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黄芪注射液对U937细胞增殖与凋亡的影响及相关机制的探讨

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中国当代儿科杂志 2013年第12期15卷 1128-1133页

作者：贾秀红尹宝慧李建厂滨州医学院附属医院儿科山东滨州256603

目的研究不同浓度黄芪注射液对白血病细胞株U937增殖、凋亡的影响,并初步探讨其相关分子机制。方法白血病细胞株U937随机分为实验组(分别采用不同浓度黄芪注射液62.5、125、250、500、1000μg/mL处理U937细胞)和对照组(不加黄芪注射液)... 详细信息

目的研究不同浓度黄芪注射液对白血病细胞株U937增殖、凋亡的影响,并初步探讨其相关分子机制。方法白血病细胞株U937随机分为实验组(分别采用不同浓度黄芪注射液62.5、125、250、500、1000μg/mL处理U937细胞)和对照组(不加黄芪注射液)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力,FITC-PI双染法流式细胞术检测各组细胞的凋亡,Hoechst33258染色后荧光显微镜下观察各组细胞形态学变化;U937细胞加入1000μg/mL黄芪注射液后0 h、12 h、24 h、48 h,采用RT-PCR法检测c-myc、p27 mRNA的表达。结果与对照组相比,不同浓度黄芪注射液均能抑制U937细胞增殖,差异均具有统计学意义(P<0.05);不同浓度黄芪注射液均能诱导U937细胞凋亡,较对照组显著增多(P<0.05),黄芪注射液浓度为1000μg/mL时凋亡率可达(63±4)%;黄芪注射液作用于U937细胞,随时间延长,c-myc mRNA表达逐渐下降,p27 mRNA表达逐渐增强,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论黄芪注射液体外可有效抑制白血病细胞株U937增殖,并诱导其凋亡,其相关分子机制可能与下调c-myc基因和上调p27基因表达有关。

关键词：黄芪注射液白血病细胞增殖细胞凋亡白血病细胞株

靶向RNA干扰H0XA7对白血病细胞株U973增殖、凋亡及多药耐药影响的研究

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靶向RNA干扰H0XA7对白血病细胞株U973增殖、凋亡及多药耐药影响的...

作者：尹宝慧滨州医学院

学位级别：硕士

目的：筛选高效沉默同源盒基因A7 (homeobox gene, HOXA7)的小干扰RNA (small interfere RNA, siRNA),构建特异性pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7表达载体,运用RNA干扰技术沉默H0XA7基因,研究抑制HOXA7表达对白血病细胞株U937增殖、凋亡及多药耐药的影响,为白血病基因治疗及逆转多药耐药奠定实验基础。方法：1.根据HOXA7基因序列的不同位点,靶向设计三对siRNA,转染肺腺癌细胞株LETP-a-2, Western blot、RT-PCR法检测每对siRNA对HOXA7表达的抑制作用,筛选出高效沉默HOXA7的siRNA。2.设计并构建特异性沉默HOXA7的表达载体pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7,采用酶切电泳法、测序法进行重组质粒载体鉴定;载体转染U937细胞再进行MTT法、流式细胞术检测沉默HOXA7后U937细胞增殖、凋亡的变化。3. pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7载体转染U937细胞,G418进行筛选,获得稳定沉默HOXA7的U937细胞株,RT-PCR、Western blot法检测HOXA7在基因及蛋白水平的表达;MTT法、流式细胞术分别检测沉默HOXA7后U937细胞对化疗药物阿糖胞苷(Ara-C)、高三尖杉酯碱(HHT)、甲氨蝶呤(MTX)敏感性的变化。结果：1.筛选出高效沉默HOXA7的siRNA2序列,该siRNA2在基因和蛋白水平对HOXA7的抑制率为(57.344±4.743)%、(52.219±0.550)%,均显著高于siRNA1、 siRNA3组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.成功构建靶向HOXA7的特异性表达载体pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7,酶切及测序证实有效序列插入重组质粒载体;pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7载体转染U937细胞,72h细胞增殖抑制率为(52.617±9.292)%,48h细胞凋亡率为(24.677±4.161)%,与对照组相比均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。3. pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7载体稳定转染U937细胞后,HOXA7在mRNA及蛋白水平的相对表达量分别为(23.910±1.662)%和(25.980±1.651)%,均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Ara-C、HHT对U937细胞的半数抑制浓度分别低于对照组3.5倍和8.5倍,细胞的凋亡率达(70.101±4.925)%、(78.636±5.993)%,与对照组相比,有统计学差异(P<0.05);RNAi+MTX组细胞凋亡率及增殖抑制率均高于RNAi组或MTX组,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论：1.筛选出高效沉默HOXA7基因的siRNA2,为后续实验奠定基础;2.成功构建靶向沉默HOXA7的特异性pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7表达载体,该载体能有效抑制U937细胞增殖也能促进凋亡;3. pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7载体能高效抑制HOXA7表达,并且能提高U937细胞对Ara-C、HHT、MTX的敏感性,有望逆转白血病多药耐药。

关键词： HOXA7 白血病 U937细胞药物 RNA干扰

RNA干扰HOXA7联合甲氨蝶呤对U937细胞增殖、凋亡的影响

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实用医学杂志 2013年第20期29卷 3285-3288页

作者：贾秀红尹宝慧李建厂山东省滨州医学院附属医院儿科 256603

目的:研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制HOXA7表达联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)对白血病U937细胞增殖、凋亡的影响。方法:将靶向HOXA7特异性表达载体(pGPU6/GFP/NeoshHOXA7)转染U937细胞,RT-PCR和Western blot法鉴定其对HOXA7表达的抑制作用。实验分5组:空白对照组、阴性对照组、RNAi组、MTX组、RNAi+MTX组,MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖抑制和凋亡情况。结果:RNAi组HOXA7在mRNA和蛋白水平相对表达量分别为(23.910±1.662)%、(23.980±1.651)%,均显著低于对照组(P<0.05);RNAi+MTX组细胞增殖抑制率明显高于RNAi组和MTX组(P<0.05);RNAi+MTX组细胞凋亡率为(32.941±2.565)%,明显高于RNAi组和MTX组(P<0.05)。结论:RNAi抑制HOXA7表达能增强MTX对U937细胞增殖抑制、凋亡诱导作用,RNAi抑制HOXA7联合MTX有望成为白血病治疗的新方法。

关键词：基因,同源盒甲氨蝶呤 U937细胞

靶向RNA干扰HOXA7对U937细胞增殖及凋亡的影响

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肿瘤防治研究 2014年第6期41卷 573-577页

作者：尹宝慧贾秀红李建厂山东省滨州医学院附属医院儿科山东滨州256603

目的运用RNA干扰技术抑制HOXA7表达,研究其对白血病细胞株U937增殖、凋亡的影响,为白血病基因治疗寻找新靶点。方法实验分3组:实验组、空白对照组、阴性对照组。构建靶向HOXA7特异性真核表达载体及阴性对照载体并转染U937细胞,利用RT-PC... 详细信息

目的运用RNA干扰技术抑制HOXA7表达,研究其对白血病细胞株U937增殖、凋亡的影响,为白血病基因治疗寻找新靶点。方法实验分3组:实验组、空白对照组、阴性对照组。构建靶向HOXA7特异性真核表达载体及阴性对照载体并转染U937细胞,利用RT-PCR和Western blot法分别检测各组细胞中HOXA7 mRNA和蛋白水平的表达情况;MTT法检测转染24、48、72 h后各组细胞增殖能力;流式细胞术检测转染48 h后各组细胞凋亡情况。结果实验组HOXA7表达明显受抑制,在mRNA和蛋白水平抑制率分别为:(47.314±7.394)%和(52.371±9.258)%;MTT结果显示:实验组24、48、72 h细胞增殖抑制率分别为(15.062±5.086)%、(30.052±4.016)%、(52.617±9.292)%,与同时间点空白对照组和阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),且呈时间依赖性;流式结果显示:实验组细胞凋亡率为(24.677±4.161)%,明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论靶向HOXA7特异性真核表达载体抑制HOXA7表达后,能有效抑制U937细胞增殖并促进其凋亡,HOXA7有望成为白血病基因治疗的新靶点。

关键词：基因同源盒细胞增殖细胞凋亡

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数控车床在型钢轧辊孔型加工中的应用

山西冶金 2022年第2期45卷 278-279,284页

作者：尹宝慧秦皇岛市国阳钢铁有限公司河北秦皇岛066000

根据型钢轧辊的结构特点、装配形式以及加工技术要求等,分析了普通轧辊车床在轧辊加工中存在的各种问题和数控车床加工轧辊的各种优势,并介绍了数控车床在型钢轧辊孔型加工中的改造和实际应用,秦皇岛市国阳钢铁有限公司充分利用数控加... 详细信息

根据型钢轧辊的结构特点、装配形式以及加工技术要求等,分析了普通轧辊车床在轧辊加工中存在的各种问题和数控车床加工轧辊的各种优势,并介绍了数控车床在型钢轧辊孔型加工中的改造和实际应用,秦皇岛市国阳钢铁有限公司充分利用数控加工技术的优势,实现了型钢轧辊高质量、高效率的加工要求。

关键词：型钢轧辊数控车床孔型加工应用

靶向同源盒基因A7的小干扰RNA筛选及功能鉴定

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肿瘤研究与临床 2013年第9期25卷 581-584,587页

作者：尹宝慧贾秀红李建厂李有杰滨州医学院附属医院儿科 256603 滨州医学院生化与分子生物学教研室

目的体外设计、合成及筛选高效沉默同源盒基因A7（HOXA7）表达的小干扰RNA（siRNA），并研究沉默HOXA7对人类肺腺癌细胞株LETP-a-2增殖、凋亡的影响。方法设计、合成三对针对HOXA7基因的siRNA（siRNAl、siRNA2、siRNA3）和一对阴性对照... 详细信息

目的体外设计、合成及筛选高效沉默同源盒基因A7（HOXA7）表达的小干扰RNA（siRNA），并研究沉默HOXA7对人类肺腺癌细胞株LETP-a-2增殖、凋亡的影响。方法设计、合成三对针对HOXA7基因的siRNA（siRNAl、siRNA2、siRNA3）和一对阴性对照（siRNAnc），分别用阳离子脂质体介导转染LETPIa-2细胞。实验分6组：细胞对照组、脂质体对照组、siRNAnc组、siRNAl组、siRNA2组、siRNA3组，反转录聚合酶链反应（***）和Westernblot分别检测各组HOXA7mRNA和蛋白表达情况，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术分别检测沉默HOXA7后LETP—a-2细胞增殖、凋亡情况。结果siRNA成功转染LETP-a-2细胞，三对siRNA均能有效沉默HOXA7表达，其中以siRNA2沉默HOXA7的效果最佳，在mRNA和蛋白水平沉默率分别为（57．344±4．743）％和（52．219±0．550）％；三对siRNA沉默HOXA7后均能抑制LETP-a-2细胞增殖并促进其凋亡，其中以siRNA2组效果最明显，48h细胞增殖抑制率可达（48．144±4．992）％，凋亡率达（26．613±0．612）％。结论筛选出高效沉默HOXA7的siRNA2能有效抑制LETP—a-2细胞增殖并促进其凋亡，提示HOXA7可能成为肿瘤基因治疗的新靶点。

关键词：基因,同源盒 RNA干扰肺腺癌LETP-a-2细胞

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尾型同源盒基因与肿瘤

国际肿瘤学杂志 2012年第9期39卷 658-661页

作者：尹宝慧贾秀红山东省滨州医学院附属医院儿科 256603

尾型同源盒基因（CDX）家族主要包括CDX1、CDX2、CDX4，是同源盒基因（HOX）Para-HOX家族中的一员，作为转录调节因子在胚胎发育造血系统形成、肠上皮组织发育等过程中起了重要的作用。CDX异常表达常与肿瘤发生密切相关。研究CDX与肿瘤... 详细信息

尾型同源盒基因（CDX）家族主要包括CDX1、CDX2、CDX4，是同源盒基因（HOX）Para-HOX家族中的一员，作为转录调节因子在胚胎发育造血系统形成、肠上皮组织发育等过程中起了重要的作用。CDX异常表达常与肿瘤发生密切相关。研究CDX与肿瘤发生的关系，对肿瘤诊断、治疗等有重要意义。

关键词：基因,同源盒肿瘤

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儿童胆石症发病的相关因素及治疗研究进展

山东医药 2024年第17期64卷 105-108页

作者：尹宝慧姜吉祥孙允霄滨州医学院烟台附属医院儿科山东烟台264100 滨州医学院烟台附属医院外科

胆石症是发生在胆囊及胆管内的结石性疾病,在儿童中的发病率较成年人低。儿童胆石症的成因复杂,其发病与儿童体质量、饮食、性别、消化道微生物、药物、遗传易感性等因素密切相关。目前,由于缺乏大规模循证研究,儿童胆石症的治疗具有异... 详细信息

胆石症是发生在胆囊及胆管内的结石性疾病,在儿童中的发病率较成年人低。儿童胆石症的成因复杂,其发病与儿童体质量、饮食、性别、消化道微生物、药物、遗传易感性等因素密切相关。目前,由于缺乏大规模循证研究,儿童胆石症的治疗具有异质性,主要包括饮食干预、药物干预、内镜下治疗及手术治疗,尚缺乏关于儿童胆石症治疗的权威指南。探讨儿童发生胆石症的相关因素及治疗对临床具有实际的指导意义。

关键词：儿童胆石症胆结石发病机制危险因素内镜逆行胰胆管造影腹腔镜胆囊切除术

黄芪多糖对白血病Jurkat细胞增殖、凋亡及周期的影响

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世界中医药 2024年第16期19卷 2413-2417页

作者：尹宝慧耿雪静姜吉祥李有杰孙允霄滨州医学院烟台附属医院烟台264100 滨州医学院烟台264003

目的:研究黄芪多糖对白血病细胞(Jurkat)增殖、凋亡、周期的影响,并进一步探讨其作用机制。方法:不同浓度黄芪多糖(0、100、200、400μg/mL)作用于Jurkat细胞,细胞计数(CCK-8)法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组细胞周期及细... 详细信息

目的:研究黄芪多糖对白血病细胞(Jurkat)增殖、凋亡、周期的影响,并进一步探讨其作用机制。方法:不同浓度黄芪多糖(0、100、200、400μg/mL)作用于Jurkat细胞,细胞计数(CCK-8)法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组细胞周期及细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(Real Time PCR)法及蛋白印迹法检测细胞周期素D1(CyclinD1)、细胞周期素E(CyclinE)、胱天蛋白酶3(Caspase3)、胱天蛋白酶8(Caspase 8)的mRNA及蛋白表达。结果:不同浓度黄芪多糖(100、200、400μg/mL)均有效抑制Jurkat细胞增殖,呈剂量及时间依赖性(P<0.05);流式细胞术检测各组细胞周期及细胞凋亡情况,随黄芪多糖浓度增加,G_(0)/G_(1)期细胞逐渐增多,G_(2)/M期细胞逐渐减少,细胞凋亡率逐渐增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);黄芪多糖处理组细胞中CyclinD1、CyclinE mRNA及蛋白表达下降、Caspase3、Caspase8mRNA及蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪多糖能有效抑制白血病Jurkat细胞增殖,促进其凋亡,发挥抗白血病作用。其作用机制与调控CyclinD1、CyclinE表达,阻滞细胞周期于G_(0)/G_(1)期,促进凋亡相关基因Caspase3、Caspase8表达有关。

关键词：黄芪多糖急性淋巴细胞白血病增殖凋亡周期儿童细胞周期素凋亡通路