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ramR基因突变介导肺炎克雷伯菌替加环素异质性耐药

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ramR基因突变介导肺炎克雷伯菌替加环素异质性耐药

作者：张巧禹福建医科大学

学位级别：硕士

目的肺炎克雷伯菌(Kp)是医院感染重要的病原菌,随着广谱抗生素的大量应用,多重耐药或泛耐药的肺炎克雷伯菌逐年增多。替加环素是目前治疗严重感染的最后一线可选择药物。然而,替加环素敏感性下降的Kp亦逐渐增多,对其治疗越感棘手。异质... 详细信息

目的肺炎克雷伯菌(Kp)是医院感染重要的病原菌,随着广谱抗生素的大量应用,多重耐药或泛耐药的肺炎克雷伯菌逐年增多。替加环素是目前治疗严重感染的最后一线可选择药物。然而,替加环素敏感性下降的Kp亦逐渐增多,对其治疗越感棘手。异质性耐药被认为是细菌从敏感转变为耐药的中间过渡阶段,也是临床抗感染治疗失败的重要原因之一。本文旨在研究Kp对替加环素是否存在异质性耐药,以及发生异质性耐药的分子机制。方法1、收集替加环素敏感的Kp临床分离株,用纸片法筛选,细菌种群分析(PAP)确认替加环素异质性耐药Kp(TGCHR-Kp)。对子代菌株进行连续传代和药敏试验,并应用ERIC-PCR检测TGCHR-Kp亲代和子代菌株之间的同源性。2、应用外排泵抑制剂PAβN与菌株共孵育,琼脂稀释法测定替加环素MIC值。利用实时PCR测定外排泵基因acrA,acrB,tolC及其调控基因ramA的表达水平。3、PCR扩增ramR基因及上下游部分序列并测序。应用BlastN和DNAman软件分析基因突变情况,SWISS-MODEL同源建模方法构建RamR蛋白的四级结构。探讨RamR结构和功能对ramA及其acrA,acrB,tolC基因表达与替加环素MIC值的关系。4、替加环素敏感的Kp标准菌株ATCC13883以及2株临床分离株用替加环素浓度递增的肉汤进行诱导实验,并在含4mg/L替加环素的琼脂平板上筛选耐药菌株。应用PAβN抑制实验结合琼脂稀释法确定诱导前后菌株的MIC值。利用实时PCR测定外排泵基因acrA,acrB,tolC及其调控基因ramA的表达水平。ramR测序并分析基因非同义突变情况。结果1、334株临床分离的Kp菌株共检出22株TGCHR-Kp,阳性率为6.6%。亲代菌株的MIC值在0.5mg/L—1mg/L之间,均为敏感;子代菌株MIC值在26mg/L之间,均为中介或耐药。TGCHR-Kp的耐药频率介于7.14×10-8–1.08×10-5之间。ERIC-PCR检测发现,亲代菌株及其对应的子代菌株所得扩增条带两者一致,高度同源。2、加入PAβN后,22株子代菌株有20株对TGC的MIC下降2倍,但仍有2株保持不变。子代菌株的AcrAB-TolC外排泵基因及其调控基因ramA表达水平均显著高于亲代菌株;acrA、acrB、tolC以及ramA的表达水平均随着MIC值的上升而上升,差异具有统计学意义(P<0.01)。3、ramR序列比对分析发现,22株亲代菌株中有11株发生氨基酸残基的点突变,突变位点均集中在α7及其之后的氨基酸序列中,即RamR同二聚体中的二聚体化功能域中。22株子代菌株共有16株发生非同义突变,其中10株发生碱基替换,突变位点主要分布在DNA结合域;6株菌株分别发生碱基的插入或缺失。其余6株子代菌株与其对应的亲代菌株RamR均未发生突变,但子代菌株替加环素MIC值仍较亲代菌株上升26倍。4、替加环素敏感Kp经替加环素逐步诱导后,均可在含4mg/L替加环素的M-H平板上有部分菌落生长。诱导后菌株对替加环素的MIC值上升了4倍,均变为耐药。加入外排泵抑制剂PAβN后,诱导后的菌株替加环素MIC值下降46倍,均由耐药变为敏感。诱导后菌株acrA,acrB,tolC及ramA基因的表达水平均较诱导前显著增高(P<0.05)。7株诱导后菌株ramR发生非同义碱基替换、碱基插入或缺失,但仍有1株菌ramR序列并未发生改变。结论首次从替加环素敏感的Kp临床分离株中筛选出TGCHR-Kp。ramR基因发生非同义碱基替换、翻译提前终止、碱基插入或缺失引起RamR蛋白发生结构和功能的改变,从而导致ramA基因和AcrAB-TolC外排泵基因表达水平增高,提示ramR基因突变是介导TGCHR-Kp发生耐药性变迁的重要因素,但并非唯一因素。在Kp耐药变迁过程中,替加环素在诱导ramR基因突变以及耐药形成的过程中均扮演了重要的角色。本研究有助于深刻理解Kp对替加环素的耐药变迁过程,并为指导临床合理使用抗菌药物提供依据。

关键词：肺炎克雷伯菌替加环素异质性耐药外排泵 RamR 细菌种群分析实时PCR

Rhizopus stolonifer几丁质脱乙酰酶的异源表达及其与几丁质酶的协同作用研究

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食品与发酵工业 2024年第2期50卷 177-183页

作者：张巧李永成食品科学与工程学院(海南大学) 海南海口570228 食品科学与工程技术研究院(贺州学院) 广西贺州542899

几丁质脱乙酰酶(chitin deacetylase,CDA)是几丁质生物转化为壳聚糖的关键酶。然而,目前报道的高活性CDAs非常少。为了获得高效的CDA,并提高其对几丁质的生物转化效率,该研究对来源于Rhizopus stolonifer中的CDA进行基因克隆、表达及纯... 详细信息

几丁质脱乙酰酶(chitin deacetylase,CDA)是几丁质生物转化为壳聚糖的关键酶。然而,目前报道的高活性CDAs非常少。为了获得高效的CDA,并提高其对几丁质的生物转化效率,该研究对来源于Rhizopus stolonifer中的CDA进行基因克隆、表达及纯化,获得几丁质脱乙酰酶Rs CDA1,研究其酶学性质并探究其与来源于Vibrio harveyi的几丁质酶Vh Chit2对几丁质的协同水解作用。结果表明,Rs CDA1的比酶活力为5.2 U/mg,在45℃、pH 6.5条件下活性最高,在温度低于40℃、pH 6.5~8.0保持较好的稳定性。1 mmol/L的Ca^(2+)、Mn^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+)、Ba^(2+)和Co^(2+)对Rs CDA1的活力有促进作用;1 mmol/L的Ni^(2+)和Cu^(2+)对该酶有抑制作用。此外,Rs CDA1与Vh Chit2在几丁质水解中表现出良好的协同降解和脱乙酰作用。Rs CDA1与Vh Chit2(摩尔浓度比为10∶1)在50℃、pH 6.5条件下水解20 mg/mL几丁质2 h时,对几丁质酶和CDA的协同度分别达到120.3%和175.6%。与单独使用Rs CDA1相比(27.5%),两者协同水解时几丁质的脱乙酰度增加到35.3%。因此,Rs CDA1在几丁质的生物转化中具有潜在的应用前景。

关键词：几丁质脱乙酰酶几丁质壳聚糖协同作用脱乙酰度

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改性方法对柠檬皮渣粉结构及功能特性的影响

食品工业科技 2024年第1期45卷 88-96页

作者：张巧何雨婕李贤雷激西华大学食品与生物工程学院四川成都610039 食品微生物四川省重点实验室四川成都610039 川渝共建特色食品重庆市重点实验室四川成都610039

为提高柠檬皮渣粉的品质及柠檬加工副产物综合利用率,本研究采用微波、高速剪切、超微粉碎三种方式对柠檬皮渣粉进行改性,通过扫描电镜、傅里叶红外光谱、热重分析对改性前后的形态结构、热稳定性进行分析,并对理化、功能特性进行测定... 详细信息

为提高柠檬皮渣粉的品质及柠檬加工副产物综合利用率,本研究采用微波、高速剪切、超微粉碎三种方式对柠檬皮渣粉进行改性,通过扫描电镜、傅里叶红外光谱、热重分析对改性前后的形态结构、热稳定性进行分析,并对理化、功能特性进行测定以评价不同改性柠檬皮渣粉的综合品质。结果表明,三种改性使柠檬皮渣粉结构变得疏松;改性后主要官能团未发生明显变化;微波、高速剪切处理显著提高了柠檬皮渣粉的热稳定性(P<0.05)。整体而言,经高速剪切改性的柠檬皮渣粉各项理化、功能特性均为最佳,其总膳食纤维含量(Total dietary fiber,TDF)、可溶性膳食纤维(Soluble dietary fiber,SDF)含量、持水力、持油力、膨胀力分别为81.88%、33.07%、20.05 g/g、2.00 g/g、34.99 mL/g,并具有最佳的阳离子交换能力、延迟葡萄糖透析的能力、吸附葡萄糖能力、吸附胆固醇能力,因此具有与膳食纤维(Dietary fiber,DF)类似的理化和功能特性。相关性分析提示,柠檬皮渣粉中SDF含量与各理化、功能指标之间呈极显著正相关(P<0.01)。综上,提高SDF含量可作为改善柠檬皮渣粉品质的一个参考指标,经高速剪切改性后的柠檬皮渣粉具有作为优质DF来源的潜力,这可为提高柠檬皮渣粉的品质及其作为潜在的功能性食品配料提供一定理论参考。

关键词：柠檬皮渣粉改性结构表征理化特性功能特性

环境税对生猪养殖业污染物减排的激励效果研究——内在机制与合理税率

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中国环境科学 2024年第6期44卷 3480-3491页

作者：范东寿杨福霞张巧丹华中农业大学经济管理学院湖北武汉430070

构建包含生猪养殖户、政府、消费者3个利益相关主体的一般均衡模型,从工艺改造和末端治理两个层面剖析环境税对畜禽养殖户污染减排的内在影响机制,并基于中国2007~2020年省级面板数据,实证检验了环境税与生猪养殖业污染物排放量之间的... 详细信息

构建包含生猪养殖户、政府、消费者3个利益相关主体的一般均衡模型,从工艺改造和末端治理两个层面剖析环境税对畜禽养殖户污染减排的内在影响机制,并基于中国2007~2020年省级面板数据,实证检验了环境税与生猪养殖业污染物排放量之间的非对称关系,进而核算出能够激励养殖户进行减排投资的合理税率区间.结果发现:随着环境税率的增加,生猪养殖业的污染物排放量表现出先增后减的倒U型特征;当税率达到5.20~5.75元/污染当量区间时,养殖户才有动力进行减排投资活动.机制分析结果表明,环境税倒逼养殖户安装污染处理设备和改用精饲料是其主要路径,贡献度分别为34.19%和23.34%.环境税的减排效应在重点发展区和约束发展区更为明显,且相较于中规模养殖户,需设定更高的税率才能激励大规模生猪养殖户进行减排投资.

关键词：环境保护税污染物减排内在机制合理税率区间生猪养殖业

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浮岛

作家 2024年第8期 74-77页

作者：张巧慧中国作协

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永磁同步电机模糊滑模无位置传感器控制

电机与控制学报 2024年第1期28卷 87-94页

作者：禹聪康尔良哈尔滨理工大学电气与电子工程学院黑龙江哈尔滨150080 黑龙江省高校直驱系统工程技术创新中心黑龙江哈尔滨150080

针对滑模量在滑模面切换以及速度非线性变化而致使的系统抖振问题,提出一种超旋转滑模模糊观测器。滑模观测器(SMO)存在的高频抖振会对电机控制系统产生很大的影响,导致电机产生转速波动和稳态误差。为了削弱SMO的抖振问题,首先对滑模... 详细信息

针对滑模量在滑模面切换以及速度非线性变化而致使的系统抖振问题,提出一种超旋转滑模模糊观测器。滑模观测器(SMO)存在的高频抖振会对电机控制系统产生很大的影响,导致电机产生转速波动和稳态误差。为了削弱SMO的抖振问题,首先对滑模动态变量的趋近速度动态变化导致的抖振问题,通过引入模糊逻辑理论使得系统状态量趋动速度智能化,设置模糊规则以达到智能动态化速度,以系统动态变量趋向切换面的距离与状态量动态趋向速度为规则因子,动态智能化趋向速度;其次对系统变换函数导致的系统抖振,进一步采用连续函数F(s)代替不连续的sgn(s)符号函数。该方案有效削弱了系统的抖振问题,相较于SMO控制提高了系统的稳定性。

关键词：永磁同步电机无位置传感器控制滑模观测器模糊控制高频抖振滑模控制

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以柠檬果胶凝胶为基质的脂肪替代物的制备及其对黄油流变性的影响

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食品与发酵工业 2024年第9期50卷 99-105页

作者：何雨婕张巧李贤雷激西华大学食品与生物工程学院四川成都610039 川渝共建特色食品重庆市重点实验室四川成都610039 食品微生物四川省重点实验室四川成都610039

针对果胶凝胶为基质的脂肪替代物易脱水聚集导致其质量不稳定的问题,该研究在微粒化处理的柠檬果胶凝胶基础上探讨不同惰性外相的添加对凝胶质构及流变特性的影响,以制备稳定的脂肪替代物并将其应用于黄油中,探究对黄油流变性的影响,为... 详细信息

针对果胶凝胶为基质的脂肪替代物易脱水聚集导致其质量不稳定的问题,该研究在微粒化处理的柠檬果胶凝胶基础上探讨不同惰性外相的添加对凝胶质构及流变特性的影响,以制备稳定的脂肪替代物并将其应用于黄油中,探究对黄油流变性的影响,为制备黄油的脂肪替代物提供依据。结果表明选择质量分数为0.4%的羧甲基纤维素钠(sodium carboxyme thyl cellulose,CMC)为惰性外相制备的复配凝胶脱水率为0%且未发生聚集现象,此时凝胶体系最为稳定,且满足脂肪替代物的粒径要求;黄油流变性结果提示最佳的脂肪替代物取代率介于20%~30%。综上,微粒化果胶凝胶中添加惰性外相是制备稳定的脂肪替代物的关键,适量CMC作为惰性外相可有效控制果胶凝胶微粒化后的聚集脱水现象;该脂肪替代物部分替代黄油后能够保持黄油的流变特性,该结果为柠檬果胶凝胶为基质的脂肪替代物的制备和应用提供了理论支持。

关键词：惰性外相复配凝胶脂肪替代物黄油流变性

ESG评级和数据产品质量监管策略的国际比较

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中国注册会计师 2024年第3期 121-124页

作者：张巧良闫颖兰州理工大学经济管理学院

本文从提高透明度、良好治理、利益冲突管理、执业胜任力等角度，对ESG评级和数据产品质量监管策略进行国际比较，建议监管机构对ESG评级市场实行授权准入，但不干扰具体的评级内容和方法；ESG评级和数据产品提供商增强行业自律，尽快... 详细信息

本文从提高透明度、良好治理、利益冲突管理、执业胜任力等角度，对ESG评级和数据产品质量监管策略进行国际比较，建议监管机构对ESG评级市场实行授权准入，但不干扰具体的评级内容和方法；ESG评级和数据产品提供商增强行业自律，尽快制定自愿性行业行为准则；投资者加强对评级和数据产品的尽职调查；被评级公司提升ESG报告质量，增强与ESG评级机构的沟通。

关键词： ESG评级 ESG数据产品透明度内部控制利益冲突执业胜任能力

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代购毒品行为认定研究

代购毒品行为认定研究

作者：张巧慧烟台大学

学位级别：硕士

代购毒品行为在毒品交易中逐渐显著,引起了司法界对其法律性质的广泛关注。面对此类行为频繁出现的情况,相关法律解释和司法指导亦不断更新,以期在实践中更准确地界定和处理。然而,作为新型毒品犯罪形式的代购毒品行为,却陷于规范缺失... 详细信息

代购毒品行为在毒品交易中逐渐显著,引起了司法界对其法律性质的广泛关注。面对此类行为频繁出现的情况,相关法律解释和司法指导亦不断更新,以期在实践中更准确地界定和处理。然而,作为新型毒品犯罪形式的代购毒品行为,却陷于规范缺失的尴尬局面,代购毒品并非一个现存的刑法罪名,当前我国刑法也未对代购毒品行为作出规定,导致了刑法理论和实务界对代购毒品行为的认定存在较多分歧。基于打击毒品犯罪的现实需要,最高人民法院先后出台了三个毒品犯罪会议纪要,以期指导司法实践。会议纪要率先提出了代购毒品一词,对代购毒品行为作出了相应规定,并不断进行完善。然而,面对实践中复杂多变的情形,会议纪要的规定无法涵盖所有代购毒品的行为类型,同时会议纪要能否作为定案依据及其性质也备受争议。特别是在行为的法律定性方面。论文从代购毒品的定义及分类、认定问题、以及代购毒品行为认定路径三大方面进行了系统的探讨。在定义和分类方面,论文首先清晰界定了代购毒品行为,并将其与居间倒卖或介绍毒品交易的行为区分开来。通过具体分类,论文进一步细化了代购行为的不同类型,包括各类行为的动机和实施形态,为理解其法律属性和后续法律应用提供了理论基础。在行为性质认定问题的分析中,深入分析了造成定性分歧的根本原因。从牟利标准的理论分歧,到代购蹭吸和代购运输的定性争议,再到牟利动机的认定难度、金钱交易的证据问题等都是导致定性分歧的关键因素。通过对这些因素的深入分析,揭示了代购毒品行为定性分歧的复杂性及其背后的深层次原因。在此基础上,提出了一系列对代购毒品行为准确认定的路径。这包括明确牟利性的认定标准、完善主观态度的评估机制等。论文通过全面分析代购毒品行为的法律定性问题,不仅揭示了现行司法处理中的不足,也为今后的法律实践和理论研究提供了重要参考。

关键词：代购毒品行为牟利定性分析