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基于CFTR的H2受体调节剂高通量筛选细胞模型的构建

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中国药学杂志 2022年第2期57卷 109-115页

作者：刘雪莹吴明达高雪伟冯剑南高俊涛郝峰庄文越北华大学医学技术学院吉林吉林132013 吉林医药学院吉林吉林132013 延边大学医学院吉林延吉133002

目的建立基于囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, CFTR)高通量筛选组胺H2受体(histocompatibility-2)调节剂的模型。方法应用RT-PCR、Western blot检测H2受体在Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中表达情况。采用脂质体转染获取同时表达CFTR和黄色荧光蛋白双突变体YFP-H148Q/I152L的FRT细胞。荧光淬灭动力学实验检测细胞模型功能,判断该模型是否可以筛选H2受体的调节剂。结果 RT-PCR、Western blot结果显示,FRT内源性表达H2受体。采用倒置荧光显微镜观察,证实成功构建同时表达CFTR和YFP-H148Q/I152L的细胞模型。荧光淬灭动力学实验证明该模型具有cAMP激活氯离子通道的特性,可用于H2受体调节剂的筛选,且荧光斜率(slope)值与H2受体调节剂的浓度呈剂量依赖关系。结论成功构建基于CFTR高通量筛选H2受体调节剂的细胞模型。

关键词：囊性纤维化跨膜传导调节因子 H2受体 cAMP激活氯离子通道大鼠甲状腺滤泡上皮细胞高通量筛选细胞模型

安五脂素通过抑制氧化应激和铁死亡改善肺纤维化

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解放军医学杂志 2022年

作者：陈悦琪陈奕良郭春花徐铭晨方菁王宇瑶郝凯敏王春靖王春梅庄文越北华大学医学技术学院吉林医药学院附属医院呼吸内科北华大学附属医院呼吸内科北华大学药学院

目的探讨安五脂素对肺纤维化的干预作用及其机制。方法雄性ICR小鼠65只随机分成对照组、BLM模型组、安五脂素低剂量组（1mg/kg）、安五脂素高剂量组（4mg/kg）与N-乙酰半胱氨酸组（150mg/kg），每组13只。采用气管灌注5mg/kg博来霉素... 详细信息

目的探讨安五脂素对肺纤维化的干预作用及其机制。方法雄性ICR小鼠65只随机分成对照组、BLM模型组、安五脂素低剂量组（1mg/kg）、安五脂素高剂量组（4mg/kg）与N-乙酰半胱氨酸组（150mg/kg），每组13只。采用气管灌注5mg/kg博来霉素（BLM）诱导小鼠肺纤维化模型。收集血清和肺组织，采用HE染色和Masson三色染色观察肺组织病理学变化并进行肺纤维化评分；采用试剂盒测定血清氧化应激指标及肺组织HYP含量；采用Westernblotting及qRT-PCR检测铁死亡通路相关基因的表达水平。取对数生长期HFL-1细胞，（1）设置对照组与安五脂素给药组（0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80μmol/L），采用CCK-8法检测安五脂素对HFL-1细胞的毒性作用。（2）设置对照组、转化生长因子（TGF）-β;模型组、安五脂素低剂量组（5μmol/L）与安五脂素高剂量组（10μmol/L），用TGF-β;诱导肺纤维化细胞模型。采用试剂盒测定氧化应激指标及ROS水平；采用Westernblotting及qRT-PCR检测铁死亡通路相关基因的表达水平。结果HE染色、Masson染色结果及肺组织羟脯氨酸（HYP）含量增加提示BLM诱导的小鼠肺纤维化模型构建成功，给予安五脂素后肺纤维化表型明显改善。CCK-8检测结果显示，当安五脂素浓度0.05）。与BLM或TGF-β;模型组比较，给予安五脂素可明显提高小鼠血清及HFL-1细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性及谷胱甘肽（GSH）水平，明显降低丙二醛（MDA）含量（P<0.01或P<0.001）。与TGF-β;模型组比较，给予安五脂素10μmol/L可明显降低HFL-1细胞中ROS水平（P<0.01）。Westernblotting和qRT-PCR检测结果显示，给予安五脂素可明显上调小鼠肺组织及HFL-1细胞中铁死亡通路中谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、转铁蛋白（TF）的表达水平，下调转铁蛋白受体1（TFR1）的表达水平（P<0.05、P<0.01或P<0.001）。结论安五脂素可通过抑制氧化应激和铁死亡而改善肺纤维化，为开发肺纤维化治疗药物提供了一定的理论基础。

关键词：安五脂素肺纤维化氧化应激铁死亡

研究生《分子生物学检验技术》课程思政教学案例设计与实施——以“聚合酶链式反应”教学为例

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才智 2023年第9期 97-100页

作者：庄文越王春梅赵云冬孔繁利北华大学

以临床检验诊断学专业研究生《分子生物学检验技术》课程中的“聚合酶链式反应”作为课程思政教学案例，从学情分析、教学目标、教学实施过程整体设计等方面探讨了课程思政元素在“聚合酶链式反应”教学案例中挖掘与融入的方法。在教学... 详细信息

以临床检验诊断学专业研究生《分子生物学检验技术》课程中的“聚合酶链式反应”作为课程思政教学案例，从学情分析、教学目标、教学实施过程整体设计等方面探讨了课程思政元素在“聚合酶链式反应”教学案例中挖掘与融入的方法。在教学全过程有效融入课程思政教育，增强价值引领，促进研究生的全面发展。

关键词：研究生分子生物学检验技术课程思政教学案例

研究生分子生物学检验技术“金课”建设的实践

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吉林医药学院学报 2023年第3期44卷 228-229页

作者：庄文越王春梅赵云冬孔繁利北华大学医学技术学院吉林吉林132013 北华大学药学院吉林吉林132013

2018年在新时代全国高等学校本科教育工作会议上第一次提出要打造大学“金课”,淘汰“水课”。金课可以归结为“两性一度”:高阶性、创新性和挑战度^([1])。虽然金课的研究对象是本科教育,但是作为本科教育的延续,研究生教育承担着为国... 详细信息

2018年在新时代全国高等学校本科教育工作会议上第一次提出要打造大学“金课”,淘汰“水课”。金课可以归结为“两性一度”:高阶性、创新性和挑战度^([1])。虽然金课的研究对象是本科教育,但是作为本科教育的延续,研究生教育承担着为国家培养高素质创新型人才的重任,是衡量一个国家科技发展水平和教育发达程度的重要标志,属于高阶教育,但是目前研究生教育存在着很多问题。

关键词：研究生分子生物学检验技术 “金课”

安五脂素对小鼠肺纤维化的改善作用及其机制研究

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解放军医学杂志 2022年第3期47卷 227-236页

作者：陈悦琪陈奕良郭春花徐铭晨方菁王宇瑶郝凯敏王春靖王春梅庄文越北华大学医学技术学院吉林省吉林市132013 吉林医药学院附属医院呼吸内科吉林省吉林市132013 北华大学附属医院呼吸内科吉林省吉林市132013 北华大学药学院吉林省吉林市132013

目的探讨安五脂素对肺纤维化的干预作用及其机制。方法雄性ICR小鼠65只,随机分成对照组、BLM模型组、安五脂素低剂量组(1 mg/kg)、安五脂素高剂量组(4 mg/kg)与N-乙酰半胱氨酸组(150 mg/kg),每组13只。采用气管灌注5 mg/kg博来霉素(BLM... 详细信息

目的探讨安五脂素对肺纤维化的干预作用及其机制。方法雄性ICR小鼠65只,随机分成对照组、BLM模型组、安五脂素低剂量组(1 mg/kg)、安五脂素高剂量组(4 mg/kg)与N-乙酰半胱氨酸组(150 mg/kg),每组13只。采用气管灌注5 mg/kg博来霉素(BLM)诱导小鼠肺纤维化模型。收集各组小鼠血清和肺组织,采用HE染色和Masson三色染色观察肺组织病理学变化并进行肺纤维化评分;采用试剂盒测定血清氧化应激指标及肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;采用Western blotting及qRT-PCR检测铁死亡通路相关基因的表达水平。取对数生长期HFL-1细胞:(1)设置对照组与安五脂素给药组(0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80μmol/L),采用CCK-8法检测安五脂素对HFL-1细胞的毒性作用。(2)设置对照组、转化生长因子(TGF)-β_(1)模型组、安五脂素低剂量组(5μmol/L)与安五脂素高剂量组(10μmol/L),以TGF-β_(1)诱导肺纤维化细胞模型,采用试剂盒测定氧化应激指标及活性氧(ROS)水平,采用Western blotting及qRT-PCR检测铁死亡通路相关基因的表达水平。结果HE染色、Masson染色结果及肺组织HYP含量测定结果均提示BLM诱导的小鼠肺纤维化模型构建成功,给予安五脂素后肺纤维化表型明显改善。CCK-8检测结果显示,当安五脂素浓度0.05)。与BLM或TGF-β_(1)模型组比较,给予安五脂素可明显提高小鼠血清及HFL-1细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性及谷胱甘肽(GSH)水平,明显降低丙二醛(MDA)含量(P<0.01或P<0.001)。与TGF-β_(1)模型组比较,给予10μmol/L安五脂素可明显降低HFL-1细胞中ROS水平(P<0.01)。Westernblotting和qRT-PCR检测结果显示,给予安五脂素可明显上调小鼠肺组织及HFL-1细胞中铁死亡通路中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、转铁蛋白(TF)的表达水平,下调转铁蛋白受体1(TFR1)的表达水平(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。结论安五脂素可通过抑制氧化应激和铁死亡而改善肺纤维化,为开发肺纤维化的治疗药物提供了一定的理论基础。

关键词：安五脂素肺纤维化氧化应激铁死亡

AML1-ETO融合蛋白对BCL-2基因表达的影响

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中国实验血液学杂志 2013年第6期21卷 1394-1398页

作者：庄文越李正祎赵昀岑建农庄文卓陈子兴北华大学医学检验学院吉林吉林132013 吉林医药学院检验系吉林吉林132013 苏州大学唐仲英血液学研究中心江苏苏州215000 苏州大学附属第一医院江苏省血液学研究所江苏苏州215000 苏州大学基础医学与生物科学学院细胞生物学系江苏苏州215000

本研究旨在观察AML1-ETO在白血病细胞中对于抗凋亡基因BCL-2表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937-WT、U937-Mock和经AML1-ETO基因转染的U937-A/E1-4的细胞凋亡率;使用免疫印迹法检... 详细信息

本研究旨在观察AML1-ETO在白血病细胞中对于抗凋亡基因BCL-2表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937-WT、U937-Mock和经AML1-ETO基因转染的U937-A/E1-4的细胞凋亡率;使用免疫印迹法检测cleaved caspase-3蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测转染细胞和对照组细胞以及AML-M2患者白血病细胞BCL-2 mRNA的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与BCL-2基因启动子之间直接的相互作用情况。结果表明:AML1-ETO转染细胞的凋亡率明显增加,且检测到cleaved caspase-3蛋白的表达;转染了AML1-ETO的U937细胞系和具有AML1-ETO融合基因的AML-M2患者中,BCL-2的mRNA表达水平显著下调;转染细胞沉淀富集的AML1-ETO直接结合的DNA中含有BCL-2基因的启动子序列。结论:BCL-2是AML1-ETO的直接靶基因,AML1-ETO能下调BCL-2的表达。

关键词： AML1-ETO融合蛋白 BCL-2 基因表达

AML1-ETO融合蛋白对p14^(ARF)基因转录调控的影响

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中国实验血液学杂志 2017年第4期25卷 970-974页

作者：庄文越李正祎陈奕桦刘燕陈子兴北华大学医学检验学院吉林医药学院检验学院吉林市中心医院吉林吉林132013 苏州大学附属第一医院血液科江苏省血液学研究所江苏苏州215000

目的:探讨异常转录因子AML1-ETO融合蛋白对p14^(ARF)的转录调控机制。方法:应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测转染细胞和对照组细胞以及AML-M2患者白血病细胞p14^(ARF)mRNA的表达;用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)对其p14^(ARF)启动子... 详细信息

目的:探讨异常转录因子AML1-ETO融合蛋白对p14^(ARF)的转录调控机制。方法:应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测转染细胞和对照组细胞以及AML-M2患者白血病细胞p14^(ARF)mRNA的表达;用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)对其p14^(ARF)启动子的甲基化状态进行分析;染色质免疫沉淀技术(Ch IP)研究转染细胞中AML1-ETO与p14^(ARF)启动子之间直接的相互作用情况;应用qRT-PCR检测5-氮杂胞苷(5-Aza)处理后细胞内p14^(ARF) mRNA表达水平。结果:转染了AML1-ETO的U937细胞系和具有AML1-ETO融合基因的AM L-M2患者中,p14^(ARF)的mRNA表达水平下调;p14^(ARF)启动子在对照组细胞株和无AML1-ETO融合基因的AML-M2患者中处于非甲基化状态,在转染细胞株和具有AML1-ETO融合基因的AML-M2患者中处于高甲基化状态;转染细胞沉淀富集的DNA中含有p14^(ARF)的启动子序列;5-Aza能上调p14^(ARF)mRNA的表达。结论:p14^(ARF)是AML1-ETO融合蛋白可能的靶基因,p14^(ARF)启动子高甲基化所致的基因沉默可能是M2b型白血病发生发展的一个重要因素。

关键词： AML1-ETO p14ARF DNA甲基化

吉林地区STR系统6位点复合扩增的频率分布

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临床检验杂志 2006年第1期24卷 23-25页

作者：王冰梅庄文越李正 庄文卓北华大学医学院分子生物学教研室吉林省吉林市132013

目的分析吉林地区汉族人群短串联重复序列（STR）3个双基因座即6个STR位点的遗传多态性分布，获得相应多态位点的群体遗传学数据。方法采集103份吉林地区汉族无血缘关系的个体血样，提取DNA，经聚合酶链反应（PCR）分3组进行复合扩增... 详细信息

目的分析吉林地区汉族人群短串联重复序列（STR）3个双基因座即6个STR位点的遗传多态性分布，获得相应多态位点的群体遗传学数据。方法采集103份吉林地区汉族无血缘关系的个体血样，提取DNA，经聚合酶链反应（PCR）分3组进行复合扩增（Ⅰ：TPOX＋CSF1PO，Ⅱ：D3S1358＋D13S317，Ⅲ：D5S818＋D19S400），非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离后，银染显色分析。统计各等位基因的基因频率，分别计算各基因座的杂合度（H）、个人识别能力（DP）、非父排除率（PE）和多态性信息含量（PIC）。结果得到6个基因座各等位基因的基因频率，经X^2检验，基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡，具有较高的杂合度和多态性信息含量。上述6个基因座的杂合度为0．7511～0．8376，个人识别能力为0．8273～0．9247，非父排除率为0．5167～0．6718，多态性信息含量为0．7100～0．8195。结论此STR3个双基因座具有高度多态性，是较理想的遗传标志，所得到的等位基因频率等数据可为法医学个人识别、亲子鉴定及群体遗传学研究提供依据。

关键词：短串联重复序列聚合酶链式反应 PCR复合扩增频率分布

AML1-ETO真核表达载体的构建及对U937细胞增殖和分化的影响

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中华血液学杂志 2011年第6期32卷 373-377页

作者：庄文越陈子兴祁小飞岑建农沈宏杰赵昀苏州大学医学部、苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所 215000

目的构建pcDNA3．1-AML1-ETO真核表达载体，并观察AMLI-ETO融合蛋白在U937细胞内的表达并检测其对细胞增殖与分化的影响。方法以原核表达载体pCMV5-AMLI—ETO为模板扩增AML1-ETO目的片段，将该基因重组于pcDNA3．1／V5-His-TOPO真核表... 详细信息

目的构建pcDNA3．1-AML1-ETO真核表达载体，并观察AMLI-ETO融合蛋白在U937细胞内的表达并检测其对细胞增殖与分化的影响。方法以原核表达载体pCMV5-AMLI—ETO为模板扩增AML1-ETO目的片段，将该基因重组于pcDNA3．1／V5-His-TOPO真核表达载体上，用脂质体转染技术将其导入U937细胞，经G418筛选获得稳定转染的克隆，PCR检测AML1-ETO基因的整合，RT—PCR及Westernblot检测AML1-ETOmRNA和蛋白的表达，用锥虫蓝拒染人工计数法观察细胞增殖活性，流式细胞术检测髓系分化抗原表达的变化，瑞特染色法观察细胞形态改变。结果pcDNA3．1-AML1-ETO经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确，筛选出AMLI-ETO基因高表达的亚克隆，证实AML1-ETO基因稳定转染到U937细胞中并得到表达；转染细胞增殖受抑（P〈0．05），髓系分化抗原CD11b表达阳性率[（4．17±0．31）％]低于转染空载体和未转染对照组[（11．40±0．17）％、（11．03±0．15）％]（P〈0．001），形态呈低分化表现。转染细胞经TPA处理后，CD11b表达无明显变化（P〉0．05）。结论成功构建pcDNA3．1-AML1-ETO表达载体，并在真核细胞中得到了正确表达，AML1-ETO基因能抑制U937细胞的增殖与分化，为进一步研究该基因致白血病的机制奠定了基础。

关键词： AML1-ETO 白血病细胞增殖抗原 CD11b U937细胞