反应器原理获得大量的、供实验研究的人瘦素蛋白。根据GenBank公布的人瘦素蛋白基因序列(登录号为NM000230)设计一对特异性引物,构建鸡输卵管瘦素特异性表达载体pOV3-OB,将重组质粒采用PEI包裹后翅静脉注射试验用鸡,收集蛋清并检测瘦素蛋白表达情况。结果显示:通过Western-blot检测,瘦素蛋白发生特异性表达。人瘦素蛋白可以在鸡输卵管中实现暂态表达,本研究为该蛋白的获取及其生物活性的研究奠定基础。

关键词：瘦素克隆暂态表达生物反应器