靶向同源盒基因A7的小干扰RNA筛选及功能鉴定

作     者：尹宝慧 贾秀红 李建厂 李有杰 YIN Bao-hui;JIA Xiu-hong;LI Jian-chang;LI You-jie

作者机构：滨州医学院附属医院儿科256603 滨州医学院生化与分子生物学教研室 

出 版 物：《肿瘤研究与临床》 (Cancer Research and Clinic)

年 卷 期：2013年第25卷第9期

页      面：581-584,587页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：山东省科学技术发展计划(2010GSF10264) 

主　　题：基因,同源盒 RNA干扰 肺腺癌LETP-a-2细胞 

摘      要：目的体外设计、合成及筛选高效沉默同源盒基因A7（HOXA7）表达的小干扰RNA（siRNA），并研究沉默HOXA7对人类肺腺癌细胞株LETP-a-2增殖、凋亡的影响。方法设计、合成三对针对HOXA7基因的siRNA（siRNAl、siRNA2、siRNA3）和一对阴性对照（siRNAnc），分别用阳离子脂质体介导转染LETPIa-2细胞。实验分6组：细胞对照组、脂质体对照组、siRNAnc组、siRNAl组、siRNA2组、siRNA3组，反转录聚合酶链反应（***）和Westernblot分别检测各组HOXA7mRNA和蛋白表达情况，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术分别检测沉默HOXA7后LETP—a-2细胞增殖、凋亡情况。结果siRNA成功转染LETP-a-2细胞，三对siRNA均能有效沉默HOXA7表达，其中以siRNA2沉默HOXA7的效果最佳，在mRNA和蛋白水平沉默率分别为（57．344±4．743）％和（52．219±0．550）％；三对siRNA沉默HOXA7后均能抑制LETP-a-2细胞增殖并促进其凋亡，其中以siRNA2组效果最明显，48h细胞增殖抑制率可达（48．144±4．992）％，凋亡率达（26．613±0．612）％。结论筛选出高效沉默HOXA7的siRNA2能有效抑制LETP—a-2细胞增殖并促进其凋亡，提示HOXA7可能成为肿瘤基因治疗的新靶点。