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副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpP2的原核表达与鉴定

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畜牧与兽医 2015年第10期47卷 79-82页

作者：陶政曾文斌刘悦欣左明开幸文定白帅州王萍江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045

为获得副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白中的穿孔素前体蛋白P2(Omp P2)基因的表达产物,利用特异性引物以HPS血清13型江西分离株扩增omp P2基因,并将其克隆到p MD18-T载体中进行序列测定和分析。结果表明:omp P2全基因含一个1 092 bp的开放阅读... 详细信息

为获得副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白中的穿孔素前体蛋白P2(Omp P2)基因的表达产物,利用特异性引物以HPS血清13型江西分离株扩增omp P2基因,并将其克隆到p MD18-T载体中进行序列测定和分析。结果表明:omp P2全基因含一个1 092 bp的开放阅读框,编码一个含363个氨基酸的蛋白,与所报道的HPS omp P2基因(登录号:HM172029.1)的同源性为100%。再将其亚克隆于原核表达载体p ET-32a(+)中构建重组表达质粒p ET-32a(+)-omp P2。后转化至受体菌大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导。经SDS-PAGE检测,表达的重组蛋白分子质量与预期的58 ku一致。Western blot分析表明,表达产物与HPS阳性血清能发生反应,显示表达产物具有良好的反应活性。

关键词：副猪嗜血杆菌 OmpP2 原核表达鉴定

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猪源停乳链球菌类马亚种的分离与鉴定

畜牧与兽医 2016年第2期48卷 106-109页

作者：幸文定曾文斌刘悦欣左明开白帅州陶政王萍江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045

从江西省吉安市某规模化养猪场发病仔猪关节液中分离得到1株革兰阳性链球菌,对其进行菌落形态观察、生化鉴定以及16S rRNA序列分子测序鉴定,并构建系统发育树;对分离菌进行药敏试验和健康小鼠的人工感染试验。结果根据分离菌的形态特征... 详细信息

从江西省吉安市某规模化养猪场发病仔猪关节液中分离得到1株革兰阳性链球菌,对其进行菌落形态观察、生化鉴定以及16S rRNA序列分子测序鉴定,并构建系统发育树;对分离菌进行药敏试验和健康小鼠的人工感染试验。结果根据分离菌的形态特征、理化特性,结合16S rRNA序列测定与系统发育分析结果,判定为链球菌属的停乳链球菌类马亚种(Streptococcus dysgalactiae ***),并命名为JXJASD-1株。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对阿莫西林、头孢拉定、利福平表现较高的敏感性,对强力霉素、青霉素G中度敏感,而对庆大霉素、卡那霉素、四环素、红霉素、复方新诺明、磺胺异噁唑表现出耐药性;致病性试验结果表明,分离菌株对小鼠有强致病性。本结果将对江西省仔猪停乳链球菌类马亚种病的防治提供指导。

关键词：停乳链球菌类马亚种分离鉴定致病性

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副猪嗜血杆菌病的诊断

畜牧与兽医 2015年第11期47卷 95-97页

作者：白帅州曾文斌刘悦欣左明开幸文定陶政王萍江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045

从江西省抚州市某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰阴性长丝状菌,经细菌生化鉴定、PCR检测鉴定为副猪嗜血杆菌。使用KRG方法对其进行血清分型鉴定,该株副猪嗜血杆菌的血清型为13型。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对氨苄西林、... 详细信息

从江西省抚州市某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰阴性长丝状菌,经细菌生化鉴定、PCR检测鉴定为副猪嗜血杆菌。使用KRG方法对其进行血清分型鉴定,该株副猪嗜血杆菌的血清型为13型。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对氨苄西林、头孢类、苯唑西林、氯霉素、阿莫西林表现较高的敏感性。对强力霉素、青霉素G中度敏感,而对磺胺类、链霉素、庆大霉素表现出耐药性;致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为JXFZHP01株。本结果为江西副猪嗜血杆菌病的防治提供了理论依据。

关键词：副猪嗜血杆菌分离鉴定血清型药敏试验

猪源产肠毒素大肠杆菌三重PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医杂志 2016年第4期52卷 102-104页

作者：陶政曾文斌刘悦欣左明开幸文定白帅州张学良王萍江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045 南昌市动物疫病预防控制中心江西南昌330008

为建立一种简单、快速、灵敏、准确的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)检测方法,根据产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88)和毒素(STa和LT)基因分别设计合成了1对引物,对K88、STa和LT基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、STa和LT的三重PCR方法。该方法对K8... 详细信息

为建立一种简单、快速、灵敏、准确的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)检测方法,根据产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88)和毒素(STa和LT)基因分别设计合成了1对引物,对K88、STa和LT基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、STa和LT的三重PCR方法。该方法对K88、STa和LT基因的扩增产物分别为499 bp,190 bp和373 bp;此外,该方法具有良好的灵敏性和特异性。本实验建立的三重PCR方法为致幼畜腹泻ETEC的检测提供了快速准确方法。用所建立的三重PCR方法对实验室从临床腹泻样品中分离的120株大肠杆菌进行检测,结果 9株为K88/LT/STa阳性,14株为K88/LT阳性,21株K88/STa阳性,13株LT/STa阳性,8株K88阳性,2株LT阳性,12株STa阳性。

关键词：产肠毒素大肠杆菌三重PCR K88菌毛 STa毒素 LT毒素

猪蓝耳病病毒、猪链球菌及副猪嗜血杆菌混合感染的诊治

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畜牧与兽医 2016年第6期48卷 146-147页

作者：左明开曾文斌刘悦欣幸文定陶政白帅州黎家祥王萍江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045

南昌市某规模化猪场,共饲养母猪200头,哺乳仔猪925头,保育猪572头,育肥猪518头.2015年4月初,场内保育猪群开始发病,约半个月后病情蔓延至哺乳仔猪群.半个月内有近100头保育猪发病,死亡61头,近150头哺乳仔猪发病,死亡90头.仔猪发病率在1... 详细信息

南昌市某规模化猪场,共饲养母猪200头,哺乳仔猪925头,保育猪572头,育肥猪518头.2015年4月初,场内保育猪群开始发病,约半个月后病情蔓延至哺乳仔猪群.半个月内有近100头保育猪发病,死亡61头,近150头哺乳仔猪发病,死亡90头.仔猪发病率在16％以上,病死率达60％以上.发病期间有10头母猪流产.

关键词：副猪嗜血杆菌蓝耳病病毒混合感染猪链球菌哺乳仔猪诊治母猪流产规模化猪场

2012～2014年江西地区副猪嗜血杆菌分离株ERIC-PCR指纹图谱分析

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畜牧与兽医 2015年第6期47卷 36-40页

作者：曾文斌刘悦欣熊亚坤左明开幸文定王萍江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045 九江市畜牧兽医局江西九江332000

在对15种副猪嗜血杆菌血清型参考株鉴定获得15种不同ERIC-PCR指纹的基础上,对2012 - 2014年分离自江西地区41株副猪嗜血杆菌临床分离菌株进行指纹鉴定.结果表明,41株副猪嗜血杆菌产生20种不同的指纹图谱,相同血清型的菌株表现出不同的... 详细信息

在对15种副猪嗜血杆菌血清型参考株鉴定获得15种不同ERIC-PCR指纹的基础上,对2012 - 2014年分离自江西地区41株副猪嗜血杆菌临床分离菌株进行指纹鉴定.结果表明,41株副猪嗜血杆菌产生20种不同的指纹图谱,相同血清型的菌株表现出不同的指纹图谱,无法进行血清分型的副猪嗜血杆菌应用该方法可得到充分区分.该方法证实副猪嗜血杆菌ERIC-PCR指纹图谱存在丰富的多样性,可适用于副猪嗜血杆菌的快速基因分型及分子流行病学调查.

关键词：副猪嗜血杆菌 ERIC—PCR 指纹图谱基因分型

副猪嗜血杆菌OmpP2基因的克隆及生物学信息分析

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动物医学进展 2015年第5期36卷 19-24页

作者：陶政曾文斌刘悦欣左明开幸文定白帅州王萍江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045

为了研究副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpP2基因的结构特征及编码蛋白的功能,根据GenBank中HPS OmpP2基因的DNA序列设计引物,以HPS血清13型江西分离株的基因组为DNA模板,利用PCR扩增OmpP2基因,并将其克隆到pMD18-T载体,进行测序及生物信息学分... 详细信息

为了研究副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpP2基因的结构特征及编码蛋白的功能,根据GenBank中HPS OmpP2基因的DNA序列设计引物,以HPS血清13型江西分离株的基因组为DNA模板,利用PCR扩增OmpP2基因,并将其克隆到pMD18-T载体,进行测序及生物信息学分析。结果表明,此序列编码364个氨基酸,与GenBank上登录的OmpP2序列核苷酸同源性为98.7%~100%,其中与湖北F641株的同源性最高,达到100%;蛋白质的分子理论值为39.14ku,理论等电点为9.14;第1位~第20位氨基酸残基组成信号肽,属于分泌型蛋白;所编码的蛋白属于亲水性蛋白,二级结构以无规则卷曲为主。研究获得了HPS OmpP2基因,为今后研究此基因的生物学功能奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌 OmpP2基因克隆生物学信息分析

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一起猪链球菌病的临床分离鉴定及诊治

养猪 2015年第1期 92-93页

作者：幸文定曾文斌刘悦欣左明开王萍江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045

猪链球菌病是由感染溶血性链球菌引起的,此病发病急、病程短、死亡率高,各种年龄和品种的猪都可以发病,临床上常表现为猪急性败血症、脑膜炎、肺炎、淋巴结脓肿、慢性关节炎及心内膜炎等,已成为养猪生产中的常见病和多发病,对养猪业危... 详细信息

猪链球菌病是由感染溶血性链球菌引起的,此病发病急、病程短、死亡率高,各种年龄和品种的猪都可以发病,临床上常表现为猪急性败血症、脑膜炎、肺炎、淋巴结脓肿、慢性关节炎及心内膜炎等,已成为养猪生产中的常见病和多发病,对养猪业危害很大。

关键词：猪链球菌病自繁自养猪场患病猪急性败血症慢性关节炎养猪业关节肿大心内膜炎药敏试验溶血性链球菌

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急性死亡猪中猪丹毒杆菌的分离鉴定

中国畜牧兽医 2015年第3期42卷 752-756页

作者：曾文斌刘悦欣王萍幸文定左明开陶政白帅州江西农业大学动物科学技术学院南昌330045

本试验从江西省南昌市某规模化猪场送检的2份疑似猪丹毒杆菌引起的急性死亡猪组织中分离出2株可疑菌株,经细菌分离培养、染色镜检、生化试验等实验室诊断,进一步以猪丹毒杆菌16SrRNA的特异性引物进行PCR鉴定,确定2株分离菌为猪丹毒杆菌... 详细信息

本试验从江西省南昌市某规模化猪场送检的2份疑似猪丹毒杆菌引起的急性死亡猪组织中分离出2株可疑菌株,经细菌分离培养、染色镜检、生化试验等实验室诊断,进一步以猪丹毒杆菌16SrRNA的特异性引物进行PCR鉴定,确定2株分离菌为猪丹毒杆菌。然后进行动物致病性试验及药敏试验,并对该厂常用的消毒药进行最小抑菌浓度(MIC)的测定。结果表明,1×108 CFU的剂量可致死小白鼠;分离菌对β-内酰胺类抗菌药高度敏感,对多数抗菌药耐药;该厂常用消毒药的抑菌作用已明显下降。本试验结果对临床防制猪丹毒具有参考意义。

关键词：猪丹毒杆菌分离鉴定药敏试验