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巴西橡胶树环锌指蛋白基因克隆及其分子特性(英文)

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植物生理与分子生物学学报 2006年第6期32卷 627-633页

作者：朱家红李辉亮屠发志田维敏彭世清中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室海口571101 中国热带农业科学院橡胶研究所热带作物栽培生理农业部重点实验室儋州571737

在先前的研究中通过抑制缩减杂交获得了一个在巴西橡胶树胶乳中特异表达的片段(HbSSH10),该片段含有“RINGfinger”或“C3HC4”保守序列。根据HbSSH10的序列信息设计引物并通过3'-RACE和5'-RACE的方法,获得了一个全长的cDNA(HbRZF)。该c... 详细信息

在先前的研究中通过抑制缩减杂交获得了一个在巴西橡胶树胶乳中特异表达的片段(HbSSH10),该片段含有“RINGfinger”或“C3HC4”保守序列。根据HbSSH10的序列信息设计引物并通过3'-RACE和5'-RACE的方法,获得了一个全长的cDNA(HbRZF)。该cDNA含有589个核苷酸,含有完整的阅读框架,编码156个氨基酸。从它推导出的氨基酸序列中含有“RINGfinger”或“C3HC4”保守区(氨基酸100￣144)。该氨基酸序列与Poncirustrifoliata、Arabidopsisthaliana和Thellungiellahalophila的环锌指蛋白的同源性分别为48%、52%和50%。Northern杂交分析表明HbRZF在胶乳中大量表达,在叶片中微量表达,而在根和花中几乎没有表达。茉莉酸处理可以诱导胶乳中HbRZF的表达,而乙烯对胶乳中HbRZF的表达基本上没有影响。

关键词：巴西橡胶树锌指蛋白克隆表达

以甘油为碳源发酵Pichia pastoris组成型表达人血管生成抑制素

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生物工程学报 2007年第5期23卷 902-906页

作者：屠发志符策奕张添元罗进贤张爱联中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室海口5711012 海南省药品检验所海口570216 中山大学基因工程教育部重点实验室生物化学系广州510275

在Pichia pastoris组成型表达外源蛋白中碳源起着重要的调控作用。分别以葡萄糖、甘油、甲醇和油酸为碳源研究它们对摇瓶发酵GS115(pGAP9K-AS)表达hAS的影响。结果如下:油酸(163mg/L),甘油(83mg/L),葡萄糖(76mg/L),甲醇(57mg/L)。根据... 详细信息

在Pichia pastoris组成型表达外源蛋白中碳源起着重要的调控作用。分别以葡萄糖、甘油、甲醇和油酸为碳源研究它们对摇瓶发酵GS115(pGAP9K-AS)表达hAS的影响。结果如下:油酸(163mg/L),甘油(83mg/L),葡萄糖(76mg/L),甲醇(57mg/L)。根据以上结果,以甘油为碳源在30L生物反应器中进行GS115(pGAP9K-AS)工程菌的高密度发酵。48h后测得hAS的产量为169mg/L。产物hAS具有免疫活性并能抑制bFGF诱导的CAM血管生成和实验小鼠黑色素瘤的生长。治疗12d后,抑瘤率达到90%,统计学分析结果表明hAS治疗组和PBS治疗组小鼠的肿瘤体积呈现显著性差异(P<0.01)。

关键词：血管生成抑制素组成型表达 Pichia pastoris 甘油

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植物表观遗传与DNA甲基化

生物技术通讯 2007年第1期18卷 155-158页

作者：屠发志彭世清中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室海南海口571101

表观遗传在植物生长发育过程中起着极其重要的作用。甲基化是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式,是调节基因功能的重要手段。介绍了植物体中胞嘧啶甲基化现象,RNA指导的DNA甲基化的信号分子、作用机制,以及与RNA介导的基因沉默机制... 详细信息

表观遗传在植物生长发育过程中起着极其重要的作用。甲基化是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式,是调节基因功能的重要手段。介绍了植物体中胞嘧啶甲基化现象,RNA指导的DNA甲基化的信号分子、作用机制,以及与RNA介导的基因沉默机制之间的区别和RNA对转座子的表观控制。

关键词：表观遗传 DNA甲基化胞嘧啶甲基转移酶基因沉默

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用pGAP启动子在***中组成型表达cbhⅡ基因

工业微生物 2010年第4期40卷 29-33页

作者：易国辉屠发志张爱联张添元屈直罗进贤中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海口571101 海南大学农学院中山大学基因工程教育部重点实验室/生物化学系广州510275

用套叠PCR法扩增木霉的cbh Ⅱ基因,以EcoR I和Not I双酶切将其克隆进***表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP-cbh Ⅱ。通过电转法将其cbhⅡ基因重组于***基因组,筛选高G418抗性的克隆作为工程菌。用葡萄糖作为碳源摇瓶发酵3 d,分泌的... 详细信息

用套叠PCR法扩增木霉的cbh Ⅱ基因,以EcoR I和Not I双酶切将其克隆进***表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP-cbh Ⅱ。通过电转法将其cbhⅡ基因重组于***基因组,筛选高G418抗性的克隆作为工程菌。用葡萄糖作为碳源摇瓶发酵3 d,分泌的重组蛋白CBHⅡ达到50 mg/L。用CMC酶活法测定发酵液中的CMC酶活力为2.05 U/mL。

关键词：纤维素二糖水解酶毕赤酵母基因表达酶活力

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高密度发酵***组成型表达纤维素二糖水解酶

热带作物学报 2010年第8期31卷 1293-1297页

作者：崔艳艳易国辉屠发志张添元罗进贤张爱联中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海南海口571101 海南大学农学院．海南儋州571737 中山大学基因工程教育部重点实验室／生物化学系广东广州510275

用PCR法扩增里氏木霉cbhⅡ基因,并将其克隆到***表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP9K-cbhⅡ。通过电转法将cbhⅡ基因整合到***的基因组中,然后筛选高G418抗性的克隆作为工程菌菌种。在生物反应器中生产CBHⅡ,将20L发酵液装入50L的发... 详细信息

用PCR法扩增里氏木霉cbhⅡ基因,并将其克隆到***表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP9K-cbhⅡ。通过电转法将cbhⅡ基因整合到***的基因组中,然后筛选高G418抗性的克隆作为工程菌菌种。在生物反应器中生产CBHⅡ,将20L发酵液装入50L的发酵罐中,在发酵过程中连续64h补加甘油-PTM4,放罐时生物量为A600=170,CBHⅡ的表达量为75mg/L。其表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。

关键词：纤维素二糖水解酶毕赤酵母基因表达纤维素酶活力

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高密度发酵***诱导表达葡聚糖外切酶

生物技术 2010年第6期20卷 64-66页

作者：杨穗珊易国辉屠发志张添元罗进贤张爱联中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海南海口571101 海南大学农学院海南海口570228 中山大学基因工程教育部重点实验室/生物化学系广东广州510275

目的:应用***的pAOX1表达系统表达CBHⅡ酶。方法:PCR法扩增木霉的cbhⅡ基因。将其克隆进***表达载体pPIC9k,电转法将其cbhⅡ基因重组于***基因组,筛选高G418抗性的克隆为工程菌。重组CBHⅡ酶的生产是在50 L生物反应器中进行。连续24h补... 详细信息

目的:应用***的pAOX1表达系统表达CBHⅡ酶。方法:PCR法扩增木霉的cbhⅡ基因。将其克隆进***表达载体pPIC9k,电转法将其cbhⅡ基因重组于***基因组,筛选高G418抗性的克隆为工程菌。重组CBHⅡ酶的生产是在50 L生物反应器中进行。连续24h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后用甲醇诱导表达64h。结果:放罐时生物量为A600=180,重组CBHⅡ产量为80mg/L。表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。结论:实现应用pAOX1表达系统在生物反应器中高密度发酵***诱导表达CBHⅡ。该研究为重组CBHⅡ的规模化生产打下基础。

关键词：葡聚糖外切酶 P.pastoris 高密度发酵

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高密度发酵***诱导表达egⅡ基因

工业微生物 2011年第2期41卷 43-46页

作者：尹慧祥易国辉屠发志张添元罗进贤张爱联中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海口571101 海南大学农学院海口570228 中山大学基因工程教育部重点实验室/生物化学系广州510275

用套叠PCR法扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)的葡聚糖内切酶Ⅱ(egⅡ)基因。扩增基因经EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后克隆进***表达载体pPIC9k,获得重组表达质粒pPIC9K-egⅡ。通过电转法将egⅡ基因重组于***基因组,筛选高G418抗性的转化子... 详细信息

用套叠PCR法扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)的葡聚糖内切酶Ⅱ(egⅡ)基因。扩增基因经EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后克隆进***表达载体pPIC9k,获得重组表达质粒pPIC9K-egⅡ。通过电转法将egⅡ基因重组于***基因组,筛选高G418抗性的转化子作为工程菌。工程菌的发酵在生物反应器中进行,在50 L的发酵罐中加入20 L发酵液。连续24 h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后以甲醇为碳源诱导egⅡ基因表达48 h。放罐时生物量为A_(600)=203,重组EGⅡ产量为90 mg/L。表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。

关键词：里氏木霉葡聚糖内切酶基因表达 P.pastoris 高密度发酵

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基于机器学习和资产特征的投资组合选择研究

系统工程理论与实践 2024年第1期44卷 338-355页

作者：李斌屠雪永武汉大学经济与管理学院武汉430072 武汉大学金融研究中心武汉430072

随着可投资资产与资产信息的爆炸式增长,投资组合选择研究面临资产和特征双重高维挑战.为此,本文提出一个基于机器学习和资产特征的投资组合选择框架,该框架借助机器学习技术的天然优势,运用高维特征直接预测投资组合权重,避开了常规的... 详细信息

随着可投资资产与资产信息的爆炸式增长,投资组合选择研究面临资产和特征双重高维挑战.为此,本文提出一个基于机器学习和资产特征的投资组合选择框架,该框架借助机器学习技术的天然优势,运用高维特征直接预测投资组合权重,避开了常规的两步投资组合管理范式中的收益预测过程,并用于中国股票市场的资产配置研究.结果显示:1)基于此框架提出的投资策略能够捕捉高维特征中的增量信息,并挖掘资产特征与投资权重之间线性与非线性关系,大幅提升了投资绩效;2)交易摩擦类特征是投资权重预测中最为重要的资产特征;3)策略在套利限制较为严重的股票上回报更高,而对宏观经济状态变化的敏感性较低;在其他经济约束下,策略表现依然稳健.本文拓展了现代投资组合理论的研究框架,促进了人工智能与量化投资领域的交叉融合发展.

关键词：投资组合选择人工智能资产特征大维资产配置量化投资

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捕捉生活画面,掌握描写技巧

作文成功之路 2024年第24期 17-19页

作者：屠志萍昆山经济技术开发区实验小学

细节描写离不开对生活的仔细观察。只有当我们真正投入生活中，用心去感受每一个瞬间，才能捕捉到那些独特而真实的细节。其次，写作技巧在细节描写中同样起着至关重要的作用，学会运用视、听、嗅、味、触等多种感官来描绘细节，让读者...

细节描写离不开对生活的仔细观察。只有当我们真正投入生活中，用心去感受每一个瞬间，才能捕捉到那些独特而真实的细节。其次，写作技巧在细节描写中同样起着至关重要的作用，学会运用视、听、嗅、味、触等多种感官来描绘细节，让读者全方位地感受到所描绘的场景，写作就会成功。通过描写不同情境中人物的动作、神态、语言等，也可以表现出人物的性格特点和情感变化。此外，修辞的运用能够让文字更加生动、形象，增强文章的表现力和感染力。

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