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栓菌酸通过RhoC/ROCK1通路对肝癌HepG2.2.15细胞迁移侵袭的影响

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中国中药杂志 2024年第1期49卷 185-196页

作者：万雨莲汪鋆植袁园叶汪阳李华丽张晓兰张宏岐李莉娥三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室湖北宜昌443002 广西医科大学基础医学院广西南宁530021 宜昌人福药业有限责任公司湖北宜昌443000

以Ras同源基因家族成员C(Ras homolog gene family member C, RhoC)为靶点探讨栓菌酸(trametenolic acid, TA)对人肝癌HepG2.2.15细胞迁移侵袭的影响及机制,为栓菌酸的利用提供依据。采用MTT法检测TA对HepG2.2.15细胞增殖的影响;划痕实... 详细信息

以Ras同源基因家族成员C(Ras homolog gene family member C, RhoC)为靶点探讨栓菌酸(trametenolic acid, TA)对人肝癌HepG2.2.15细胞迁移侵袭的影响及机制,为栓菌酸的利用提供依据。采用MTT法检测TA对HepG2.2.15细胞增殖的影响;划痕实验、Transwell实验检测TA对细胞迁移、侵袭的影响;pull down实验检测TA对Ras相似物GTP酶(Ras homologue GTPases, Rho GTPases)活性的影响;Western blot实验检测TA对RhoC从胞质到胞膜转运及对RhoC/Rho相关激酶1(Rho-associated kinase 1, ROCK1)/肌球蛋白轻链(myosin light chain, MLC)/基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotease 2, MMP2)/基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotease 9,MMP9)通路相关蛋白表达的影响;采用瞬时质粒转染过表达pcDNA3.1-RhoC,激光共聚焦检测细胞骨架中F-actin的变化,并检测细胞迁移侵袭及RhoC/ROCK1/MLC/MMP2/MMP9通路相关蛋白表达的变化,以及RhoC GTP酶活性;建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,以索拉菲尼为阳性对照(Sora 20 mg·kg^(-1)),测量TA低、中、高剂量组(40、80、120 mg·kg^(-1))瘤体积和质量,瘤组织通过Western blot检测相关蛋白的表达。结果显示,TA呈浓度依赖性抑制HepG2.2.15细胞增殖,24、48 h的IC50分别为66.65、23.09μmol·L^(-1)。裸鼠肿瘤质量、肿瘤体积均显著降低,索拉菲尼,TA低、中、高剂量组的抑瘤率分别为62.23%、26.48%、55.45%、62.36%。TA能显著降低HepG2.2.15细胞迁移侵袭数,且呈浓度依赖性抑制RhoC蛋白的表达及RhoC GTP酶活性,使膜组分RhoC显著下调,减少膜结合RhoC GTP酶的量。体内外实验证实,TA可显著抑制RhoC下游ROCK1、MLC、p-MLC、MMP2、MMP9蛋白表达。HepG2.2.15细胞转染pcDNA3.1-RhoC过表达RhoC后,TA能有效抑制过表达后RhoC、ROCK1、MLC、p-MLC、MMP2、MMP9蛋白的表达水平,及RhoC GTP酶的活性,与过表达前相对抑制水平相似。综上所述,TA可抑制人肝癌HepG2.2.15细胞迁移侵袭,其机制可能是通过靶向抑制RhoC GTP酶的活性,下调RhoC表达,从而抑制RhoC/ROCK1/MLC/MMP2/MMP9信号通路。该研究为利用中药有效成分多靶点优势,开发以热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,HSP90α)为靶点的自噬调节剂,达到阻滞肝癌细胞增殖,同时抑制肝癌细胞的侵袭和转移双重作用提供了新思路和方法。

关键词：栓菌酸肝癌 RhoC 迁移侵袭 HSP90α

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海棠茶水提物对黄嘌呤氧化酶的影响

中成药 2022年第4期44卷 1322-1325页

作者：王宇汪鋆植王丹阳聂淞莹张宏岐三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室湖北宜昌443002 湖北省生物酵素工程技术研究中心湖北宜昌443002

目的观察海棠茶水提物对黄嘌呤氧化酶的影响,为高尿酸血症患者提供更好的饮食调控策略。方法建立高尿酸血症小鼠模型,检测给予海棠茶水提物及其主要成分根皮苷后小鼠血清尿酸水平和肝组织黄嘌呤氧化酶活性。考察海棠茶中根皮苷、根皮... 详细信息

目的观察海棠茶水提物对黄嘌呤氧化酶的影响,为高尿酸血症患者提供更好的饮食调控策略。方法建立高尿酸血症小鼠模型,检测给予海棠茶水提物及其主要成分根皮苷后小鼠血清尿酸水平和肝组织黄嘌呤氧化酶活性。考察海棠茶中根皮苷、根皮素、三羟基根皮苷对体外黄嘌呤氧化酶抑制活性的影响,并判断其抑制机理和抑制类型,计算K_(i)值。再检测根皮苷和根皮素联合应用对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。结果海棠茶水提物和根皮苷均能有效降低小鼠血清尿酸水平和肝组织黄嘌呤氧化酶活性(P<0.05)。根皮苷对黄嘌呤氧化酶的IC_(50)为(355.2±1.78)μg/mL,属于可逆竞争性抑制中的混合型抑制;根皮素IC_(50)为(123.4±1.03)μg/mL,属于竞争性可逆抑制;三羟基根皮苷IC_(50)为(2.02±1.79)μg/mL,属于反竞争性可逆抑制。根皮苷、根皮素对黄嘌呤氧化酶的抑制具有协同作用。结论海棠茶水提物对黄嘌呤氧化酶具有抑制活性,其主要活性成分为根皮苷等黄酮类成分,在调节尿酸代谢、防治高尿酸血症、减少痛风风险方面具有积极作用。

关键词：海棠茶水提物黄嘌呤氧化酶根皮苷高尿酸血症

Plackett-Burman实验和响应面法优化酵母源无血清培养基

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中国生物制品学杂志 2023年

作者：肖萌万莹铚张宏岐邹坤李啸邹华蓉邓锐湖北宏裕新型包材股份有限公司三峡大学生物与制药学院三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室安琪酵母股份有限公司三峡大学健康医学院

目的采用Plackett-Burman实验和响应面法(response surface methodology,RSM)优化酵母源无血清培养基(serum-free medium,SFM)的营养组分，明确培养基成分及浓度。方法以中国仓鼠卵巢细胞(CHO)为研究对象，在实验室前期筛选出的SFM的... 详细信息

目的采用Plackett-Burman实验和响应面法(response surface methodology,RSM)优化酵母源无血清培养基(serum-free medium,SFM)的营养组分，明确培养基成分及浓度。方法以中国仓鼠卵巢细胞(CHO)为研究对象，在实验室前期筛选出的SFM的基础上，采用Plackett-Burman实验对10种营养组分进行筛选。筛选出对细胞具有促生长作用的因素后，利用RSM进行二次优化，以阐明各变量间的相互作用，确定促CHO细胞生长的最佳培养基组成。取对数生长期CHO细胞，用优化后的培养基重悬后，进行传代扩增。结果经Plackett-Burman实验筛选的10个变量中，酵母抽提物(yeast extract,YE)FM888和微量元素能有效提高细胞比生长速率；非必需氨基酸和FM888对提高细胞存活天数作用显著；FM888、必需氨基酸、非必需氨基酸及微量元素能显著提高活细胞密度。综合选择FM888、微量元素和非必需氨基酸3个因素进行RSM优化试验。优化后的培养基悬浮培养CHO细胞时，其最大比生长速率可达0.025/h，存活天数可达6 d，最大活细胞密度可达7.187×106个/mL。将优化后的培养基进行细胞稳定传代试验，可稳定传代12代，其活细胞密度及细胞活率与对照组(商业化SFM)接近。结论成功获得成分明确且能支持CHO细胞高密度生长的酵母源SFM，为YE在动物细胞培养中的应用以及高效SFM的开发提供了参考和依据。

关键词：酵母提取物 CHO细胞无血清培养基 Plackett-Burman 响应面法优化

酵母抽提物FM888对CHO细胞生长的影响

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中国生物制品学杂志 2022年第10期35卷 1184-1190页

作者：万莹铚李秋霞张宏岐邹坤肖萌伍业旭张松邓锐三峡大学生物与制药学院三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室湖北宜昌443002 三峡大学医学院湖北宜昌443002 安琪酵母股份有限公司湖北宜昌443003 湖北宏裕新型包材股份有限公司湖北宜昌443000

目的探讨酵母抽提物(yeast extract,YE)FM888对CHO细胞生长的影响。方法以CHO悬浮细胞为研究对象,在EmCD CHO® Medium培养基中分别添加1、2、3、5 g/L的FM888,进行摇瓶批式培养,台盼蓝拒染法和细胞计数仪测定活细胞密度和细胞活率。... 详细信息

目的探讨酵母抽提物(yeast extract,YE)FM888对CHO细胞生长的影响。方法以CHO悬浮细胞为研究对象,在EmCD CHO® Medium培养基中分别添加1、2、3、5 g/L的FM888,进行摇瓶批式培养,台盼蓝拒染法和细胞计数仪测定活细胞密度和细胞活率。用添加1、2 g/L FM888的EmCD CHO® Medium培养基培养CHO细胞,生化分析仪检测细胞的生化代谢(葡萄糖、乳酸、谷氨酰胺、谷氨酸和铵根离子的含量)情况;采用相应试剂盒检测乳酸脱氨酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的活力;流式细胞术检测细胞的周期分布及凋亡情况。结果培养基中加入1、2 g/L的FM888可促进CHO细胞生长,确保培养过程中维持较高活细胞密度和细胞活率;CHO细胞培养前期,葡萄糖、乳酸和铵根离子在培养体系中的浓度均高于空白对照组(未添加FM888),谷氨酰胺低于空白对照组,能够促进细胞代谢活动,培养后期逐渐下降;可减少细胞损伤及CHO细胞酶的释放;可增加CHO细胞S期的比例,促进细胞增殖;可降低CHO细胞凋亡率。结论培养基中添加1、2 g/L的FM888能促进CHO细胞的生长、代谢和增殖,并维持较高的细胞活力。

关键词：酵母抽提物FM888 CHO细胞细胞代谢细胞增殖

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天麻无伐栽培替代菌材的研究

中药材 2022年第4期45卷 784-788页

作者：王丹阳汪鋆植苏香萍胡浩宁雷晶鹏杨梦瑶张宏岐三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室湖北宜昌443002

目的:观察鄂西主要经济树种枝条对蜜环菌生长的影响,为无伐栽培天麻寻找适宜的替代菌材。方法:以鄂西产量丰富的几种经济树种湖北海棠Malus hupehensis(Pamp.)Rehd.、茶Camellia sinensis(L.)O.Ktze.、核桃Juglans regia L.、贴梗海棠Ch... 详细信息

目的:观察鄂西主要经济树种枝条对蜜环菌生长的影响,为无伐栽培天麻寻找适宜的替代菌材。方法:以鄂西产量丰富的几种经济树种湖北海棠Malus hupehensis(Pamp.)Rehd.、茶Camellia sinensis(L.)O.Ktze.、核桃Juglans regia L.、贴梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai.、桑Morus alba L.的废弃枝条作为替代菌材,白栎Quercus fabri Hance木材为对照,在培养瓶中定量接种同种蜜环菌,测定漆酶活力,多糖、总萜和甘露醇的含量。以乌红杂交天麻Gastrodia elata f.elata×glauca为种麻,进行仿野生栽培试验。结果:湖北海棠、茶和核桃等多种植物的废弃枝条可作为替代菌材,其中湖北海棠替代效果最好,各项测定指标数值与白栎相近,仿野生栽培试验结果显示湖北海棠枝条为菌材栽培的天麻产量和质量良好。结论:可用湖北海棠、茶、核桃等植物的枝条作为天麻栽培替代菌材,为天麻无伐栽培技术、保护生态环境提供了依据。

关键词：天麻替代菌材无伐栽培湖北海棠

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茶树生长过程中土壤磷变化动态

安徽农业科学 2008年第13期36卷 5542-5543页

作者：李玲张宏岐贾国梅三峡大学化学与生命科学学院湖北宜昌443002

[目的]为三峡库区生态环境建设和退耕还林工程提供理论参考和科学依据。[方法]选择秭归不同生长年限的茶树地的土壤样品,分析测定土壤速效磷及微生物磷随生长时间及土壤深度的变化。[结果]结果表明:随着茶树生长年限延长,土壤速效磷含... 详细信息

[目的]为三峡库区生态环境建设和退耕还林工程提供理论参考和科学依据。[方法]选择秭归不同生长年限的茶树地的土壤样品,分析测定土壤速效磷及微生物磷随生长时间及土壤深度的变化。[结果]结果表明:随着茶树生长年限延长,土壤速效磷含量呈逐渐增加的趋势,土壤微生物量磷无明显的变化趋势。随土壤深度的增加,速效磷和微生物磷都呈逐渐降低的趋势。[结论]茶树生长有利于土壤表层磷的积累。

关键词：茶树土壤有效磷土壤微生物磷

“双一流”建设背景下药学专业创新型人才培养的实践与探索——以药学综合实验课程为例

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创新创业理论研究与实践 2023年第6期6卷 73-75页

作者：喻玲玲曾建红柳蔚张宏岐三峡大学健康医学院湖北宜昌443002

培养创新型人才是“双一流”建设最重要的任务之一。药学是实践性学科,具有多学科交叉、融合、渗透的特点。实验教学是培养药学高素质人才的关键环节,对于培养学生的综合能力、实践能力和创新能力具有重要作用。该文以药学综合实验课程... 详细信息

培养创新型人才是“双一流”建设最重要的任务之一。药学是实践性学科,具有多学科交叉、融合、渗透的特点。实验教学是培养药学高素质人才的关键环节,对于培养学生的综合能力、实践能力和创新能力具有重要作用。该文以药学综合实验课程为例,分别从课程建设目标、教学内容和教学方法等方面进行了一系列的实践与探索,为药学专业创新型人才培养提供参考。

关键词： “双一流”建设药学创新型人才实验实践探索

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苎麻叶化学成分研究

中国中药杂志 2010年第11期35卷 1432-1434页

作者：刘闯邹坤郭志勇赵玉英程凡张宏岐天然产物研究与利用湖北省重点实验室三峡大学化学与生命科学学院湖北宜昌443002

目的：研究荨麻科苎麻属植物苎麻叶的化学成分。方法：利用95%的乙醇室温浸提,运用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20及半制备HPLC方法进行分离纯化,根据理化性质及各种波谱方法鉴定其化学结构。结果：从石油醚、乙酸乙酯及正丁醇萃取部位分... 详细信息

目的：研究荨麻科苎麻属植物苎麻叶的化学成分。方法：利用95%的乙醇室温浸提,运用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20及半制备HPLC方法进行分离纯化,根据理化性质及各种波谱方法鉴定其化学结构。结果：从石油醚、乙酸乙酯及正丁醇萃取部位分离并鉴定了7个化合物,分别为kiwiionoside（1）,eugenyl β-rutinoside（2）,尿嘧啶（3）,胡萝卜苷（4）,3-羟基-4-甲氧基苯甲酸（5）,胆甾醇（6）,α-香树脂醇（7）。结论：化合物1~3,5~7为首次从苎麻属植物分离得到。

关键词：苎麻属苎麻叶 kiwiionoside eugenyl β-rutinoside

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Hispolon药理活性及机制研究进展

中药药理与临床 2017年第5期33卷 221-224页

作者：高星星张宏岐刘志文三峡大学医学院三峡大学医学院湖北宜昌443002

Hispolon是从药用真菌桑黄中提取的酚类物质,为一些层孔菌中共有的一个活性成分。随着近年来中医药的不断发展,天然产物中提取所得成分的药理活性及机制成为研究热点,尤其是对其中分离得到的具有较高应用价值的单体活性成分的研究更加... 详细信息

Hispolon是从药用真菌桑黄中提取的酚类物质,为一些层孔菌中共有的一个活性成分。随着近年来中医药的不断发展,天然产物中提取所得成分的药理活性及机制成为研究热点,尤其是对其中分离得到的具有较高应用价值的单体活性成分的研究更加深入。hispolon作为桑黄所含活性成分,其药理活性与桑黄有很多相似之处。近几年对hispolon药理活性及机制方面的报道不断增多,以其抗炎、抗肿瘤、抗氧化和保肝等药理活性为主,以外,还具有抗白血病、抗病毒及雌激素样等作用。本文通过查阅国内外相关文献,对hispolon生物活性及作用机制进行综述,为hispolon的进一步深入研究及开发利用提供基础,并对其临床应用研究提供依据。

关键词： Hispolon 药理活性作用机制