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作者：帅文苑南昌大学

学位级别：硕士

黄曲霉毒素B(Aflatoxin B,AFB)是由黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)产生的有毒次级代谢产物,主要污染玉米、花生、棉籽、大米等农作物产品,是毒性最强的真菌毒素之一,对人体和动物机体可产生肝毒性、致... 详细信息

黄曲霉毒素B(Aflatoxin B,AFB)是由黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)产生的有毒次级代谢产物,主要污染玉米、花生、棉籽、大米等农作物产品,是毒性最强的真菌毒素之一,对人体和动物机体可产生肝毒性、致畸性、致癌性等多种毒害作用。一般针对真菌毒素采用的检测方法操作复杂繁琐、所需的成本较高且耗时耗力等,因此建立一种高效、快速且简便的方法用于农作物产品中AFB的检测具有重要意义。基于荧光均相免疫分析方法具有快速简便、灵敏度高等优点。荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)或生物发光共振能量转移(Bioluminescence resonance energy transfer,BRET)技术为实现纳米尺度的距离变化提供了快速、灵敏的检测,将其与免疫学分析结合运用于真菌毒素的检测将是一种高效的手段。FRET中荧光蛋白(Fluorescent protein,FPs)和量子点(Quantum Dot,QD)作为荧光探针,前者可通过基因编码获得且可作为抗体的融合伴侣、光稳定性好,后者因其斯托克斯位移大、发射光谱窄等特殊的光学性质均获得广泛应用;BRET中供体发色团是一个生物发光分子,属于酶催化底物发光,其中纳米荧光素酶(Nano Luciferase,Nluc)是目前已知最小荧光素酶之一,因发光强度高、稳定性好等而备受关注。供体与受体两个荧光团分子间的距离必须在10 nm内才能发生FRET或BRET,且荧光分子团的光学稳定性及荧光量子产率等是影响FRET或BRET的关键因素。本研究采用抗AFB纳米抗体(G8)作为识别元件,以绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)、Nluc、红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,Tag RFP)、QD等荧光分子团作为发光供体或受体,研究不同形式的纳米抗体与荧光或发光蛋白的融合表达对于识别和荧光性能的影响,探索不同的供受体配对形式和条件对能量转移效率的影响,并尝试利用纳米抗体与AFB间的特异性识别能力,建立一种荧光均相免疫分析检测AFB的方法。主要研究内容如下:(1)对抗AFB纳米抗体与荧光分子融合表达形式进行了研究。通过基因工程技术将抗AFB纳米抗体的单价及多价串联体,分别与GFP编码片段融合并克隆至原核表达载体pET30a,抗AFB单价纳米抗体与Nluc编码片段融合克隆至原核表达载体pET22b,经大肠杆菌表达系统获得融合蛋白G8-GFP、DiG8-GFP、Tri G8-GFP和G8-Nluc,通过亲和层析纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明四种融合蛋白均为可溶性表达,表达量分别为6.0、7.5、4.0、2.7 mg/L。采用酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)和光谱扫描法对融合蛋白的识别活性及荧光特性进行了测定。结果显示,未融合蛋白(G8)、融合蛋白(G8-GFP、DiG8-GFP)的半抑制浓度(IC)分别为12.10、14.10、2.19 ng/mL,表明单价重组蛋白的IC值与未融合蛋白相似,而双价重组蛋白的IC值与之相比提高了5.5倍;融合蛋白G8-Nluc的IC值为1.39 ng/mL,与未融合G8相比提高了8.7倍;三价融合蛋白Tri G8-GFP表现出与抗原的结合活性,但AFB的阻断活性较差;融合后GFP的荧光强度表现为:双价>单价>三价,融合后的Nluc催化底物腔肠素(Coelenterazine H,CTZ-H)仍表现出较强的发光性质。(2)对能量转移的供受体配对进行了研究。选择三对供受体分别为G8-GFP和AFB-Tag RFP、G8-GFP和QD-AFB、G8-Nluc和QD-AFB进行了比较。结果表明,供受体G8-GFP和AFB-Tag RFP、G8-GFP和QD-AFB由于荧光蛋白的量子点产率低,表现出较弱的能量转移效率(分别为12.19%和23.22%),同时GFP的激发波长导致量子点的背景信号较大,影响检测灵敏度。供受体G8-Nluc和QD-AFB配对,供体G8-Nluc的酶催化底物发光强度高,无激发波长的背景干扰,光谱测定结果显示,能量转移效率达25.67%。(3)基于G8-Nluc和QD-AFB作为能量转移供受体的BRET均相免疫分析检测AFB方法初探。对融合蛋白G8-Nluc表达条件进行了单因素条件优化,在诱导剂异丙基-β-D硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度为2.5 mM条件下,30℃,220 rpm诱导表达12 h,融合蛋白G8-Nluc表达量达5.5 mg/L,与未优化

关键词：黄曲霉毒素B1 纳米抗体融合表达荧光共振能量转移生物发光共振能量转移均相免疫分析

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温度响应的黄曲霉毒素B_(1)纳米抗体重组表达、复性及生物活性

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食品科学 2023年第18期44卷 141-148页

作者：张乐平涂追李燕萍李小江帅文苑张航何庆华南昌大学食品科学与资源挖掘全国重点实验室江西南昌330047 南昌大学食品学院江西南昌330047 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047

将不同长度类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptide,ELP)与纳米抗体融合表达,获得具有温度响应能力的抗黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))纳米抗体。采用递归定向连接克隆得到重组表达载体pET30a-G8-ELP20、pET30a-G8-ELP40、pET30a-G8-ELP60、pET30a-G8-ELP80,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,表达后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析显示4种融合蛋白均以不溶性包涵体形式存在于菌体沉淀中,对其进行变性处理后,分别采用稀释复性、可逆相变循环(inverse transition cycling,ITC)纯化、透析复性、柱上复性4种方式对包涵体蛋白进行复性。SDS-PAGE分析4种复性方式分别获得的4种融合蛋白,结果显示其纯度差异不显著,但ITC纯化蛋白得率最高,分别为83%、90.7%、89.5%、88.3%;间接竞争酶联免疫吸附实验测定复性后融合蛋白活性,结果表明由稀释复性法获得的G8-ELP80重组蛋白IC50最低(4.35 ng/mL);浊度分析法测得融合不同长度ELP标签纳米抗体的相变温度分别为45、38、32、28℃;圆二色谱分析显示4种融合蛋白二级结构均以β-折叠、β-转角为主,与预估结果相符。本研究将ELP标签与抗AFB1纳米抗体融合表达,实现了纳米抗体的温度刺激响应性,系统比较了不同复性方式对蛋白特性的影响,为后续AFB1检测分析提供了基础。

关键词：纳米抗体类弹性蛋白融合表达可逆相变循环包涵体复性

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聚天冬氨酸苄酯改性纳米羟基磷灰石的制备

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化工新型材料 2020年第10期48卷 282-285页

作者：徐敏熊兵舒扬郭建业帅文苑黄萍南昌大学科学技术学院生物化学系南昌330029 南昌大学南昌330031

描述了一种羟基磷灰石(HA)表面改性的制备方法,它是通过L-天冬氨酸-β-苄酯-N-羧酸酐开环聚合的方法制得。首先,将HA和硅烷偶联剂KH-550反应得到表面含有活性氨基的改性羟基磷灰石(HAAPS)。其次,HAAPS引发L-天冬氨酸-β-苄酯-N-羧酸酐(B... 详细信息

描述了一种羟基磷灰石(HA)表面改性的制备方法,它是通过L-天冬氨酸-β-苄酯-N-羧酸酐开环聚合的方法制得。首先,将HA和硅烷偶联剂KH-550反应得到表面含有活性氨基的改性羟基磷灰石(HAAPS)。其次,HAAPS引发L-天冬氨酸-β-苄酯-N-羧酸酐(BLA-NCA)开环聚合得到表面接枝聚天冬氨酸苄酯(PBLA)的羟基磷灰石(PBLA-g-HA),实现了HA表面由亲水性向疏水性的转变,合成结果通过红外光谱(FT-IR)与热重(TG)表征。FT-IR和TG结果均证实HA被成功接枝,通过控制不同的反应时间和比例,羟基磷灰石表面的PBLA接枝量为28.32%~60.48%。分散性实验证实经过PBLA表面改性的HA可显著地增加HA表面的疏水性和防止纳米粒子HA的聚集。

关键词：表面改性开环聚合羟基磷灰石聚氨基酸

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抗黄曲霉毒素B_(1)多价纳米抗体融合蛋白的构建及活性分析

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分析测试学报 2022年第2期41卷 213-219页

作者：帅文苑何庆华钟引凤黄云祥张航刘传勇张乐平涂追南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学食品学院江西南昌330047 南昌大学生命科学学院江西南昌330031 江西省现代分析科学重点实验室江西南昌330031

纳米抗体来源于天然缺失轻链的重链抗体可变区,是已知最小抗原结合单元。该研究构建了抗黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))纳米抗体的单价及多价串联体,分别与绿色荧光蛋白(GFP)编码片段融合并克隆至原核表达载体p ET30。以大肠杆菌BL21(DE3)作... 详细信息

纳米抗体来源于天然缺失轻链的重链抗体可变区,是已知最小抗原结合单元。该研究构建了抗黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))纳米抗体的单价及多价串联体,分别与绿色荧光蛋白(GFP)编码片段融合并克隆至原核表达载体p ET30。以大肠杆菌BL21(DE3)作为表达宿主,通过异丙基-β-D硫代吡喃半乳糖苷诱导,亲和层析技术分别纯化单、双及三价抗AFB_(1)纳米抗体与GFP的融合蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明三种融合蛋白均为可溶性表达,表达量分别为6.0、7.5、4.0 mg/L。采用酶联免疫吸附法和荧光扫描法对重组融合蛋白的抗原识别活性及荧光特性进行测定。结果显示,未融合蛋白、单价及双价串联重组蛋白的半抑制浓度(IC;)分别为12.10、14.10、2.19 ng/m L,表明单价重组蛋白的IC;值与未融合蛋白相似,而双价重组蛋白的IC;值与之相比提高了5.5倍。当浓度为0.7 mg/m L时,两种重组蛋白的荧光强度均可达3000以上,荧光强度与GFP相当,且二价重组蛋白表现出更高的荧光强度;三价串联重组蛋白表现出与抗原的结合活性,但AFB_(1)的阻断活性较差,且荧光强度仅为1700左右。该研究为后续建立基于荧光信号的免疫学检测方法奠定了基础,同时也为优化免疫学检测中纳米抗体亲和活性提供了思路和借鉴。

关键词：黄曲霉毒素B_(1) 纳米抗体串联重组原核表达酶联免疫吸附法

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2016’土地管理主要政策回顾暨2017’重点土地政策展望

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中国土地 2017年第1期 8-13页

作者：帅文波中国国土资源经济研究院

2016年是我国结构性改革取得初步成效之年。这一年，党中央国务院继续坚持了稳中求进的战略，助推“去产能、去库存、去杠杆、降成本、补短板”五大关键任务。为适应经济发展新常态，2016年我国土地政策继续坚持耕地保护和资源节约的基... 详细信息

2016年是我国结构性改革取得初步成效之年。这一年，党中央国务院继续坚持了稳中求进的战略，助推“去产能、去库存、去杠杆、降成本、补短板”五大关键任务。为适应经济发展新常态，2016年我国土地政策继续坚持耕地保护和资源节约的基本国策，围绕稳增长、去库存、降成本工作重点，深化改革、稳中求进。

关键词：政策展望土地管理结构性改革稳中求进经济发展基本国策资源节约耕地保护

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毛泽东情报意识初探

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情报资料工作 1993年第6期14卷 27-29页

作者：帅文洁中共安庆市委党校

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加强理论联系实际,改进党校教育

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安徽省委党校学报 1992年第3期8卷 64-65页

作者：帅文洁中共安庆市委党校

坚持和加强理论联系实际,对党校来说尤其重要。这是党对党校的要求,也是党校的优良传统。但是,我们也不能不看到,目前党校教育中理论联系实际还做得很不够,还存在“学与用对不上号”等现象,与党中央要求有一定差距,与当前深化改革,扩大... 详细信息

坚持和加强理论联系实际,对党校来说尤其重要。这是党对党校的要求,也是党校的优良传统。但是,我们也不能不看到,目前党校教育中理论联系实际还做得很不够,还存在“学与用对不上号”等现象,与党中央要求有一定差距,与当前深化改革,扩大开放,加快步伐的新形势也不相适应。因此,党校必须进一步加强理论联系实际,解放思想,大胆探索,勇于创新,努力把党校教育搞好搞活,以适应形势发展的需要。

关键词：党校教育理论联系实际党性锻炼解放思想联结点理论学习组织生活制度党性教育理论教育世界观改造

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基于相关证据推理规则的激光惯组健康评估

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航空学报 2024年第12期45卷 206-223页

作者：唐帅文曹友张朋姜江国防科技大学系统工程学院长沙410073 火箭军士官学校控制技术教研室青州262500 西安卫星测控中心宇航动力学国家重点实验室西安710043

激光惯组(LIMU)是复杂装备系统的重要导航单机,其良好的健康状态对于确保系统安全稳定工作具有重要意义。针对激光惯组健康评估中面临的评估指标体系不健全、评估框架不一致、评估指标不独立和评估模型参数不确定问题,在激光惯组工作机... 详细信息

激光惯组(LIMU)是复杂装备系统的重要导航单机,其良好的健康状态对于确保系统安全稳定工作具有重要意义。针对激光惯组健康评估中面临的评估指标体系不健全、评估框架不一致、评估指标不独立和评估模型参数不确定问题,在激光惯组工作机理分析的基础上,构建健康评估指标体系,提出基于相关证据推理规则(ERR-DE)的激光惯组健康评估方法。首先,提出转换矩阵的概念,实现了不同评估框架的统一转换。其次,采用变异系数法确定证据权重,采用基于距离的方法确定证据可靠度。然后,基于证据可靠度提出证据融合顺序确定机制,提出基于相对总体相关系数(RTDC)的证据相关性分析方法,并在证据推理规则(ERR)的基础上提出了相关证据推理规则。再者,构建参数优化模型以确定最优评估参数,提高评估精度,进一步对评估算法进行了总结。最后,通过某型激光惯组健康评估案例和对比研究,验证了所提方法的有效性。

关键词：证据推理规则激光惯组健康评估证据相关性参数优化

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文化对家族企业治理的影响

文化对家族企业治理的影响

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作者：帅文广东商学院

学位级别：硕士

家族企业作为一种所有权和经营权集中的企业组织模式,在我国文化背景下是一种有效率的治理结构。企业的治理本质上是契约的治理,契约是不完全的,可以采用正式治理和非正式治理。家文化极大地影响了企业内部的契约关系,非正式治理在家族... 详细信息

家族企业作为一种所有权和经营权集中的企业组织模式,在我国文化背景下是一种有效率的治理结构。企业的治理本质上是契约的治理,契约是不完全的,可以采用正式治理和非正式治理。家文化极大地影响了企业内部的契约关系,非正式治理在家族企业中占据重要地位,关系仍然是维持商业往来和信任的基础。由于中国家文化的作用,家族企业构建以血缘关系为基础的商业网络,这种家族治理模式是一种典型的非正式契约治理结构。基于宗族观念上的以道德标准和声誉为特征的非正式制度安排是我国家族企业治理的核心。外部的强制性措施在维持契约的稳定性和有效执行方面作用有限,人们很难把合作推广到信任以外的人。家族企业通过简单的控制结构简化委托代理关系和采用非正式治理极大地节约了交易成本,而交易成本是组织建立的决定因素。本文证明在中国家文化和制度背景下,与正式契约治理结构或其他家族治理模式相比,家族控制模式能更有效地降低代理成本节约交易费用,从而家族企业是一种有效的治理模式。

关键词：文化家族企业治理

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高中历史教学中运用史料培养学生历史思维能力的教学探索

高中历史教学中运用史料培养学生历史思维能力的教学探索

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作者：帅文广西师范大学

学位级别：硕士

高中历史教育的主要任务是历史学科能力的培养,其关键是提高学生历史思维能力,那么,如何促进学生历史思维能力的发展呢?这一问题的解决关系到高中历史教育质量的提高,是目前国内高中历史教育面临的重大课题。因此,本文拟从史料运用与高... 详细信息

高中历史教育的主要任务是历史学科能力的培养,其关键是提高学生历史思维能力,那么,如何促进学生历史思维能力的发展呢?这一问题的解决关系到高中历史教育质量的提高,是目前国内高中历史教育面临的重大课题。因此,本文拟从史料运用与高中生历史思维能力的培养着手,从三大方面论述它们之间的联系。第一部分是全文的理论基础,它主要从两个方面进行说明,第一,高中历史教学中为什么要运用史料培养学生历史思维能力?这是因为,以史料为载体培养高中生的历史思维能力顺应了高中历史课程改革的要求,充分体现了历史学科的特点,能够促进学生历史学科能力的发展,目标是高中生的全面发展。第二,阐释了历史思维和历史思维能力的概念。指出历史思维能力是以马克思主义立场作为出发点,运用史料来考察人类社会发展的现象与本质,解决社会历史问题的一种素养。第二部分是本文的重点,主要从实践层面探索和总结出一些有效途径与方法来培养学生的历史思维能力。首先从历史逻辑思维能力的培养着眼,概括了什么是历史逻辑思维,总结了运用史料培养历史逻辑思维常用的一些方法。然后说明运用史料特别是图像史料,更能够培养学生的历史形象思维能力,例如运用图像史料,可以激发学生历史学习的浓厚兴趣：运用图像史料,通过问题情境的营造,可以激发学生思维;运用图像史料,通过历史场景的真实展现,可以引发学生的思维;运用图像史料,可以引发学生的感知、想象、联想,以此发展学生历史形象思维。再后阐述运用史料培养学生创造性思维的问题。最后论述了运用史料如何培养学生的历史思维品质,即运用史料,揭示历史的本质,培养学生思维的深刻性;运用迁移的方法,增强学生思维的灵活性;选择矛盾性的史料,培养学生思维的批判性;组合不同观点的史料,培养学生思维的广阔性。通过这些方法,高中生的历史逻辑思维、历史形象思维和创造性思维能够得到有效培养,学生思维的深刻性、灵活性、批判性和广阔性得以提高、增强。第三部分在理论和实践的基础上,总结在培养学生历史思维的过程中关于史料选取的一些原则,包括典型性原则、多元化原则和真实性原则等以及在高中历史教学中运用史料培养学生历史思维应注意的几个问题。文章的目的是使高中生在历史学习时能够灵活地运用史料以及一些具体的历史思维方法来解决社会历史问题,以此提高学生历史学科素养,使学生逐渐形成正确的历史意识。当然,完成这项工作主要得益于导师的指导与帮助,以自己的教学实践为基础,部分参考了其他教师的经验和教学案例,并对此作出分析、论证。在此过程中,有一些认识和理解不一定成熟,但是希望能够进行一些尝试,为高中历史教学尽一点绵薄之力。

关键词：历史教学中运用史料培养思维能力

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