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沼液抑制云南红豆杉叶斑病原菌的实验研究

沼液抑制云南红豆杉叶斑病原菌的实验研究

作者：张加稳云南师范大学

学位级别：硕士

目前,云南红豆杉叶斑病病害发生严重,已严重影响了它的生长、药用及观赏价值。众多研究表明,沼液对大多数植物病原菌均具有较好的抑制效果,本实验研究旨在获得高效抑制云南红豆杉叶斑病原菌的沼液,最终并能为实际农业生产中病虫害的防... 详细信息

目前,云南红豆杉叶斑病病害发生严重,已严重影响了它的生长、药用及观赏价值。众多研究表明,沼液对大多数植物病原菌均具有较好的抑制效果,本实验研究旨在获得高效抑制云南红豆杉叶斑病原菌的沼液,最终并能为实际农业生产中病虫害的防治提供理论指导。取用不同的发酵沼液进行抑制云南红豆杉叶斑病原菌研究,并通过测量病原菌块生长4d的情况来评价沼液抑菌效果的强弱文章所取得的成果如下所示:1.对12种原料沼液的抑菌研究显示,青蒿、香瓜皮、烟秆等沼液的抑菌效果较好,抑菌率分别为75.8%、74.2%、71.5%。水葫芦渣和酒糟动态发酵沼液的抑菌研究结果相似,抑菌效果随发酵时间的变化趋势为先增强后减弱,两种原料分别发酵至第28d、第35d的沼液抑菌效果最好。2.以青蒿为发酵原料,不同发酵工艺所得沼液的抑菌研究显示,⑴分别用香根草和猪粪富集的接种物发酵所得沼液的抑菌效率依次是54.65%、48.28%;⑵分别接入10%、15%、20%、30%等接种物发酵所得沼液的抑菌效果存在差异,接种浓度越大,沼液抑菌效果越好,接种浓度30%的抑菌效果最好,抑菌率达69.6%,而接种浓度10%的抑菌率仅为55.8%;⑶在常温、中温、高温条件下发酵所得沼液的抑菌效果差异较小,抑制率依次是66.08%、64.13%、68.55%;⑷发酵料液浓度分别是6%、8%、10%、12%后进行发酵所得沼液的抑菌效果存在差异,料液浓度是8%时发酵所得沼液抑菌效果最好,抑制率高达60.6%;⑸发酵料液起始pH是6.0、6.5、7.0、8.0进行正常发酵所得沼液的抑菌效果存在差异,料液pH=6.5或pH=8.0发酵所得沼液的抑菌活性较强,抑菌率分别为60.57%、57.52%,而pH=7.0发酵所得沼液的抑菌活性较弱,抑菌率仅为29.44%;⑹料液中添加吐温-20、糖化酶、纤维素酶等活性物质发酵所得沼液的抑菌效果存在差异,添加吐温-20和纤维素酶发酵的抑菌效果强于对照组,而添加糖化酶发酵的抑菌效果则明显弱于对照组。3.沼液抑菌效果的理化因素影响研究表明,其抑菌效果与浓度成正比,10%的沼液抑菌率仅为33.84%,而原沼液抑菌率则高达75.8%;与pH值密切相关,沼液pH=3时抑制率最低,仅为8%,pH值为5时抑菌效果一般,且抑制率均在56%左右,而pH=10时抑制率则最高,达到67.22%;向沼液中分别添加不同浓度的腐殖酸、赤霉素、VB、VB和NH都能不同程度的增强其抑菌效果,各成分的最佳浓度依次为3%、0.4%、0.1%、0.4%、1%,而VB则反而会削弱沼液的抑菌效果;沼液随着处理温度的升高,其抑菌效果逐渐减弱,特别是经高温灭菌后,其抑菌率几乎为0。4.沼液与10种常规农药抑菌效果的对比研究显示,青蒿沼液的抑菌效果除了略低于甲基硫菌灵外,普遍高于绝大多数常规农药。青蒿沼液与3种农药分别按不同比例复配后对云南红豆杉叶斑病原菌均能表现出一定的抑制效果,且随着病原菌培养时间的延长,其抑制效果更加显著,但因农药种类的不同,按同一比例复配混合液的抑菌效果也存在差异。5.苯、石油醚、乙醚、正己烷、乙酸乙酯、氯仿等六种有机溶剂分别对4种原料沼液萃取后的抑菌研究显示,除牛粪沼液的正己烷萃取成分抑菌效果最好外,猪粪、玉米秸秆和青蒿三种原料的发酵沼液均以乙酸乙酯萃取成分的抑菌效果最好。研究还显示,紫茎泽兰自身萃取成分、发酵沼液萃取成分、两种萃取成分混合后的抑菌率依次为51.1%、31.3%、63.5%;蓖麻秸秆类似三个不同成分的抑菌效果依次为52.8%、41.4%、64.7%,说明两种植物中的天然活性成分抑菌活性较强,但在沼气发酵过程中会被降解。6.沼液对病原菌抑制作用的关键因子是其内部复杂的微生物,而沼液中活性物质对抑菌效果的影响较小。

关键词：沼气发酵液云南红豆杉叶斑病原菌抑制效果影响因素抑制机理

UPLC-MS/MS测定猪肉中3种β-受体激动剂残留量

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中国酿造 2020年第3期39卷 172-176页

作者：张加稳白文莉昆明市食品药品检验研究院云南昆明650000

建立超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱快速、高效检测肉制品中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺3种β-受体激动剂的方法。混合加标猪肉经正己烷去除油脂,异丙醇-乙酸乙酯(6∶4,V/V)提取浓缩,MCX柱富集净化,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动... 详细信息

建立超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱快速、高效检测肉制品中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺3种β-受体激动剂的方法。混合加标猪肉经正己烷去除油脂,异丙醇-乙酸乙酯(6∶4,V/V)提取浓缩,MCX柱富集净化,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,用Agilent C18色谱柱进行梯度洗脱分离,多级反应监测(MRM)模式进行检测,外标法定量。3种β-受体激动剂残留量的检出限为0.3~0.4μg/kg,在5~100 ng/mL的线性范围内,相关系数R2均>0.998,平均加标回收率为81.8%~103.1%,相对标准偏差(RSDs)均<10%。因此本方法基质干扰小、灵敏度高、重复性好、定性和定量准确可靠,满足于动物源性食品中β-受体激动剂残留量的测定要求。

关键词：猪肉 β-受体激动剂提取溶剂超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法

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高效液相色谱法测定固体食品中的安赛蜜

中国食品添加剂 2021年第3期32卷 90-94页

作者：刁玉华张加稳陈娴昆明市食品药品检验所昆明650032

建立一种高效液相色谱法测定固体食品中安赛蜜的方法。以水为提取溶剂超声波提取安赛蜜,然后在提取液中加入沉淀剂除杂,采用C_(18)反相色谱柱,紫外检测器,以0.02mol/L乙酸铵溶液∶甲醇=90∶10(v/v)为流动相,检测波长225nm,流速1.0mL/min... 详细信息

建立一种高效液相色谱法测定固体食品中安赛蜜的方法。以水为提取溶剂超声波提取安赛蜜,然后在提取液中加入沉淀剂除杂,采用C_(18)反相色谱柱,紫外检测器,以0.02mol/L乙酸铵溶液∶甲醇=90∶10(v/v)为流动相,检测波长225nm,流速1.0mL/min,柱温30℃,进样量10μL进行检测,外标法定量。安赛蜜出峰时间为4.348min,样品的检出限为0.57mg/kg,定量限1.89mg/kg,线性范围为0.5~50.0μg/mL,相关系数0.9998,安赛蜜的加标回收率在91.3%~99.3%之间,重复性实验的相对标准偏差在2%以下(n=6)。建立的前处理方法具有简单、快速、准确、实用性强的特点,可用于固体食品中安赛蜜的检测。

关键词：安赛蜜高效液相色谱固体食品

高效液相色谱-串联质谱法测定牛干巴中敌百虫的方法研究

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食品工程 2019年第4期 49-51页

作者：张加稳昆明市食品药品检验研究院

研究了前处理方法对高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法测定牛干巴中敌百虫残留量的影响。样品使用正己烷去除油脂,再经乙腈萃取浓缩,以乙腈-含0.1%甲酸的10 mmol/L甲酸铵水溶液为流动相,用Agilent C18色谱柱进行梯度洗脱分离,采用ESI... 详细信息

研究了前处理方法对高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法测定牛干巴中敌百虫残留量的影响。样品使用正己烷去除油脂,再经乙腈萃取浓缩,以乙腈-含0.1%甲酸的10 mmol/L甲酸铵水溶液为流动相,用Agilent C18色谱柱进行梯度洗脱分离,采用ESI正模式电离,多级反应监测(MRM)模式进行检测,外标法定量。结果显示,牛干巴中敌百虫残留量的检出限和定量限分别为0.5μg/kg和1.8μg/kg,在5 ng/mL^100 ng/mL浓度范围内,线性关系良好(R2=0.99936),1μg/kg、2μg/kg、10μg/kg3个加标浓度的回收率均在91.22~100.34,相对标准偏差均小于10%。

关键词：牛干巴敌百虫液相萃取高效液相色谱-串联质谱法

高效液相色谱-串联质谱法测定腌制火腿中敌百虫的残留量

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中国食品 2019年第19期 132-133页

作者：张加稳白文莉昆明市食品药品检验研究院

一、材料与方法1.材料与试剂。试剂:甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷、环己烷、丙酮、二氯甲烷(均为色谱纯,默克股份两合公司),石油醚,甲酸、甲酸铵、乙酸铵、无水硫酸钠。标准物质:敌百虫。材料:C18色谱柱(1.8um,2.1x50mm,Agilent)、50m... 详细信息

一、材料与方法1.材料与试剂。试剂:甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷、环己烷、丙酮、二氯甲烷(均为色谱纯,默克股份两合公司),石油醚,甲酸、甲酸铵、乙酸铵、无水硫酸钠。标准物质:敌百虫。材料:C18色谱柱(1.8um,2.1x50mm,Agilent)、50mL塑料离心管、注射器、有机滤膜(0.22μm)。

关键词：高效液相色谱-串联质谱法敌百虫残留量火腿腌制测定 C18色谱柱无水硫酸钠

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LC-AFS测定大米中的砷形态

食品安全导刊 2019年第24期 107-108页

作者：赵四标张加稳昆明市食品药品检验所

建立LC-AFS方法,分析了大米中四种砷形态含量。以5%的盐酸溶液为载流、2%硼氢化钾和0.1%氢氧化钠组成的混合溶液作为还原剂、5mmol/L磷酸氢二钠和45mmol/L磷酸二氢钾为流动相,四种砷形态在7min内得到分离、测定。结果表明:As(Ⅲ)、As(Ⅴ... 详细信息

建立LC-AFS方法,分析了大米中四种砷形态含量。以5%的盐酸溶液为载流、2%硼氢化钾和0.1%氢氧化钠组成的混合溶液作为还原剂、5mmol/L磷酸氢二钠和45mmol/L磷酸二氢钾为流动相,四种砷形态在7min内得到分离、测定。结果表明:As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、MMA与DMA的检出限分别为0.0060、0.021、0.0090mg/kg与0.010mg/kg,加标回收率80%~100%,线性范围0~100μg/L,各形态砷标准曲线的相关系数均大于0.9995。该方法前处理便捷,结果准确、加标回收率高,适用于大米中砷形态的测定。

关键词： LC-AFS 形态砷大米

超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中金刚烷胺的残留量

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现代食品 2021年第14期6卷 161-165页

作者：刁玉华张加稳昆明市食品药品检验所云南昆明650032

建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱快速、高效检测鸡蛋中金刚烷胺的方法。样品经异丙醇-2.0%三氯乙酸(1∶1,V/V)提取浓缩,Oasis MCX固相萃取柱富集净化,用BHE Amide色谱柱进行梯度洗脱分离,多级反应监测(MRM)模式进行检测,外标法... 详细信息

建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱快速、高效检测鸡蛋中金刚烷胺的方法。样品经异丙醇-2.0%三氯乙酸(1∶1,V/V)提取浓缩,Oasis MCX固相萃取柱富集净化,用BHE Amide色谱柱进行梯度洗脱分离,多级反应监测(MRM)模式进行检测,外标法定量。金刚烷胺检出限为0.3μg·kg^(-1),定量限为1.0μg·kg^(-1),在5.0~100.0 ng·mL^(-1)线性范围内,相关系数为0.9991,1.0μg·kg^(-1)、2.0μg·kg^(-1)、10.0μg·kg^(-1)3个加标浓度的平均回收率在87.5%~97.6%,RSD均小于6%。本方法基质干扰小、灵敏度高、重复性好、定性和定量准确可靠,满足于鸡蛋中金刚烷胺残留量的测定要求。

关键词：鸡蛋金刚烷胺固相萃取柱超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱

高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性肌肉内硝基呋喃代谢物的对比研究

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粮食科技与经济 2019年第8期44卷 62-64页

作者：张加稳赵四标白文莉昆明市食品药品检验研究院

为建立高效液相-串联质谱(HPLC-MS/MS)法检测动物源性肌肉内SEM、AOZ、AHD、AMOZ4种硝基呋喃代谢物快速高效的提取方法,本研究混合加标样品经水解及衍生化后,分别用液相萃取法和固相萃取法提取,再用HPLC-MS/MS外标法定量分析其回收率的... 详细信息

为建立高效液相-串联质谱(HPLC-MS/MS)法检测动物源性肌肉内SEM、AOZ、AHD、AMOZ4种硝基呋喃代谢物快速高效的提取方法,本研究混合加标样品经水解及衍生化后,分别用液相萃取法和固相萃取法提取,再用HPLC-MS/MS外标法定量分析其回收率的高低。结果表明:检出限均达到0.4μg/kg;在0.5~100ng/mL的线性范围内,相关系数R2均大于0.99;在添加0.5μg/kg、1μg/kg和5μg/kg3种浓度水平中,液相萃取法和固相萃取法对4种硝基呋喃类代谢物提取的平均回收率分别为86.0%~104.0%,68.0%~87.2%;RSD均小于10%。结论:液相萃取法提取动物源性肌肉内硝基呋喃代谢物残留量提取效率更高,更能满足样品检测的定性、定量要求。

关键词：动物源性肌肉硝基呋喃代谢物高效液相色谱-串联质谱液相萃取固相萃取

UPLC-MS/MS法同时测定补中益气丸(水丸)中6种化合物含量

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云南中医药大学学报 2023年第5期46卷 49-53页

作者：田小权张加稳王葳昆明市药品不良反应与药物滥用监测中心云南昆明650000 昆明市食品药品检验所云南昆明650000 云南中医药大学云南昆明650500

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定补中益气丸(水丸)中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、橙皮苷、阿魏酸、甘草酸和甘草苷的含量。方法采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为5 mmol/L乙酸铵溶液-甲醇(含0.1%甲... 详细信息

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定补中益气丸(水丸)中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、橙皮苷、阿魏酸、甘草酸和甘草苷的含量。方法采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为5 mmol/L乙酸铵溶液-甲醇(含0.1%甲酸),梯度洗脱;质谱离子化方式为电喷雾源(ESI),采用多级反应离子监测模式(MRM)定量分析。结果各化合物在相应浓度范围内线性关系均良好,r^(2)值为0.994~0.999,加标回收率范围为86.7%~103.5%,相应的RSD为3.8%~7.6%。结论本方法定性和定量准确可靠,重复性好、基质干扰小、灵敏度高,满足补中益气丸(水丸)中6种化合物含量的测定要求。

关键词：补中益气丸(水丸) 超高效液相色谱-串联质谱法毛蕊异黄酮苷黄芪甲苷阿魏酸橙皮苷甘草苷甘草酸