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融合蛋白IVT表达纯化及生物学活性检测

中国药学杂志 2013年第20期48卷 1706-1711页

作者：李招发邱涵景尹帮旗占申标华侨大学生物医学学院华侨大学分子药物教育部工程研究中心福建泉州362021

目的克隆、表达和纯化融合蛋白IVT,并检测其生物学活性。方法采用基因工程手段将具有免疫功能、抗血管生成功能和诱导肿瘤细胞凋亡功能的3个基因片段进行融合构建了融合基因IVT。将其插入pPIC9表达质粒中,转化至毕赤酵母GS115(his4),筛... 详细信息

目的克隆、表达和纯化融合蛋白IVT,并检测其生物学活性。方法采用基因工程手段将具有免疫功能、抗血管生成功能和诱导肿瘤细胞凋亡功能的3个基因片段进行融合构建了融合基因IVT。将其插入pPIC9表达质粒中,转化至毕赤酵母GS115(his4),筛选出的表达株经甲醇诱导,表达了重组融合蛋白IVT,并得以纯化。采用MTT法观察IVT对CTLL-2细胞、HUVEC和NCI-H446细胞增殖的影响;通过Transwell实验观察IVT对HUVEC迁移的影响;采用Hoechst染色检测IVT对NCIH446细胞凋亡的影响。结果 IVT能促进CTLL-2细胞增殖、抑制HUVEC和NCI-H446细胞生长、降低HUVEC细胞迁移能力以及诱导NCI-H446细胞凋亡。结论 IVT具有多种生物学活性,为开发多功能的新型融合蛋白打下了基础。

关键词：免疫抗血管生成凋亡融合蛋白IVT 增殖

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蛋白质药物口服的研究进展

生物技术通报 2011年第6期27卷 21-24页

作者：惠二京尹帮旗李招发华侨大学分子药物学研究所泉州362021 华侨大学分子药物教育部工程研究中心泉州362021

蛋白质药物口服给药系统因其给药方便、顺应性好,逐渐成为一种最有前景的给药方式。从提高蛋白质药物生物利用度入手,综述采用结构修饰、吸收促进剂、酶抑制剂、结肠定位释药、脉冲式药物给药系统和受体介导靶向载体系统等方式,均可大... 详细信息

蛋白质药物口服给药系统因其给药方便、顺应性好,逐渐成为一种最有前景的给药方式。从提高蛋白质药物生物利用度入手,综述采用结构修饰、吸收促进剂、酶抑制剂、结肠定位释药、脉冲式药物给药系统和受体介导靶向载体系统等方式,均可大大提高蛋白质药物的口服生物利用度和在胃肠道中的稳定性。

关键词：蛋白药物给药途径口服给药

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AAV在基因治疗中的靶向修饰研究进展

生物技术通报 2012年第2期28卷 33-40页

作者：尹帮旗连文昌惠二京李招发华侨大学分子药物学研究所泉州362021 华侨大学分子药物教育部工程研究中心泉州362021

安全、有效、具有靶向性的病毒载体是基因治疗药物在临床上得以应用的关键。AAV是微小病毒科的一种,它能以其低的免疫原性及广泛的宿主性对人及灵长类进行感染,并且经过改造后的AAV病毒能更有效的靶向性特定组织及肿瘤细胞。重点对AAV... 详细信息

安全、有效、具有靶向性的病毒载体是基因治疗药物在临床上得以应用的关键。AAV是微小病毒科的一种,它能以其低的免疫原性及广泛的宿主性对人及灵长类进行感染,并且经过改造后的AAV病毒能更有效的靶向性特定组织及肿瘤细胞。重点对AAV病毒载体的衣壳蛋白基因工程修饰、转录调控修饰和转录后microRNA干扰表达修饰及衣壳蛋白化学修饰靶向机理,以及改造方法进行介绍。修饰后的AAV能改善其感染引起的性免疫反应、转染效率和肿瘤靶向性。

关键词：基因治疗基因工程修饰腺相关病毒重组腺相关病毒

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基于TRAIL的肿瘤治疗策略进展

生物技术通讯 2011年第5期22卷 733-737页

作者：隋臻尹帮旗李招发华侨大学分子药物学研究所福建泉州362021 分子药物教育部工程研究中心福建泉州362021

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能选择性诱导肿瘤细胞凋亡,且对机体正常组织细胞无毒副作用,被认为是一种非常有潜力的抗癌药物。我们简要介绍TRAIL及其配体诱导细胞凋亡的机制、肿瘤细胞对TRAIL的耐受机制及其克服策略。

关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体死亡受体耐受机制肿瘤

高表达抗PD-1抗体CHO细胞株的筛选及代谢分析

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福建医科大学学报 2018年第5期52卷 320-327页

作者：梅文枫朱一平尹帮旗许晓刚方树彬福建医科大学免疫治疗研究所福州350122

目的筛选高表达抗PD-1抗体的工程细胞株和较优的基础及补料培养基,并进行代谢分析。方法分别在TPP摇管、摇瓶中通过流加培养的方式,从6株细胞株和5种商业培养基中筛选高表达抗PD-1抗体的GS-CHO细胞株和较优的基础及补料培养基。在流加... 详细信息

目的筛选高表达抗PD-1抗体的工程细胞株和较优的基础及补料培养基,并进行代谢分析。方法分别在TPP摇管、摇瓶中通过流加培养的方式,从6株细胞株和5种商业培养基中筛选高表达抗PD-1抗体的GS-CHO细胞株和较优的基础及补料培养基。在流加培养过程中,检测葡萄糖、谷氨酰胺、谷氨酸、乳酸及氨等的浓度变化。同时为分析限制性营养因素,进一步对乳酸、氨及氨基酸代谢进行分析。结果通过TPP摇管初步筛选,显示122和126两株细胞在HyCell CHO培养基中表现最好,表达量分别为1.945和1.989g/L;在摇瓶中进一步验证显示122细胞在6株细胞中的最大活细胞密度图最高,达2.21×107cells/mL,表达量>2g/L。代谢分析发现,乳酸代谢切换和谷氨酸及丙氨酸代谢相关。氨基酸分析发现,蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸等必需氨基酸可能为122细胞株生长和(或)表达限制性成分。结论筛选出高表达抗PD-1抗体的细胞株和较优培养基,同时代谢分析和氨基酸分析为后续细胞培养工艺开发及个性化培养基优化提供理性指导。

关键词： GS-CHO细胞培养基细胞计数代谢

miRNAs调控褐色脂肪细胞功能和白色脂肪细胞米色化的研究进展

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生命科学 2014年第10期26卷 1051-1056页

作者：肖婷董美娟王敏尹帮旗罗辉何凌云胡芳中南大学湘雅二医院中南大学代谢综合征研究中心中南大学糖尿病免疫学教育部重点实验室长沙410011 南京医科大学附属淮安市第一人民医院内分泌科淮安223300

褐色脂肪细胞通过其线粒体内膜解偶联蛋白(uncoupling protein 1,UCP1)的解偶联作用,将能量以热量的形式释放出来,在维持机体的能量代谢平衡中发挥了关键作用。存在于皮下脂肪组织中的某些白色脂肪细胞也能够诱导UCP1的高表达,这种现象... 详细信息

褐色脂肪细胞通过其线粒体内膜解偶联蛋白(uncoupling protein 1,UCP1)的解偶联作用,将能量以热量的形式释放出来,在维持机体的能量代谢平衡中发挥了关键作用。存在于皮下脂肪组织中的某些白色脂肪细胞也能够诱导UCP1的高表达,这种现象被称为"米色化"。miRNAs是一种小的非编码RNA,可通过直接降解mRNA或抑制其翻译来调控靶基因的表达,参与了多种生物学过程。miRNAs通过对褐色脂肪细胞分化和产热相关基因的表达调控,在褐色脂肪细胞的分化和功能维持上起了重要作用。同时,研究也发现了某些miRNAs在白色脂肪细胞的米色化中起到了重要作用。对miRNAs在褐色脂肪细胞的分化调控、功能维持以及在白色脂肪细胞米色化中的作用和机制的最新研究进展进行综述。

关键词：褐色脂肪细胞米色化 miRNAs 产热

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三种混交林造林初期土壤真菌群落结构研究

生态学报 2024年

作者：杨慧琴向涌旗吕倩尹必然汤智韧张妍陈刚赖家明范川李贤伟四川农业大学林学院长江上游森林资源保育与生态安全国家林业与草原局重点实验室&长江上游林业生态工程四川省重点实验室

土壤微生物是参与陆地生态系统生物地球化学循环过程的重要成员。造林可以显著影响土壤微生物群落结构与功能，但造林初期驱动的土壤理化因子变化对土壤微生物结构与功能的影响尚不清楚。本研究通过分析由珍稀乡土树种组成的三种新造混... 详细信息

土壤微生物是参与陆地生态系统生物地球化学循环过程的重要成员。造林可以显著影响土壤微生物群落结构与功能，但造林初期驱动的土壤理化因子变化对土壤微生物结构与功能的影响尚不清楚。本研究通过分析由珍稀乡土树种组成的三种新造混交林（BB：银杏Ginkgo biloba-桢楠Phoebe zhennan;CB：香椿Toona sinensis-红豆杉Taxus wallichiana-桢楠Phoebe zhennan;MB：鹅掌楸Liriodendron chinense-乐昌含笑Michelia chapensis-香椿Toona sinensis-玉兰Yulania denudata）表层（0—20 cm）土壤真菌群落组成、功能类群及其土壤理化因子，并以草灌化未造林地作对照（CK），研究土壤真菌群落结构和功能对不同林型造林初期的响应。结果表明：（1）不同林型土壤真菌群落丰富度、多样性指数高于CK，表现为MB>BB>CB>CK，主要受到土壤孔隙度、水解性氮的影响。（2）土壤真菌门水平优势类群在不同处理间无显著差异，其中子囊菌门占绝对优势，MB中的被孢霉门相对丰度显著高于CK(P<0.05)。与CK相比，球囊菌门与Leptodiscella相对丰度在各林型中均降低。（3）通过NMDS与Adonis分析表明，造林初期，造林土壤真菌群落结构与CK存在显著差异（P<0.01）。RDA分析表明全钾、水解性氮、土壤容重及土壤碳氮比是影响真菌群落指示种的主要土壤理化因子；被孢霉门与水解性氮、碳氮比、全氮、非毛管孔隙度、含水率均呈正相关，与全钾呈负相关。（4）真菌群落主要以腐生营养型为主，病理营养型次之；造林后腐生营养型真菌相对丰度降低，而土壤腐生菌的相对丰度在BB与MB处理中反而显著增加（P<0.05）;MB处理中动物病原菌的相对丰度显著增加（P<0.05）；真菌优势功能类群主要受到土壤pH、土壤孔隙度、土壤C/N、土壤有机质、全氮、全钾的影响。造林初期土壤真菌群落结构与功能类群发生了显著改变，阔阔混交林较针阔混交林变化更加明显，其中多种阔叶树混交林病原菌相对更高。

关键词：土壤真菌群落功能类群土壤理化性质造林初期混交林

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3种混交林造林初期土壤真菌群落结构特征

生态学报 2024年第8期44卷 3360-3371页

作者：杨慧琴向涌旗吕倩尹必然汤智韧张妍陈刚赖家明范川李贤伟四川农业大学林学院成都611130 长江上游森林资源保育与生态安全国家林业与草原局重点实验室&长江上游林业生态工程四川省重点实验室成都611130

土壤微生物是参与陆地生态系统生物地球化学循环过程的重要成员。造林可以显著影响土壤微生物群落结构与功能,但造林初期驱动的土壤理化因子变化对土壤微生物结构与功能的影响尚不清楚。通过分析由珍稀乡土树种组成的三种新造混交林(BB... 详细信息

土壤微生物是参与陆地生态系统生物地球化学循环过程的重要成员。造林可以显著影响土壤微生物群落结构与功能,但造林初期驱动的土壤理化因子变化对土壤微生物结构与功能的影响尚不清楚。通过分析由珍稀乡土树种组成的三种新造混交林(BB:银杏Ginkgo biloba⁃桢楠Phoebe zhennan;CB:香椿Toona sinensis⁃红豆杉Taxus wallichiana⁃桢楠Phoebe zhennan;MB:鹅掌楸Liriodendron chinense⁃乐昌含笑Michelia chapensis⁃香椿Toona sinensis⁃玉兰Yulania denudata)表层(0—20 cm)土壤真菌群落组成、功能类群及其土壤理化因子,并以草灌化未造林地作对照(CK),研究土壤真菌群落结构和功能对不同林型造林初期的响应。结果表明:(1)不同林型土壤真菌群落丰富度、多样性指数高于CK,表现为MB>BB>CB>CK,主要受到土壤孔隙度、水解性氮的影响。(2)土壤真菌门水平优势类群在不同处理间无显著差异,其中子囊菌门占绝对优势,MB中的被孢霉门相对丰度显著高于CK(P<0.05)。与CK相比,球囊菌门与Leptodiscella相对丰度在各林型中均降低。(3)通过非度量多维尺度(NMDS)与置换多元方差(Adonis)分析表明,造林初期,造林土壤真菌群落结构与CK存在显著差异(P<0.01)。冗余分析(RDA)分析表明全钾、水解性氮、土壤容重及土壤碳氮比是影响真菌群落指示种的主要土壤理化因子;被孢霉门与水解性氮、碳氮比、全氮、非毛管孔隙度、含水率均呈正相关,与全钾呈负相关。(4)真菌群落主要以腐生营养型为主,病理营养型次之;造林后腐生营养型真菌相对丰度降低,而土壤腐生菌的相对丰度在BB与MB处理中反而显著增加(P<0.05);MB处理中动物病原菌的相对丰度显著增加(P<0.05);真菌优势功能类群主要受到土壤pH、土壤孔隙度、土壤碳氮比(C/N)、土壤有机质、全氮、全钾的影响。造林初期土壤真菌群落结构与功能类群发生了显著改变,阔阔混交林较针阔混交林变化更加明显,其中多种阔叶树混交林病原菌相对更高。

关键词：土壤真菌群落功能类群土壤理化性质造林初期混交林

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大理苍山来源一株利用农业秸秆生产微生物蛋白(MSCP)菌株的分离、鉴定及发酵条件优化

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中国饲料 2024年第19期 26-32页

作者：陈明晖陈奕潮王召旗李蕾宋荣欢吕志华尹以瑞大理大学农学与生物科学学院云南大理671003

为筛选出利用农业秸秆高效生产微生物蛋白(MSCP)的菌株并探究其液体发酵最佳条件,达到减少饲料中豆粕蛋白使用的目的,本研究从大理苍山沧浪峰采集土壤进行分离,筛选获得一株能利用秸秆碳源生长的菌株S303。经形态学观察和26S r DNA序列... 详细信息

为筛选出利用农业秸秆高效生产微生物蛋白(MSCP)的菌株并探究其液体发酵最佳条件,达到减少饲料中豆粕蛋白使用的目的,本研究从大理苍山沧浪峰采集土壤进行分离,筛选获得一株能利用秸秆碳源生长的菌株S303。经形态学观察和26S r DNA序列分析来鉴定该菌株,并对其最适秸秆碳源、最适温度、最适pH进行测定,探究该菌在最适液体发酵条件下的微生物蛋白产量。结果表明:筛选到一株高效降解秸秆生产微生物蛋白的菌株,经鉴定为清酒假丝酵母菌株,命名为Candida sake S303。菌株S303的最适发酵碳源为玉米秸秆,最适发酵温度和pH分别为25℃和7,最适发酵周期为14 d。在最佳发酵条件下,2%接种量的微生物蛋白的干重产量为1485.91 mg/L。以上结果预示着菌株S303可以有效利用农业秸秆生产微生物蛋白,其在饲料和食品等方面具有重大应用前景。

关键词：苍山清酒假丝酵母S303 农业秸秆微生物蛋白发酵条件优化