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幽门螺杆菌NCTC11637 cagT基因的克隆及序列分析

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世界华人消化杂志 2007年第12期15卷 1433-1436页

作者：崔蕾蕾邵世和江苏大学医学技术学院病原学及病原学检验系江苏省镇江市212013

目的:克隆幽门螺杆菌(H pylori)NCTC 11637 cag T(HP0532)的编码基因,并分析其核苷酸序列.方法:应用PCR技术从H pylori基因组DNA中扩增cag T编码基因片段,克隆至pGEM-T载体后,再将其定向插入pQE30载体中,双酶切鉴定筛选阳性克隆,并进行... 详细信息

目的:克隆幽门螺杆菌(H pylori)NCTC 11637 cag T(HP0532)的编码基因,并分析其核苷酸序列.方法:应用PCR技术从H pylori基因组DNA中扩增cag T编码基因片段,克隆至pGEM-T载体后,再将其定向插入pQE30载体中,双酶切鉴定筛选阳性克隆,并进行序列分析.结果:NCTC 11637 cag T基因全长843 bp(GenBank登录号为EF114758),编码280个氨基酸,与GenBank公布的其他H pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为97%-99%.结论:成功克隆了cag T基因,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.

关键词：幽门螺杆菌 cagT 克隆测序

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孟安琪教授治疗月经后期的经验总结

孟安琪教授治疗月经后期的经验总结

作者：崔蕾蕾辽宁中医药大学

学位级别：硕士

月经后期是妇科临床常见、多发病,为了找到行之有效的治疗方案,近年来随着社会经济的发展,生活节奏的加快,罹患本病的人越来越多,治疗难度较大,并且本病如果继续发展有可能会导致闭经,给患者心理和经济上都带来了较大的负担。为了找到... 详细信息

月经后期是妇科临床常见、多发病,为了找到行之有效的治疗方案,近年来随着社会经济的发展,生活节奏的加快,罹患本病的人越来越多,治疗难度较大,并且本病如果继续发展有可能会导致闭经,给患者心理和经济上都带来了较大的负担。为了找到行之有效的治疗方案,近代医家纷纷针对其病因病机及辨证分型做了进一步地论述,治疗方法除了内服中药外,尚有耳穴压豆、针灸、推拿等外治法,但以中药内服法为主的疗法较其他方法效果好,在治疗本病上有着独特的优势。导师孟安琪教授总结前人对月经后期的认识,结合其多年的临床经验,博采众家之长,针对目前临床该病的常见证型,认为该病的主要病机为冲任不足或受阻,导致血海不能按时满溢,灵活运用中医辨证施治的理论精髓,提倡辨别虚实,分型而治,主张分为肾虚血亏型和肝郁气滞型两型,并相应予以补肾养血调经和疏肝行气的中医药治疗,疗效显著,充分体现了中医辨证施治的灵活性和优越性。此外,导师也在治疗的过程中,注重饮食搭配,配合精神调养及日常防护,从而达到增强患者的体质,调整好患者的心态,最终取得事半功倍的奇效。

关键词：月经后期经验辨证论治中医药疗法

幽门螺杆菌cagT基因的克隆表达及重组蛋白对诱导SGC-7901细胞炎症因子表达和细胞增殖的影响

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幽门螺杆菌cagT基因的克隆表达及重组蛋白对诱导SGC-7901细胞炎症...

作者：崔蕾蕾江苏大学

学位级别：硕士

目的:探讨cagT基因在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)cag致病岛(cag pathogenicity island,cag PAI)编码的Ⅳ型分泌系统(typeⅣsecretion system,TFSS)装置中的作用;并通过与胃癌细胞相互作用,研究其重组蛋白对胃癌细胞分泌炎症因子的能力和增殖的影响,为进一步阐明***的致病机制奠定基础。方法:根据GenBank收录的*** 22695全基因组序列,利用生物学软件Primer Premier5.0设计扩增cagT基因的引物,并引入限制性核酸内切酶酶切位点;应用PCR技术从*** NCTC 11637基因组DNA中扩增cagT编码基因片段后,克隆至pGEM-T载体,转化大肠埃希菌(Escherichia coli,***)DH5α,双酶切鉴定筛选阳性克隆,进行序列测定。应用生物信息学技术,对cagT基因编码的氨基酸序列与已知的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,***)TFSS结构基因virB7进行同源性比对,并对其编码的蛋白质做理化特性的预测分析。再将其定向插入原核表达载体pQE30中,转化至表达宿主菌*** M15,通过氨苄青霉素抗性筛选和双酶切鉴定阳性克隆。IPTG诱导其表达,表达的蛋白经Western blot鉴定,并以Ni-NTA树脂进行纯化。纯化后的重组蛋白免疫家兔,制备抗CagT多克隆抗体,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)检测血清抗体效价。重组蛋白与SGC-7901细胞作用一定时间,提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测IL-8 mRNA的表达;并用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazoly tetrazolium,MTT)法检测蛋白对细胞增殖的影响。结果: *** NCTC 11637 cagT基因全长843bp(GenBank登录号为EF114758),编码280个氨基酸,与***其它菌株基因序列的核苷酸同源性为96%～99%;与***的VirB7具有同源性;DNAStar软件预测其编码的蛋白质的相对分子量为32.33kDa,具有较强的免疫原性。 2.成功构建pQE30-cagT原核表达重组质粒,确定IPTG终浓度0.8mmol/L,温度30℃,诱导时间4h为最佳诱导条件,Western blot检测结果显示该重组蛋白可与抗His标签抗体结合反应,经Ni-NTA纯化后可获得纯度约为98%的CagT重组蛋白,相对分子质量(Mr)约为32kDa,与预测结果一致。CagT重组蛋白免疫家兔,获得抗CagT多克隆抗体,其效价为1:1.6×10。 3.终浓度10μg/mL的CagT重组蛋白作用于SGC-7901细胞4h后,可扩增出IL-8片段。 4.不同浓度的CagT重组蛋白与SGC-7901细胞作用6、24及48h后,细胞增殖的程度随着CagT重组蛋白浓度的增加和作用时间的延长而逐渐降低。结论: 1.成功克隆了cagT基因,其与已知的***的TFSS结构基因virB7具有同源性,是*** cag PAI编码的TFSS的结构基因之一。 2.成功构建了原核表达载体,获得了CagT重组蛋白,并制备了兔源性抗CagT多克隆抗体。 ***重组蛋白可诱导SGC-7901细胞表达IL-8 mRNA。 ***重组蛋白对SGC-7901细胞的增殖有一定抑制作用,其抑制作用随着蛋白浓度增加和作用时间延长而逐渐增强。

关键词：幽门螺杆菌 cagT 克隆表达细胞因子增殖

永嘉县委党校教育研训大楼电气设计与节能研究

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永嘉县委党校教育研训大楼电气设计与节能研究

作者：崔蕾蕾杭州电子科技大学

学位级别：硕士

随着电气自动化技术的快速发展，人们对供电可靠性和用电经济指标要求不断提高。现代社会的信息化和网络化都是建立在电气化的基础之上，并且供配电设计直接影响建筑的基本建设投资和运行费用。因此，做好供配电设计是保证人们正常工作... 详细信息

随着电气自动化技术的快速发展，人们对供电可靠性和用电经济指标要求不断提高。现代社会的信息化和网络化都是建立在电气化的基础之上，并且供配电设计直接影响建筑的基本建设投资和运行费用。因此，做好供配电设计是保证人们正常工作、学习、生活的重要前提。另外，随着人们对智能化的追求，建筑智能化技术得到人们普遍的认可，它能通过电子信息网络技术对建筑中的各种用能设备进行监控，对资源信息进行整合化管理，为客户提供服务信息等。这种管理和服务模式使得人们的工作效率得到大大提高。本文课题来源于温州永嘉县委党校教育研训大楼10KV供配电工程，对建筑电气中的设备选择、用电负荷、用电节能等内容作出了相应分析。设计旨在根据负荷特性，设计一个安全、可靠、经济、环保的供配电系统。关于节能问题，文章主要做出以下几点研究工作：首先，针对本工程照明能耗实际情况，提出智能照明控制方案。通过比较几种智能调光方式后，对DALI协议在智能照明控制中的应用进行介绍，并对基于DALI的数据可寻址镇流器硬件电路进行研究，对其EMI滤波电路、功率因数校正电路、调光芯片、微控制芯片等硬件电路作了详细介绍。通过对电路及电平转换协议的分析，进行了智能控制系统中主要元器件的选择和设计，其中控制器芯片选用PI16F877，调光芯片选择IR21592，接着设计出DALI主控单元并制作出相应的电路模块，对调光原理和电路的连接进行了详细介绍。最后构建了智能照明系统的三层网络结构，简单介绍了网络的控制原理和通信原理。其次，提出将遗传算法用于DALI智能控制系统中。利用遗传算法使自然光和人工照明相融合，调节室内各灯具的亮度，以达到室内工作面照度要求，同时能节约能源。自然光通过窗户投射进来到各个工作面，因为各个时段阳光强弱不同和离窗户的远近不同从而导致各个工作面的自然光照度有所不同，这就导致各个桌面所需要的人工补光量也有差别。同时，各盏灯具和各个工作平面是多点对多点的影响关系，采用遗传算法可以实时调节灯具亮度来达到设定照度值。最后，通过MATLAB仿真平台，验证以上方案的可行性和有效性，并通过对调光结果的能耗分析和电费分析，充分说明本文设计的智能照明系统的优越性。

关键词：供配电设计智能照明 DALI电子镇流器 PIC16F877 遗传算法节能

幽门螺杆菌cag PAI编码的Ⅳ型分泌系统

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微生物学报 2007年第4期47卷 743-745页

作者：崔蕾蕾邵世和江苏大学医学技术学院镇江212013

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)是定植于人胃部特定的病原菌,感染呈全球分布,感染率高达50%以上。现已证实它是轻度胃炎,消化性溃疡及胃癌的主要病因。Ⅰ型***菌株含有一个约40kb的特殊基因片段,即cag致病岛(cytotoxin associated... 详细信息

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)是定植于人胃部特定的病原菌,感染呈全球分布,感染率高达50%以上。现已证实它是轻度胃炎,消化性溃疡及胃癌的主要病因。Ⅰ型***菌株含有一个约40kb的特殊基因片段,即cag致病岛(cytotoxin associated gene pathogenicity island,cag PAI),该片段只出现于致病相关菌株,基因呈高密度分布并编码一个分泌转运系统称为Ⅳ型分泌系统(type Ⅳ secretion system,TFSS),通过转运相关毒素而参与***诱导上皮细胞细胞内的酪氨酸磷酸化、细胞骨架重排、基垫结构形成、活化核转录因子NF-κB、诱导促炎细胞因子白细胞介素-8的表达等,故在***的致病中起着关键作用。近年来,研究者们致力于研究Ⅳ型分泌系统的功能,但是对于这个装置是如何转运蛋白进入宿主细胞的确切机制还是知之甚少,因此,对Ⅳ型分泌系统的研究将有助于进一步明确***致病机制,并为临床诊断和治疗提供新的靶点。

关键词：幽门螺杆菌 cag PAI Ⅳ型分泌系统(TFSS)