AML1-ETO真核表达载体的构建及对U937细胞增殖和分化的影响

作     者：庄文越 陈子兴 祁小飞 岑建农 沈宏杰 赵昀 CHEN Zi-xing;QI Xiao-fei;CEN Jian-nong;SHEN Hong-jie;ZHAO Yun

作者机构：苏州大学医学部、苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所215000 

出 版 物：《中华血液学杂志》 (Chinese Journal of Hematology)

年 卷 期：2011年第32卷第6期

页      面：373-377页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：AML1-ETO 白血病 细胞增殖 抗原 CD11b U937细胞 

摘      要：目的构建pcDNA3．1-AML1-ETO真核表达载体，并观察AMLI-ETO融合蛋白在U937细胞内的表达并检测其对细胞增殖与分化的影响。方法以原核表达载体pCMV5-AMLI—ETO为模板扩增AML1-ETO目的片段，将该基因重组于pcDNA3．1／V5-His-TOPO真核表达载体上，用脂质体转染技术将其导入U937细胞，经G418筛选获得稳定转染的克隆，PCR检测AML1-ETO基因的整合，RT—PCR及Westernblot检测AML1-ETOmRNA和蛋白的表达，用锥虫蓝拒染人工计数法观察细胞增殖活性，流式细胞术检测髓系分化抗原表达的变化，瑞特染色法观察细胞形态改变。结果pcDNA3．1-AML1-ETO经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确，筛选出AMLI-ETO基因高表达的亚克隆，证实AML1-ETO基因稳定转染到U937细胞中并得到表达；转染细胞增殖受抑（P〈0．05），髓系分化抗原CD11b表达阳性率[（4．17±0．31）％]低于转染空载体和未转染对照组[（11．40±0．17）％、（11．03±0．15）％]（P〈0．001），形态呈低分化表现。转染细胞经TPA处理后，CD11b表达无明显变化（P〉0．05）。结论成功构建pcDNA3．1-AML1-ETO表达载体，并在真核细胞中得到了正确表达，AML1-ETO基因能抑制U937细胞的增殖与分化，为进一步研究该基因致白血病的机制奠定了基础。