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作者：张惠静吉林大学

学位级别：硕士

枳实(Aurantii Fructus Immaturus)作为常用的中药材,具有破气消积,化痰散痞之功效。用于治疗积滞内停,痞满胀痛,泻痢后重,大便不通,痰滞气阻,胸痹,结胸,脏器下垂。枳实中主要的化学成分是二氢黄酮双糖苷,其中橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷... 详细信息

枳实(Aurantii Fructus Immaturus)作为常用的中药材,具有破气消积,化痰散痞之功效。用于治疗积滞内停,痞满胀痛,泻痢后重,大便不通,痰滞气阻,胸痹,结胸,脏器下垂。枳实中主要的化学成分是二氢黄酮双糖苷,其中橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、芸香柚皮苷含量较高。将枳实中的二氢黄酮双糖苷降解后可以得到对应的二氢黄酮单糖苷及其苷元。有研究表明,枳实中的二氢黄酮双糖苷降解后得到的二氢黄酮单糖苷的某些事物活性优于对应的双糖苷,提示对双糖苷进行降解后有可能从枳实中获得活性更强的黄酮类单体化合物甚至有可能发现新的生物活性,从而可以扩大枳实在疾病治疗及日常保健领域的应用。因此,本文以通过降解枳实中的二氢黄酮双糖苷从而获得其单糖苷及苷元为研究思路,对枳实总黄酮(主要成分为橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、芸香柚皮苷等二氢黄酮双糖苷)的提取方法、总黄酮的降解方法、降解产物的化学成分进行了系统研究,并对其抗氧化生物活性进行了对比研究。首先,通过单因素实验,对枳实总黄酮的提取纯化方法进行了研究。确立的枳实总黄酮的制备方法为:采用水煎煮提取,共提取3次,煎煮时间分别为90min、60min、30min,液料比为25∶1,获得的煎煮液通过DM-301型大孔吸附树脂吸附,80%乙醇解吸,回收乙醇,干燥得枳实总黄酮。经HPLC测定,其中的芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷为主要成分,它们的含量之和大于50%。为了得到两种二氢黄酮单糖苷及其苷元,接下来,本文对枳实总黄酮进行了降解条件的考察。通过单因素实验和正交试验,考察了盐酸浓度、降解温度、降解时间对枳实中二氢黄酮双糖苷降解效率的影响,最终确立的枳实总黄酮的降解方法为:取枳实总黄酮加40倍6%盐酸水溶液加热溶解,80℃水浴水解2.5h,放冷,利用Na OH溶液(5%)调节反应液pH值至中性,用乙酸乙酯萃取三次,合并乙酸乙酯萃取液,减压回收乙酸乙酯,105℃干燥。在此条件下,枳实总黄酮中二氢黄酮双糖苷的平均转化率接近80%。为明确枳实总黄酮降解产物中的主要的化学成分,本文利用硅胶柱层析和制备型高效液相色谱等分离手段,对枳实总黄酮降解产物中的化学成分进行了分离并利用NMR等波谱学手段鉴定了其化学结构。结果从枳实总黄酮降解产物中共分离鉴定了6个单体化合物,它们分别为5,7-Dihydroxy chromone、橙皮素单糖苷、橙皮素、普鲁宁、柚皮素和芸香柚皮苷。其中橙皮素单糖苷和橙皮素分别是橙皮苷和新橙皮苷的降解产物,而普鲁宁和柚皮素分别是芸香柚皮苷和柚皮苷的降解产物。接下来,本文建立了枳实总黄酮降解产物中普鲁宁、橙皮素单糖苷、柚皮素和橙皮素含量的HPLC测定方法,以便把这四种成分作为指标性成分用于降解产物的质量控制。方法学研究结果表明,普鲁宁、橙皮素单糖苷、柚皮素、橙皮素进样量在0.05～9.80μg范围内均具有良好的线性关系,且精密度、重复性、稳定性和加样回收率的RSD值均小于3.0%,说明建立的含量测定方法具有灵敏度高、精密度好、准确度高等优点。最后,本文通过清除DPPH自由基实验对枳实总黄酮、总黄酮降解产物、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、普鲁宁、橙皮素单糖苷、橙皮素、柚皮素共10个样品的抗氧化活性进行了研究。实验结果表明,10个样品均具有较好的清除DPPH自由基的作用。其中,枳实总黄酮降解产物的抗氧化活性最高,其次为枳实总黄酮,二者均高于各单体化合物。这一研究结果证明了通过降解枳实总黄酮得到具有更强生物活性的降解产物的可行性,为今后枳实黄酮类化合物的开发应用提供了新的研究思路。至于单体化合物的活性弱于对应的枳实总黄酮及枳实总黄酮降解产物的原因,可能与混合物中存在多成分协同增效作用或者混合物中存在其他成分有关。各单体化合物中,苷元的清除DPPH自由基活性强于单糖苷,单糖苷则强于双糖苷,说明糖基会影响其抗氧化活性,且糖链越长,这种抗氧化作用越弱,其作用机理尚有待深入研究。综上,本文考察并确立了枳实总黄酮提取纯化以及降解的最优条件,分离鉴定了降解产物中的主要目标产物,建立了降解产物中四种指标成分的HPLC含量测定方法,并对枳实总黄酮及其降解产物和相应的黄酮类单体化合物的清除自由基活性进行了对比研究。本文的研究结果为中药糖苷类化合物的研究提供了一种新的研究思路,尤其为枳实中黄酮类化合物的开发利用提供了新的科学依据。

关键词：枳实二氢黄酮降解结构鉴定含量测定抗氧化

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周期性机械拉伸对人肺上皮细胞增殖的影响

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高技术通讯 2003年第8期13卷 51-55页

作者：张惠静杨力蔡绍皙卢晓王远亮第三军医大学医学检验系重庆400038 Department of Bioengineering and Orthopedies 重庆大学生物工程学院

为了研究周期性拉伸应变对人肺上皮细胞DNA合成的影响 ,应用流式细胞术对拉伸应变下的细胞增殖动力学变化进行了分析。结果表明 :在应变为 15 % ,频率为 2 0次 /min、4 0次 /min的拉伸刺激下 ,在 2 4h ,正常人支气管上皮细胞H72 7的增... 详细信息

为了研究周期性拉伸应变对人肺上皮细胞DNA合成的影响 ,应用流式细胞术对拉伸应变下的细胞增殖动力学变化进行了分析。结果表明 :在应变为 15 % ,频率为 2 0次 /min、4 0次 /min的拉伸刺激下 ,在 2 4h ,正常人支气管上皮细胞H72 7的增殖活性指数明显降低 ,细胞的DNA合成受到显著抑制 ;4 8h后 ,人肺腺癌细胞A5 49的增殖活性明显降低 ,且拉伸时间越长 ,抑制作用越强。提示周期性拉伸应变抑制人肺上皮细胞的增殖。

关键词：周期性机械拉伸人肺上皮细胞细胞增殖 DNA合成流式细胞术细胞周期

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微流控分析芯片在医学领域的应用

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生物工程学报 2006年第1期22卷 167-171页

作者：毕颖楠张惠静第三军医大学医学检验系分析化学教研室重庆400038

微全分析系统(μ_TAS)又称为芯片实验室,自从Manz等于20世纪90年代首次提出这一概念以来,经过十余年的发展μ_TAS已成为生物分析的一个独立领域并被学术界所认可。微流控分析芯片作为μ_TAS发展的主要方向以其快速、高效分析,低消耗和... 详细信息

微全分析系统(μ_TAS)又称为芯片实验室,自从Manz等于20世纪90年代首次提出这一概念以来,经过十余年的发展μ_TAS已成为生物分析的一个独立领域并被学术界所认可。微流控分析芯片作为μ_TAS发展的主要方向以其快速、高效分析,低消耗和微型化等特点发展非常迅速。在此结合微流控分析芯片在医学领域的应用状况,着重从基因检测、蛋白质分析和细胞分析等方面,对该技术在医学领域里的应用及其未来发展趋势作一综述。

关键词：微流控分析芯片基因检测蛋白质分析细胞分析

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机械拉伸下人肺上皮细胞增殖及整联蛋白再分布

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第6期34卷 748-752页

作者：张惠静蔡绍晳卢晓王远亮王红兵黄岂平第三军医大学医学检验系重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400038 重庆400044

应用体外周期性拉伸装置研究机械拉伸对人肺上皮细胞A5 4 9增殖及其膜表面受体———整联蛋白α5、β1再分布的调控作用。结果表明 :在应变为 15 % ,频率为 2 0次 /min、4 0次 /min的拉伸刺激下 ,4 8h后 ,应用流式细胞技术检测细胞的增... 详细信息

应用体外周期性拉伸装置研究机械拉伸对人肺上皮细胞A5 4 9增殖及其膜表面受体———整联蛋白α5、β1再分布的调控作用。结果表明 :在应变为 15 % ,频率为 2 0次 /min、4 0次 /min的拉伸刺激下 ,4 8h后 ,应用流式细胞技术检测细胞的增殖活性指数明显降低 ,A5 4 9细胞的DNA合成受到显著抑制。在 4 0次 /min的拉伸频率下 ,整联蛋白α5、β1的分布发生重组并向基底层转移 ,形成局部粘附连接。研究表明 :整联蛋白α5、β1可能在肺上皮细胞感应机械应力过程中起了重要的作用。

关键词：机械应力人肺上皮细胞整联蛋白粘着斑

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万家寨引黄一期工程的招标采购与合同管理

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人民黄河 2003年第6期25卷 32-33页

作者：刘俊伟张惠静山西省万家寨引黄工程管理局山西太原030012

山西省万家寨引黄一期工程是一项科技含量高、投资大、单位工程庞杂的系统性工程。为确保工程的顺利进行,业主成立了专门的招标工作机构,严格按照世行和国家的有关规定进行项目招标和合同管理工作。在招标采购上,采用了国际国内竞争性... 详细信息

山西省万家寨引黄一期工程是一项科技含量高、投资大、单位工程庞杂的系统性工程。为确保工程的顺利进行,业主成立了专门的招标工作机构,严格按照世行和国家的有关规定进行项目招标和合同管理工作。在招标采购上,采用了国际国内竞争性招标、国际国内邀请招标和询价采购等多种采购方式;在合同管理上,一切以合同为准则、严格按照合同办事,制定了解决合同执行问题的流程规范,定期与承包商、监理工程师举行现场会议,认真科学地进行工程竣工验收工作。实践证明,万家寨引黄工程在项目采购和合同管理上采用的方法,在工程进展以及质量、进度和投资三控制方面取得了很好的效果。

关键词：万家寨引黄一期工程招标采购合同管理山西

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超临界二氧化碳技术在医药领域的应用

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时珍国医国药 2006年第5期17卷 826-827页

作者：陈华张惠静毕颖楠中国人民解放军第三军医大学重庆400038

CO2气体在临界点(Pc = 7. 374 ×104 kPa ,Tc = 304. 1 K)附近,具有高扩散系数、低粘度和良好的溶解能力的性质,超临界CO2技术就是基于这些性质发展起来的.与传统方法相比,该技术具有快速、高效、节能、环保的优点,可广泛的用于医药、... 详细信息

CO2气体在临界点(Pc = 7. 374 ×104 kPa ,Tc = 304. 1 K)附近,具有高扩散系数、低粘度和良好的溶解能力的性质,超临界CO2技术就是基于这些性质发展起来的.与传统方法相比,该技术具有快速、高效、节能、环保的优点,可广泛的用于医药、香料、冶金、石油化工、环保等领域.本文将从超临界CO2萃取技术、超临界CO2沉积技术和超临界CO2中化学反应这三方面在医药领域的应用进行介绍,藉以说明超临界CO2技术在医药领域具有广阔的应用前景.

关键词：中药天然海洋药物天然食品超临界CO2萃取技术超临界CO2沉析技术超临界CO2中的化学反应

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机械拉伸下人肺上皮细胞增殖及整联蛋白再分布

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第三军医大学学报 2003年第14期25卷 1254-1257页

作者：张惠静杨力蔡绍皙卢晓王远亮第三军医大学医学检验系分析化学教研室重庆400038 Department of Bioengineering and Orthopedics University of CaliforniaSan DiegoCA 92093-0656USA 重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400044

目的　探讨机械拉伸应变对人肺上皮细胞增殖及其膜受体———整联蛋白α5、β1 再分布的调控作用。方法　建立体外周期性拉伸装置 ,应用流式细胞术测定细胞的增殖活性 ,激光共聚焦显微镜分析整联蛋白α5、β1 再分布。结果　在应变为 15... 详细信息

目的　探讨机械拉伸应变对人肺上皮细胞增殖及其膜受体———整联蛋白α5、β1 再分布的调控作用。方法　建立体外周期性拉伸装置 ,应用流式细胞术测定细胞的增殖活性 ,激光共聚焦显微镜分析整联蛋白α5、β1 再分布。结果　在应变为 15 % ,频率为 2 0次 min、40次 min的拉伸刺激下 ,2 4h后 ,细胞的增殖活性指数明显降低 ,H72 7细胞的DNA合成受到显著抑制。在 40次 min的拉伸频率下 ,整联蛋白α5、β1 的分布发生重组并向基底层转移 ,形成局部粘附连接。结论　整联蛋白α5、β1

关键词：机械应力人肺上皮细胞整联蛋白粘着斑

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高效液相色谱法测定人血浆中双氯西林和阿莫西林的含量

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药物分析杂志 2006年第2期26卷 228-231页

作者：张梦军张惠静管潇肖正华第三军医大学医学检验系分析化学教研室重庆400038

目的:建立人血浆中双氯西林和阿莫西林的测定方法。方法:高效液相色谱法,血浆样品以甲醇除蛋白,色谱柱为岛津Shim-pack VP-ODS C_(18)(150mm×4.6mm,5μm),双氯西林的测定以0.05mol·L^(-1)磷酸盐缓冲液(pH 4.5)-乙腈(68:32),加0.3%三... 详细信息

目的:建立人血浆中双氯西林和阿莫西林的测定方法。方法:高效液相色谱法,血浆样品以甲醇除蛋白,色谱柱为岛津Shim-pack VP-ODS C_(18)(150mm×4.6mm,5μm),双氯西林的测定以0.05mol·L^(-1)磷酸盐缓冲液(pH 4.5)-乙腈(68:32),加0.3%三乙胺为流动相,检测波长为225nm,柱温为25℃;阿莫西林的测定以0.033mol·L^(-1)磷酸盐缓冲液(pH7.2)-甲醇(88:12)为流动相,检测波长为229nm,柱温为20℃,流速均为1.0mL·min^(-1),进样量均为20μL。结果:在不同的色谱条件下,血浆样品中双氯西林和阿莫西林无干扰,双氯西林的线性范围为0.2～102.4μg·mL^(-1),r=0.9999,最低检测浓度为0.2μg·mL^(-1);阿莫西林的线性范围为0.25～128.0μg·mL^(-1),r=0.9998,最低检测浓度为0.25μg·mL^(-1)。双氯西林和阿莫西林的平均回收率分别为104.2%,101.6%。结论:这种以相同的样品预处理方法,不同的色谱分离条件分析双氯西林和阿莫西林的方法简便、准确、可靠,结果稳定,可用于阿双西林胶囊或片剂的药代动力学研究和生物利用度研究。

关键词：高效液相色谱法双氯西林阿莫西林

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机械拉伸对人肺上皮细胞粘附及[Ca^(2+)]i的影响

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第三军医大学学报 2004年第11期26卷 953-956页

作者：张惠静秦建蔡绍皙卢晓王远亮杨力第三军医大学医学检验系分析化学教研室重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室 Department of Bioengineering and Orthopedics University of CaliforniaSanDiegoCA920930656USA

目的　探讨周期性拉伸应变对人肺上皮细胞H72 7的力学性质及其 [Ca2 + ]i的调控作用。方法　应用微管吸吮系统测定细胞与基底间的粘附力和细胞的铺展面积 ,用荧光探针Fluo 3 /AM测定拉伸应变对人肺上皮细胞H72 7[Ca2 + ]i的影响。结果... 详细信息

目的　探讨周期性拉伸应变对人肺上皮细胞H72 7的力学性质及其 [Ca2 + ]i的调控作用。方法　应用微管吸吮系统测定细胞与基底间的粘附力和细胞的铺展面积 ,用荧光探针Fluo 3 /AM测定拉伸应变对人肺上皮细胞H72 7[Ca2 + ]i的影响。结果　在应变为 15 %,频率为 40次 min的拉伸刺激下 ,与其静态对照组相比 ,细胞与基底间的粘附力和细胞的铺展面积均增加 ;拉伸 5min后 ,[Ca2 + ]i比对照组有明显增加 ,用三七总皂苷阻断胞内Ca2 + 离子通道后 ,细胞对应变的响应仍表现出 [Ca2 + ]i的升高 ,但与未加三七总皂苷的实验组相比 ,[Ca2 + ]i响应应变后的升高由原来的 3 .4倍的增加降低为 1.5倍的增加。结论　在人肺上皮细胞H72 7响应周期性拉伸应变的过程中 ,[Ca2 + ]i的升高既有胞外钙内流的参与 ,也有胞内钙库的释放作用。

关键词：拉伸人肺上皮细胞粘附胞内钙

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钩藤碱小鼠急性毒性试验及评价

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Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences 2021年第8期30卷 657-665页

作者：胡岚岚张惠静张乐汤建林陆军军医大学第二附属医院药物临床试验机构重庆400037 陆军军医大学药物分析与分析化学教研室重庆400038

钩藤碱作为钩藤的主要生物碱成分,具有抗高血压和神经保护作用,近年来受到广泛关注。尽管如此,其毒性的研究仍较少。本研究通过口服给药钩藤碱,观察其对昆明小鼠的急性毒性反应。昆明小鼠随机分组后分别灌服给药520.00、442.00、375.70... 详细信息

钩藤碱作为钩藤的主要生物碱成分,具有抗高血压和神经保护作用,近年来受到广泛关注。尽管如此,其毒性的研究仍较少。本研究通过口服给药钩藤碱,观察其对昆明小鼠的急性毒性反应。昆明小鼠随机分组后分别灌服给药520.00、442.00、375.70、319.34、271.44 mg/kg剂量的钩藤碱,观察14天,记录小鼠的一般行为、体重变化、毒性反应和死亡情况,计算半数致死量(LD50),并对死亡小鼠进行主要脏器的病理学检查。与对照组相比,单次给药钩藤碱后小鼠体重未见明显变化,但是钩藤碱给药后小鼠出现明显的异常症状和死亡率。毒性试验的LD50为308.08 mg/kg,病理学结果显示钩藤碱高剂量组对小鼠的脑、肝、肺、肾有较明显的毒性作用。本研究表明,钩藤碱不可长时间或高剂量使用,本研究可为下一步的临床研究提供有力的依据。

关键词：钩藤碱口服急性毒性半数致死量小鼠

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