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深圳市1例黑热病病例实验室检测与分子鉴定

中国热带医学 2024年第2期24卷 218-222页

作者：黄达娜刘小莲高世同李媛唐屹君张倩彭博阳帆牛丛张仁利深圳市疾病预防控制中心广东深圳518055

目的对深圳市1例输入性黑热病病例进行实验室检测和分子溯源分析以确定感染虫株。方法收集2023年3月15日深圳市确诊1例黑热病病例的骨髓穿刺液和血液进行实验室检测。对患者骨髓穿刺液涂片姬姆萨染色后进行显微镜检查,对血液样品采用内... 详细信息

目的对深圳市1例输入性黑热病病例进行实验室检测和分子溯源分析以确定感染虫株。方法收集2023年3月15日深圳市确诊1例黑热病病例的骨髓穿刺液和血液进行实验室检测。对患者骨髓穿刺液涂片姬姆萨染色后进行显微镜检查,对血液样品采用内脏利什曼原虫快速诊断试剂(rk39)进行血清抗体检查,并提取全血DNA,PCR扩增内转录间隔区Ⅰ(internal transcribed spacer-1,ITS-1)序列并测序比对,同时基于ITS-1序列构建系统进化树。结果对患者骨髓涂片显微镜检查查见大量利什曼原虫无鞭毛体,确诊为黑热病,患者血液采用rk39快速诊断试剂检测结果呈阳性,PCR扩增出ITS-1基因产物序列与预期大小一致,经NCBI数据库中比对,与婴儿利什曼原虫ITS-1基因序列相似度为100%,确定感染虫株为婴儿利什曼原虫。对扩增的ITS-1序列进行系统发育树构建发现与婴儿利什曼原虫聚到一个分支,且与所选的参比序列中的KC347299距离较近。结论深圳市1例黑热病病例是由婴儿利什曼原虫引起的,黑热病在我国仍时有发生,应加强非疫区医务人员诊断技术,积极配合使用新的诊断技术进行辅助诊断,同时应提高对利什曼原虫的防控能力。

关键词：黑热病利什曼原虫实验室检测基因溯源

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深圳市啮齿动物感染汉坦病毒的基因特征研究

中华流行病学杂志 2022年第11期43卷 1804-1810页

作者：罗瑶李玥黄亚兰张晓敏熊玲红张仁利阳帆南方医科大学公共卫生学院广州510515 深圳市疾病预防控制中心病原生物研究所深圳518055

目的:研究深圳市啮齿动物所携带的汉坦病毒分子流行病学特征,分析汉坦病毒基因型别。方法:采用笼日法布点捕鼠,收集鼠肺标本后研磨提取RNA。运用实时荧光PCR方法进行分型检测,进一步采用反转录-巢式PCR扩增部分M片段G2区和S片段核苷酸序... 详细信息

目的:研究深圳市啮齿动物所携带的汉坦病毒分子流行病学特征,分析汉坦病毒基因型别。方法:采用笼日法布点捕鼠,收集鼠肺标本后研磨提取RNA。运用实时荧光PCR方法进行分型检测,进一步采用反转录-巢式PCR扩增部分M片段G2区和S片段核苷酸序列,并进行同源性和系统进化树分析。结果:共捕获200只鼠类动物,包含褐家鼠189只、黄胸鼠9只和小家鼠2只。汉坦病毒检出率为21.0%(42/200),均为汉城病毒,其中宝安区鼠肺检出率最高,达45.7%( χ^(2)=25.60, P<0.05)。从阳性鼠肺标本中分别扩增出25条汉坦病毒M片段G2区和S片段序列,核苷酸同源性分别为95.3%~100.0%和97.6%~100.0%,与来自广州市的参考序列核苷酸相似性较高。系统进化树显示此次研究深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒均为汉城病毒的S2亚型。氨基酸突变位点分析发现,在S基因编码的核衣壳蛋白中存在1个位点突变,为BA-111第973位由丙氨酸(Ala)变为苏氨酸(Thr)。结论:深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒为汉城病毒的S2亚型,与深圳市历年以及周边省市汉坦病毒代表病毒毒株相比变异不大。

关键词：汉坦病毒汉城病毒基因分型序列分析

2017-2018年广东省深圳市疱疹性咽峡炎患者肠道病毒分子流行病学研究

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疾病监测 2023年第9期38卷 1048-1053页

作者：陈龙杨洪姚相杰孟君张海龙张仁利何雅青深圳市疾病预防控制中心病原微生物检测所广东深圳518055

目的了解广东省深圳市疱疹性咽峡炎(HA)病原组成与病原体的分子特征,为HA的预防与控制提供科学依据。方法2017—2018年收集了157例HA患者的314份临床样本,其中粪便样本和咽拭子各157份。使用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和基于... 详细信息

目的了解广东省深圳市疱疹性咽峡炎(HA)病原组成与病原体的分子特征,为HA的预防与控制提供科学依据。方法2017—2018年收集了157例HA患者的314份临床样本,其中粪便样本和咽拭子各157份。使用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和基于半巢式RT-PCR扩增的测序方法对肠道病毒(EV)进行检测与分型。使用生物信息学软件对病毒VP1基因进行序列分析。结果在126例(80.30%,126/157)EV阳性的患者中,共检出10种EV,检出率最高的是柯萨奇病毒A组10型(CVA10)(19.70%,31/157),其次是CVA4(17.80%,28/157)、CVA6(15.30%,24/157)和CVA2(10.80%,17/157),其他病原体包括CVA5(4.50%,7/157)、CVA16(3.20%,5/157)、EV-A71(1.30%,2/157)、CVA8(0.60%,1/157)、CVB5(0.60%,1/157)和埃可病毒11(E11)(0.60%,1/157),1例为CVA4与CVA10的混合感染(0.60%,1/157)。2017年检出率最高的两种病原体是CVA2和CVA6,而2018年却是CVA10和CVA4。粪便样本与咽拭子的病原检出率之间的差异没有统计学意义(χ^(2)=0.019,P=0.892)。基于VP1序列的分子系统发育分析表明,本研究CVA10毒株均为C2基因型。CVA4除了1株为C5基因型外,其余均为C2基因型。1株CVA6毒株位于先前未描述的进化分支,其他CVA6毒株均为D3a基因亚型。CVA2毒株均为D2基因型。结论粪便样本与咽拭子都适用于HA的病原体核酸检测。CVA10、CVA4、CVA6和CVA2是2017—2018年深圳市HA的优势病原体,大部分毒株是我国主流基因型,个别毒株处于不常见的基因型或进化分支。

关键词：疱疹性咽峡炎柯萨奇A群病毒病原检出率基因分型

Calpain抗体介导的对日本血吸虫童虫的细胞毒作用

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中华传染病杂志 2002年第6期20卷 353-355页

作者：刘堃张仁利高世同林敏深圳市卫生防疫站 518020

目的　探讨日本血吸虫疫苗候选分子———钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)的保护性免疫力和免疫保护性机制。方法　用重组纯化的Calpain抗原免疫小鼠 ,制备抗Calpain血清 ,将机械转化的日本血吸虫童虫和同种鼠激活的嗜酸性粒细胞共... 详细信息

目的　探讨日本血吸虫疫苗候选分子———钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)的保护性免疫力和免疫保护性机制。方法　用重组纯化的Calpain抗原免疫小鼠 ,制备抗Calpain血清 ,将机械转化的日本血吸虫童虫和同种鼠激活的嗜酸性粒细胞共同培养 ,观察细胞对血吸虫童虫的黏附及对童虫的杀伤效果。结果　重组Calpain抗原免疫小鼠后 ,产生了极高的抗Calpain特异性抗体 ,并介导了同种鼠的嗜酸性粒细胞对日本血吸虫童虫的黏附。在 3 7°C ,5 %CO2 培养 48h后 ,3 3 .8%的日本血吸虫童虫被杀死 ,与对照组 14 .5 %的自然死亡率相比显著增高 (P <0 .0 1)。结论　Calpain特异性抗体介导了对日本血吸虫童虫的细胞毒作用 ,提示Calpain可能是日本血吸虫的一个疫苗候选分子。

关键词：免疫机制细胞毒性日本血吸虫童虫 Calpain抗体

血吸虫并直肠癌患者癌组织中P53蛋白的表达及其意义

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广东医学 2005年第3期26卷 298-299页

作者：张悦钟克力张仁利暨南大学附属第二医院广东省深圳市疾病预防控制中心 518020

目的　探讨患血吸虫的直肠癌患者癌组织中的P5 3蛋白的表达及其临床意义。方法　收集 5 4例直肠癌患者癌组织标本 ,其中 2 2例患血吸虫 ,另 32例未患血吸虫。用免疫组织化学方法测定癌组织中P5 3蛋白的表达 ,并对实验结果进行统计学分... 详细信息

目的　探讨患血吸虫的直肠癌患者癌组织中的P5 3蛋白的表达及其临床意义。方法　收集 5 4例直肠癌患者癌组织标本 ,其中 2 2例患血吸虫 ,另 32例未患血吸虫。用免疫组织化学方法测定癌组织中P5 3蛋白的表达 ,并对实验结果进行统计学分析。结果　患有日本血吸虫的直肠癌患者的癌组织中P5 3蛋白的表达高 ,为5 9 .1% (13/ 2 2 ) ;未患日本血吸虫的直肠癌患者的癌组织中P5 3蛋白的表达低 ,为 18. 8% (6 / 32 )。两组存在显著性差异 (P <0. 0 5 )。结论　患有日本血吸虫的直肠癌患者的癌组织中有较高的p5 3基因突变率 ,日本血吸虫感染可能对直肠癌患者p5 3肿瘤抑制基因突变有影响。

关键词：患者癌组织中直肠癌 P53蛋白日本血吸虫表达免疫组织化学方法结论收集意义

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弓形虫p35蛋白的基因克隆及其分子特征

中国人兽共患病杂志 2001年第4期17卷 24-26页

作者：张仁利吴少庭高世同林敏吕斌深圳市卫生防疫站分子生物学研究室深圳518020

目的　探讨 p35蛋白作为一个鉴别急性感染的诊断抗原和疫苗候选的应用价值。方法　从弓形虫RH株分离总的RNA ,应用弓形虫EST基因库合成扩增p35基因片段引物 ,结合 5‘和 3‘末端cDNA快速扩增法进行 p35基因 5‘和 3‘末端cDNA的扩增 ,T... 详细信息

目的　探讨 p35蛋白作为一个鉴别急性感染的诊断抗原和疫苗候选的应用价值。方法　从弓形虫RH株分离总的RNA ,应用弓形虫EST基因库合成扩增p35基因片段引物 ,结合 5‘和 3‘末端cDNA快速扩增法进行 p35基因 5‘和 3‘末端cDNA的扩增 ,TA克隆RT -PCR产物及DNA顺序分析 ;用蛋白质分析软件解析 p35基因编码的氨基酸的亲水性和可能存在的T、B细胞的表位。结果　p35基因含有 15 37个碱基 ,编码 378个氨基酸 ,其氨基酸的亲水性区域分布在氨基酸的 2 0 1到2 2 5和 30 1到 340号 ,且含有多个T、B细胞的表位。结论　p35蛋白的C端区有高的亲水性 ,并含有T、B细胞的表位 ,显示了p35蛋白应用于诊断和疫苗开发的可行性。

关键词：弓形虫 p35蛋白疫苗诊断弓形体病

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城市输入性血吸虫病37例分析

中华流行病学杂志 2004年第7期25卷 577-579页

作者：闻礼永蔡黎张仁利周晓农浙江省医学科学院寄生虫病研究所杭州310013 上海市疾病预防控制中心广东省深圳市疾病预防控制中心中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所

上海、深圳、浙江省(市)原是血吸虫病流行区,经过几十年积极防治,分别于1985年和1995年达到血吸虫病传播阻断标准,随后转入监测巩固阶段,迄今未发现内源性急性感染或新感染病人(畜),也示发现感染性钉螺,血吸虫病防治(血防)成果巩固[1].

关键词：城市输入性血吸虫病调查传染源预防

IL-17^+ γδ T细胞在病原微生物感染中的研究进展

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广东医学 2011年第7期32卷 936-938页

作者：蔡春林张仁利姚相杰广东省深圳市罗湖区疾病预防控制中心 518020 广东省深圳市疾病预防控制中心 518020

长期以来,人们依据产生的细胞因子和生物功能的不同将CD4＋T细胞分为Th1和Th2两类细胞亚群,直至2005年,Th17细胞（产生IL-17的CD4＋T细胞）的发现使得传统的Th1/Th2亚群分类模式被打破[1-2]。Th17细胞能特异性地产生IL-17效应因子,并在... 详细信息

长期以来,人们依据产生的细胞因子和生物功能的不同将CD4＋T细胞分为Th1和Th2两类细胞亚群,直至2005年,Th17细胞（产生IL-17的CD4＋T细胞）的发现使得传统的Th1/Th2亚群分类模式被打破[1-2]。Th17细胞能特异性地产生IL-17效应因子,并在多种自身免疫性疾病和感染性疾病中发挥重要作用,是近几年免疫学的研究热点。

关键词： CD4+T细胞病原微生物感染 Th1/Th2亚群 Th17细胞自身免疫性疾病 IL-17 感染性疾病细胞亚群

日本血吸虫钙蛋白酶肽链文库的制备及其B细胞表位的筛选

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第4期22卷 411-414页

作者：段立华张仁利张力勇吴少庭高世同林敏深圳市疾病控制中心深圳市第二人民医院

目的　筛选钙蛋白酶 (calpain)的B细胞表位 ,探讨其B细胞表位的免疫原性及其所诱导的免疫应答类型。方法　用Genetyx MAC9.0分析calpain肽连的亲水性 ,在亲水性区域以 9个氨基酸为肽链单位的固相重叠肽链库 (每相邻两个肽链之间仅有一... 详细信息

目的　筛选钙蛋白酶 (calpain)的B细胞表位 ,探讨其B细胞表位的免疫原性及其所诱导的免疫应答类型。方法　用Genetyx MAC9.0分析calpain肽连的亲水性 ,在亲水性区域以 9个氨基酸为肽链单位的固相重叠肽链库 (每相邻两个肽链之间仅有一个氨基酸不同 )被Auto spotRobot制备 ,用Dot ELISA在合成的肽链库上筛选B细胞表位 ,含有B细胞表位的肽链免疫BALB c小鼠 ,ELISA鉴别特异性IgG抗体亚类的产生。结果　由 75 8个氨基酸组成的日本血吸虫calpain蛋白含有 2个主要的亲水区 ,其存在区域分别在氨基酸 2 2 9～ 375和 5 5 5～ 6 13;当我们测定合成的肽链文库时 ,在亲水区内筛选出 4个B细胞的表位 ,分别是氨基酸 2 34～ 2 5 1(YAHLSGGT) ;2 90～ 2 97(CLMGCSIH) ;338～ 34 6(PWGDSHEW) ;35 8～ 36 4(AWCDGAPQ) ;与对照组鼠相比较免疫鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG2b特异性抗体有显著性意义的上升。结论　日本血吸虫calpain是一个具有免疫原性的蛋白 ,能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白 ,提示calpain的B细胞表位可以成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子。

关键词：日本血吸虫 B细胞表位钙蛋白酶免疫原性免疫应答血吸虫疫苗