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肿瘤单细胞液体活检:CTCs的超简化富集和手持式荧光仪便携式检测

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肿瘤单细胞液体活检:CTCs的超简化富集和手持式荧光仪便携式检测

成都市郫都区人群TSH参考区间的建立及验证

2024中国肿瘤标志物学术大会暨CACA整合肿瘤学高峰论坛暨第十七届肿瘤标志物青年科学家论坛暨中国肿瘤标志物产业创新大会

作者：陈飘飘应斌武四川大学华西医院

目的:基于循环肿瘤细胞(CTCs)的液体活检技术具有无创、可灵敏特异地反映肿瘤状态等优势,在肿瘤诊断中发挥着重要作用。然而,外周血内CTCs数目稀少,且与大量红细胞和白细胞等共存,对CTCs的高效简单快速分离富集是肿瘤液体活检领域内的... 详细信息

目的:基于循环肿瘤细胞(CTCs)的液体活检技术具有无创、可灵敏特异地反映肿瘤状态等优势,在肿瘤诊断中发挥着重要作用。然而,外周血内CTCs数目稀少,且与大量红细胞和白细胞等共存,对CTCs的高效简单快速分离富集是肿瘤液体活检领域内的研究热点和难点。此外,对富集分离后的CTCs进行超灵敏精准定量亦是肿瘤诊断领域内的重点,特别是不依赖于仪器的即时检验(POCT),甚至是可视化读取方式。因此本工作的目的-CTCs的分离富集和精准可视化数字化定量辅助肿瘤诊断,是相关领域的热点和难点,具有较大的科学价值和临床使用价值。方法:在此,我们提出了一种纸基实验室,通过无酶核酸扩增和级联阳离子交换反应(CER)辅助单细胞水平分析(PLACS)来实现患者血液中痕量CTCs的快速准确POCT。首先,利用淋巴细胞分离液(LSS)、红细胞裂解液(EL)和三步离心,在45分钟内完成全血样本中CTCs的富集("12345"法)。通过整合核酸催化发卡组装(CHA)、CuS纳米粒子(CuS NPs)选择性识别Ag+和C-Ag+-C、CdTe量子点(QDs)选择性识别Cu2+和CuS NPs现象构建检测组分。级联CER和双量子点的竞争响应都有助于提高灵敏度。最后,结合四种信号输出方式:(1)裸眼读取;(ii)常规荧光计;(iii)距离/高度读取试纸条;(iv)自行研制的手持式荧光计。结果:该方法内四个读取模式(离心管溶液颜色,长度试纸条,手持式荧光仪,商品化荧光仪)下均可实现单细胞浓度级别A549细胞的准确定量。在此基础上,对47例临床肺癌外周血样本(阳性32例,阴性15例)进行定量分析,发现灵敏度为94%(30/32),特异性为100%,其AUC值为0.945。此外,根据CTCs的浓度可以大致实现癌症分期。此外,距离读取试纸条条和手持式荧光仪的POCT结果与临床叶酸受体-聚合酶链式试剂盒检测数据,临床诊断和影像学发现一致性良好。结论:综上所述,PLACS策略结合了高效的CTC分离、超灵敏的单细胞检测和多样化的信号输出方法,促进了肺癌患者血液样本中临床CTC的POCT检测。我们的富集方法只需要两个试剂和三个离心步骤,提供简单的处理和快速的结果。同时,POCT可以通过测试条或我们自行开发的手持式荧光计直观执行,以满足各种要求。值得注意的是,手持式荧光计的灵敏度与传统的同类产品相匹配,实现了单细胞精度。对临床样本的评估表明其在早期诊断和术后监测方面的潜力。该策略可以根据特定靶点适应各种适体,确保全面检测。因此,PLACS符合新一代分子诊断的理想,在临床POCT领域具有广阔的应用前景。

关键词： CTCs富集纯化级联放大 POCT 临床全血样品手持式仪器

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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国际检验医学杂志 2024年第17期45卷 2092-2097页

作者：张艳赵珍珍应斌武四川大学华西医院实验医学科四川成都610041 成都市郫都区中医医院检验科四川成都611730

目的采用间接法建立适用于成都市郫都区人群的性别、年龄特异的促甲状腺激素(TSH)参考区间。方法收集2022年3月至2023年8月成都市郫都区中医医院37514例患者的TSH数据,根据筛选标准对数据进行删减,采用偏度-峰度法进行正态性检验,Turke... 详细信息

目的采用间接法建立适用于成都市郫都区人群的性别、年龄特异的促甲状腺激素(TSH)参考区间。方法收集2022年3月至2023年8月成都市郫都区中医医院37514例患者的TSH数据,根据筛选标准对数据进行删减,采用偏度-峰度法进行正态性检验,Turkey法剔除离群值。不同性别和年龄TSH水平比较分别采用Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis H检验。应用非参数法建立TSH参考区间,并采用2种方法验证其可靠性,当其与试剂说明书参考区间的相对偏差小于参考变化值(RCV)或用于验证人群时>90%的TSH结果在参考区间内,则证明结果可靠。结果共纳入25761例患者的有效TSH数据,男9363例,女16398例。按年龄段将其分为8个亚组,即10~30~40、>40~50、>50~60、>60~70、>70~80、>80~90岁,男性TSH参考区间依次为0.457~4.884、0.465~4.229、0.445~4.918、0.457~4.826、0.471~5.160、0.425~5.477、0.456~5.645、0.465~6.418μIU/mL,女性TSH参考区间依次为0.546~5.196、0.592~5.499、0.606~5.815、0.549~5.915、0.527~6.099、0.457~5.927、0.435~6.078、0.415~6.321μIU/mL。参考区间上限、下限与试剂说明书的相对偏差均小于RCV(49.85%);在用于验证人群时,各组均有大于90%的TSH结果在参考区间内。结论采用间接法建立了性别和年龄特异的成都市郫都区人群TSH参考区间,可为甲状腺疾病的精准诊疗提供参考依据。

关键词：促甲状腺激素参考区间间接法年龄性别

诊断试剂系统评价中性能评价指标的使用现状与指标池构建

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中国循证医学杂志 2024年第7期24卷 806-818页

作者：刁莎何思颐刘峥陈哲程晓倪晓凤曾力楠应斌武赵荣生张伶俐四川大学华西第二医院药学部成都610041 四川大学华西第二医院循证药学中心成都610041 国家药品监督管理局药物制剂体内外相关性技术研究重点实验室成都610041 出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室成都610041 四川大学华西药学院成都610041 四川大学华西临床医学院成都610041 四川大学华西医院实验医学科成都610041 北京大学第三医院药剂科北京100191 四川大学华西医院中国循证医学中心成都610041

目的分析诊断试剂系统评价中相较于金标准的性能评价指标使用现状,并梳理、形成诊断试剂系统评价的性能评价指标体系清单。方法计算机检索PubMed、Embase(OVID)、Cochrane Library(OVID)、CBM、VIP、WanFang Data和CNKI数据库,搜集有关... 详细信息

目的分析诊断试剂系统评价中相较于金标准的性能评价指标使用现状,并梳理、形成诊断试剂系统评价的性能评价指标体系清单。方法计算机检索PubMed、Embase(OVID)、Cochrane Library(OVID)、CBM、VIP、WanFang Data和CNKI数据库,搜集有关诊断试剂性能评价的系统评价,检索时限为建库至2023年4月28日。由2名研究者独立筛选文献、提取资料,采用频数(构成比)描述评价指标使用现状,采用定性合成对评价指标进行归纳、汇总。结果纳入诊断试剂系统评价133篇,使用频率超过50%的评价指标为灵敏度(133/133,100.0%)、特异度(131/133,98.5%)和SROC曲线下面积(80/133,60.2%),使用频率不足5%的评价指标为Q指数(6/133,4.5%)、假阳性率(3/133,2.3%)、Kappa值(2/133,1.5%)、假阴性率(1/133,0.8%)和约登指数(1/133,0.8%)。为全面评价诊断试剂相较于金标准的性能,可从真实性、预测性两个角度开展评价,供使用的评价指标共14个。结论已发表的诊断试剂系统评价使用的评价指标差异性较大且较局限,亟需基于专家共识形成标准化评价指标。

关键词：诊断试剂系统评价性能评价指标

检验医学科规范化培训学员终身学习能力的系统评价

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继续医学教育 2024年第3期38卷 123-126页

作者：焦琳张予馨陈豪谢轶应斌武四川大学华西医院实验医学科四川成都610041

目的对四川大学华西医院检验医学科规范化培训学员的终身学习能力进行分析,为检验医学科住院医师核心胜任力导向的培养方案提供思路。方法对四川大学华西医院检验医学科2022年7月至2023年7月在培的住培学员进行自评问卷调查,调研终身学... 详细信息

目的对四川大学华西医院检验医学科规范化培训学员的终身学习能力进行分析,为检验医学科住院医师核心胜任力导向的培养方案提供思路。方法对四川大学华西医院检验医学科2022年7月至2023年7月在培的住培学员进行自评问卷调查,调研终身学习能力情况,对检验医学科基地的人才培养方式进行评估和总结。结果1)住院医师自评分的平均分为(132.4±32.7)分,其中最高分为160.0分,最低分为76.0分;住院技师自评分的平均分为(86.8±30.7)分,其中最高分为145.0分,最低分为30.0分;2)二、三年级住院医师的终身学习能力自评分均分高于一年级住院医师。住院医师的循证医学、审辨性思维以及学术研究的自评分均值均高于住院技师,仅在一年级住培学员的自我提高能力的自评分均值差别较小;3)在自我提高、循证医学、审辨性思维、学术研究4项评估指标中,住院医师和住院技师都是自我提高得分最高,学术研究得分最低。其中,住院医师在以下几个具体方面自评分较低:开展循证医学研究的能力,能系统完成文献检索和评价,区分证据级别;设计过课题(独立或经与他人讨论);掌握写作技巧的能力。住院技师在以下几个具体方面自评分较低:对异常的临床数据结果、科研结果进行解释的能力;设计过课题(独立或经与他人讨论);掌握写作技巧的能力;撰写过论文,能发表论文/在专业学术会议上发言。结论住培学员的核心胜任力还有提升的空间。为了加强住培学员的核心胜任力,基地应优化课程体系建设,增设循证医学和临床专科课程;应增加实验室管理、临床实验室质量管理等内容,将其纳入终身学习能力的考评内容;应建立对住院技师的核心胜任力的考评制度,增强住院技师的责任感和自我认同感。

关键词：规范化培训住院医师住院技师核心胜任力终身学习循证医学

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分子诊断技术检测感染性疾病的应用和发展

中华检验医学杂志 2022年第3期45卷 207-213页

作者：应斌武四川大学华西医院实验医学科成都610041

伴随着精准医学理念的发展, 在新型冠状病毒肺炎疫情流行的背景下, 感染性疾病的临床诊疗愈发得到重视, 而以分子生物学为核心的实验诊断技术作为感染性疾病临床实验诊断的重要手段尤其受关注。近年来, 随着纳米材料、应用化学、光物理... 详细信息

伴随着精准医学理念的发展, 在新型冠状病毒肺炎疫情流行的背景下, 感染性疾病的临床诊疗愈发得到重视, 而以分子生物学为核心的实验诊断技术作为感染性疾病临床实验诊断的重要手段尤其受关注。近年来, 随着纳米材料、应用化学、光物理学和生物传感等技术的进步, 分子诊断技术也迎来了革命性和创造性的发展。新一代定量PCR技术和基因测序技术、等温扩增技术、生物芯片和生物传感器技术在感染性疾病的临床诊断中具有应用前景和发展前途。

关键词：分子诊断技术定量PCR 等温扩增生物芯片生物传感器

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分子诊断技术在临床疾病中的应用进展

四川大学学报（医学版） 2016年第6期47卷 908-915,814页

作者：应斌武四川大学华西医院实验医学科成都610041

过去20年,临床分子诊断技术取得了飞跃式的发展,它已成为临床检验医学学科中最具发展潜力的领域。尤其是随着基因组学的深入研究,临床分子诊断方法已在更深层次揭示临床疾病的本质,从而指导临床诊断和治疗,许多临床分子诊断项目已成为... 详细信息

过去20年,临床分子诊断技术取得了飞跃式的发展,它已成为临床检验医学学科中最具发展潜力的领域。尤其是随着基因组学的深入研究,临床分子诊断方法已在更深层次揭示临床疾病的本质,从而指导临床诊断和治疗,许多临床分子诊断项目已成为国内外医疗机构的常规项目,广泛应用于临床各科。当前,应用于临床实验室分子检测的生物学技术主要包括核酸杂交、核酸扩增及DNA序列分析等。本文就分子诊断技术在感染性疾病、肿瘤和遗传病领域应用进展进行述评。

关键词：分子诊断技术二代测序液体芯片感染性疾病肿瘤遗传病

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四川某医学院医学英语教育的循证实践

中国循证医学杂志 2023年第12期23卷 1485-1488页

作者：吕梦媛周健谢红王澎高慧郭文应斌武薛晖四川大学华西临床医学院/华西医院成都610041

目的调查现有医学英语的教学方法和教学对象的基本情况,制定医学英语课程内容和教学方法,并评估教学效果。方法采用文献检索的方式总结现有医学英语教学方法;采用问卷调查的方式收集教学对象的基本信息和教学效果评估数据。结果医学... 详细信息

目的调查现有医学英语的教学方法和教学对象的基本情况,制定医学英语课程内容和教学方法,并评估教学效果。方法采用文献检索的方式总结现有医学英语教学方法;采用问卷调查的方式收集教学对象的基本信息和教学效果评估数据。结果医学英语教学可以从调整医学英语教学内容、提高英语授课比重、注重新兴电子产品在课外英语学习中的应用等方面进行优化,教学方法可采用翻转课堂等多种形式。问卷调查显示64.94%的学生对当前自身英语水平很不满意;非常认可医学英语的重要性。根据以上调查结果,将医学英语划分为两个学期的课程内容。课程采用理论授课、小班化教学等形式,运用情景再现、翻转课堂等教学方法。结论医学英语课程的教学内容应涵盖医学英语词汇、临床医学英语、职业医学英语和学术医学英语等多个方面,教学方式应灵活采用翻转课堂等多种形式。

关键词：医学英语本科教学课程设置教学效果

LBL结合PBL在分子诊断学规范化培训教学中的探索

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国际检验医学杂志 2022年第22期43卷 2810-2813页

作者：沈陈兰杨可应斌武四川大学华西医院实验医学科四川成都610041 成都上锦南府医院实验医学科四川成都611743

分子诊断学具有十分突出的实践性和应用性,是医学检验专业主要课程之一,然而,传统的教学模式已无法满足我国对应用型人才培养的需求。该文以四川大学华西医院规范化培训班学员为培养对象,探讨了以授课为基础的教学法(LBL)结合以问题为... 详细信息

分子诊断学具有十分突出的实践性和应用性,是医学检验专业主要课程之一,然而,传统的教学模式已无法满足我国对应用型人才培养的需求。该文以四川大学华西医院规范化培训班学员为培养对象,探讨了以授课为基础的教学法(LBL)结合以问题为基础的教学法(PBL)在分子诊断教学中的应用,在课前通过设计PBL案例对知识点进行预热,在授课过程中对于基础概念仍采用传统的LBL进行教学,并对教学所涉及的实验操作进行技能考核。LBL结合PBL能激发学员学习的主观能动性,同时提升教学效率和教学质量,为培养高素质的应用型检验技术人才提供新的教学思路。

关键词：以授课为基础的教学法以问题为基础的教学法分子诊断学教学方法

高分辨熔解曲线分析在遗传病分子诊断中的应用

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中华检验医学杂志 2017年第2期40卷 146-148页

作者：应斌武四川大学华西医院实验医学科成都610041

高分辨熔解曲线分析（ HRM）技术基本原理为：DNA饱和荧光染料加入PCR反应体系，在一定的温度范围内将PCR扩增子进行加热变性，专业仪器检测变性双链DNA荧光信号并绘制熔解曲线，根据不同熔解曲线形状来区分野生型和杂合突变型。 HRM技... 详细信息

高分辨熔解曲线分析（ HRM）技术基本原理为：DNA饱和荧光染料加入PCR反应体系，在一定的温度范围内将PCR扩增子进行加热变性，专业仪器检测变性双链DNA荧光信号并绘制熔解曲线，根据不同熔解曲线形状来区分野生型和杂合突变型。 HRM技术因其简单易行、准确快速、低成本，周期时间短、高通量等优点而广泛应用于基因突变扫描。此外，与其他突变筛查方法相比， HRM实现真正的闭管操作， PCR 结束后直接运行高分辨熔解分析，使HRM 技术更加方便易行。HRM技术是应用于突变筛查、基因分型等的遗传学分析新技术。（中华检验医学杂志，2017，40：146－148）

关键词：遗传性疾病,先天性聚合酶链反应突变基因分型技术高分辨率熔解曲线