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低氧诱导因子-1α在小耳畸形耳软骨细胞中的表达及差异分析

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中华整形外科杂志 2023年第4期39卷 428-434页

作者：尚巧利何乐人中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院外耳整形再造一科北京100144

目的探索低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在不同严重程度的先天性小耳畸形与正常耳软骨细胞中的表达及与氧浓度的关系。方法收集2021年9月1日至2022年10月31日中国医学科学院整形外科医院收治的单侧先天性小耳畸形患者耳软骨标本,耳垂型小耳6... 详细信息

目的探索低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在不同严重程度的先天性小耳畸形与正常耳软骨细胞中的表达及与氧浓度的关系。方法收集2021年9月1日至2022年10月31日中国医学科学院整形外科医院收治的单侧先天性小耳畸形患者耳软骨标本,耳垂型小耳6例(实验组1),甲腔型小耳6例(实验组2),正常耳6例(实验组3)。分别提取原代耳软骨细胞,将P2代细胞分别置于氧浓度为21%、10%、5%和1%的培养箱中培养12 h,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测HIF-1α在mRNA水平的表达,采用免疫荧光染色法检测HIF-1α蛋白在软骨细胞中的表达情况。采用GraphPad Prism 8.0软件进行统计学分析,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 RT-qPCR结果显示,氧浓度21%、10%、5%、1%条件下各组耳软骨细胞的HIF-1α mRNA相对表达量:实验组1分别为0.031 8±0.006 0、0.043 4±0.001 0、0.049 5±0.000 9、0.030 5±0.001 0,实验组2分别为0.036 9±0.000 6、0.047 4±0.000 8、0.054 1±0.000 4、0.034 1±0.001 8,实验组3分别为0.041 6±0.000 4、0.055 6±0.000 6、0.070 1±0.001 9、0.077 2±0.000 9,其中,21%、5%氧浓度培养条件下3组间差异有统计学意义(P<0.01)。免疫荧光染色显示,在5%氧浓度时,实验组1和实验组2中HIF-1α蛋白部分位于细胞核,部分位于细胞质,实验组3中HIF-1α蛋白位于细胞核中。结论 HIF-1α在耳垂型、甲腔型先天性小耳畸形及正常耳软骨细胞中均有表达,表达量与畸形严重程度呈负相关;氧浓度在21%到1%之间变化时,HIF-1α mRNA在耳垂型和甲腔型先天性小耳畸形中的变化趋势相似,表达量与畸形严重程度呈负相关,且峰值出现在5%氧浓度,1%氧浓度时表达下降,但在正常耳软骨细胞中表达持续增加;5%氧浓度时小耳畸形耳软骨细胞中HIF-1α蛋白的核内外分布情况与正常耳软骨细胞不同。

关键词：先天性小耳畸形低氧诱导因子氧浓度出生缺陷

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蓝色橡皮疱痣综合征诊治进展

中华医学美学美容杂志 2022年第4期28卷 340-343页

作者：尚巧利何乐人中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院整形七科北京100144

蓝色橡皮疱痣综合征(BRBNS)是一种罕见疾病,以全身多处血管橡皮样改变为特征,发病机制不明,由于其发病率低,临床症状多样但缺乏特异性,极易误诊或漏诊,其中消化道出血是BRBNS患者最常见就诊原因,也是对患者生活质量影响较大甚至危及生... 详细信息

蓝色橡皮疱痣综合征(BRBNS)是一种罕见疾病,以全身多处血管橡皮样改变为特征,发病机制不明,由于其发病率低,临床症状多样但缺乏特异性,极易误诊或漏诊,其中消化道出血是BRBNS患者最常见就诊原因,也是对患者生活质量影响较大甚至危及生命的并发症。诊断主要依靠皮肤或消化道的多发静脉畸形表现,治疗主要是对症治疗,尤其是各种并发症的治疗。

关键词：蓝色橡皮疱痣综合征罕见静脉畸形进展

低氧诱导因子在先天性小耳畸形中的表达及差异分析

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中华实验外科杂志 2022年第12期39卷 2356-2358页

作者：尚巧利何乐人杨锦秀王爽姜栋文中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院整形七科 100144

目的:探索低氧诱导因子(HIF)-1α、HIF-2α在先天性小耳畸形耳软骨与正常耳软骨中的表达,并进行差异分析。方法:选取单侧先天性小耳畸形患者的耳软骨7例为实验组,正常耳软骨4例为对照组,提取软骨组织总RNA和总蛋白,分别采用实时荧光定... 详细信息

目的:探索低氧诱导因子(HIF)-1α、HIF-2α在先天性小耳畸形耳软骨与正常耳软骨中的表达,并进行差异分析。方法:选取单侧先天性小耳畸形患者的耳软骨7例为实验组,正常耳软骨4例为对照组,提取软骨组织总RNA和总蛋白,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法和蛋白质印迹法(Western blot)方法检测HIF-1α、HIF-2α在mRNA水平和蛋白质水平的表达情况,并应用免疫组织化学染色法检测HIF-1α、HIF-2α在组织中的定位,两组之间比较采用独立样本t检验。结果:RT-qPCR显示实验组中HIF-1α相对表达量低于对照组(0.256±0.097比0.393±0.052,t=2.566,P<0.05),实验组HIF-2α相对表达量低于对照组(0.230±0.134比0.244±0.131),且HIF-1α差异有统计学意义。Western blot显示HIF-1α在实验组中的相对表达量低于对照组(0.242±0.034比1.119±0.085,t=19.314,P<0.05),HIF-2α在实验组中的相对表达量低于对照组(0.388±0.067比1.129±0.089,t=14.409,P<0.05),差异有统计学意义。结论:HIF-1α、HIF-2α在先天性小耳畸形及正常耳软骨中均有表达,主要位于细胞核内,且在mRNA和蛋白质水平上小耳畸形耳软骨中的表达量低于正常耳软骨。

关键词：先天性小耳畸形正常耳软骨低氧诱导因子

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扩张包膜对自体移植肋软骨生物学活力的影响

扩张包膜对自体移植肋软骨生物学活力的影响

作者：尚巧利北京协和医学院

学位级别：硕士

目的本研究旨在探讨扩张包膜对自体移植肋软骨生物学活力的影响,从而为临床上如何处理扩张包膜提供理论依据。方法取3月龄新西兰大白兔16只,于背部对称部位埋置15mL扩张器各2枚,注水30mL并维持扩张1个月,取出扩张器,左侧去除扩张器包膜... 详细信息

目的本研究旨在探讨扩张包膜对自体移植肋软骨生物学活力的影响,从而为临床上如何处理扩张包膜提供理论依据。方法取3月龄新西兰大白兔16只,于背部对称部位埋置15mL扩张器各2枚,注水30mL并维持扩张1个月,取出扩张器,左侧去除扩张器包膜(实验组),右侧保留扩张器包膜(对照组);同时取右侧第7、8肋软骨,去除肋软骨膜,均分为两段,大体称重,分别置于扩张囊腔。分别于肋软骨移植术后4、8周获取标本,称重,大体观察,行组织学检测及透射电镜观察。结果肋软骨移植术后4、8周,实验组软骨重量变化分别为(0.0034±0.0027)、(0.0058±0.0014)g,与对照组(-0.0003±0.0019)、(-0.0039±0.0053)g相比显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。组织学观察,HE染色400倍光镜下软骨细胞计数,术后4、8周实验组分别为(62.0±3.2)、(68.2±3.5)个,对照组分别为(51.8±1.4)、(58.4±7.1)个,差异均有统计学意义(P<0.05)。Masson染色实验组术后4、8周较对照组胶原纤维蓝染较深。透射电镜下观察,对照组较实验组术后4周和8周胞质内线粒体及粗面内质网数量减少明显,脂滴增大,出现空泡,细胞核边集。结论自体肋软骨移植术后4周、8周,实验组较对照组软骨细胞数目增多、重量增加,活力增强,去除扩张包膜较保留扩张包膜更有利于移植肋软骨生物学活力的保持,并可继续生长。

关键词：肋软骨移植扩张包膜兔形态学超微结构

基于糖酵解基因表达谱筛选皮肤黑色素瘤预后风险标志物

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中华整形外科杂志 2021年第8期37卷 875-883页

作者：尚巧利何乐人中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院整形七科 100144

目的通过生物信息学方法对皮肤黑色素瘤中糖酵解相关基因进行分析并构建预后模型,对黑色素瘤患者进行精准分组以提高治疗的针对性。方法获取癌症基因组图谱(TCGA)数据库中皮肤黑色素瘤患者[470例,男290例,女180例,中位年龄58岁(15~90岁)... 详细信息

目的通过生物信息学方法对皮肤黑色素瘤中糖酵解相关基因进行分析并构建预后模型,对黑色素瘤患者进行精准分组以提高治疗的针对性。方法获取癌症基因组图谱(TCGA)数据库中皮肤黑色素瘤患者[470例,男290例,女180例,中位年龄58岁(15~90岁)]的mRNA表达谱和临床相关数据,并以基因型和基因表达量关联数据库(GTEx)中的正常皮肤组织样本(812例,男467例,女345例)作为对照。采用基因集富集分析(GSEA)富集出与皮肤黑色素瘤显著相关的糖酵解通路差异表达基因。通过Cox回归分析筛选与黑色素瘤预后显著相关的mRNA,并构建黑色素瘤患者预后风险评分(RS)模型。根据风险评分模型RS值的中位值,将符合生存分析条件的450例黑色素瘤患者分为高风险组和低风险组,分析两组生存时间、生存率的差异,并通过绘制ROC曲线,评估RS值对黑色素瘤患者10年、20年死亡风险的预测价值。结果通过GSEA分析发现糖酵解相关的REACTOME_GLYCOLYSIS通路在黑色素瘤样本中显著富集,标准化富集评分(NES)为1.74,错误发现率(FDR)为0.016。通过对该通路117个差异表达基因(上调71个,下调46个)的单因素和多因素Cox回归分析,筛选出9个与皮肤黑色素瘤预后密切相关的mRNA分子,包括4个保护性因子(STAT3、MLXIPL、IDUA和AURKA)和5个危险性因子(KIF20A、PGM1、GYS1、ALG1和HDAC4)。根据多因素Cox回归分析的回归系数及各基因mRNA表达水平,建立预后风险评分模型:RS=0.31×KIF20A+0.19×PGM1-0.27×STAT3+0.24×GYS1-0.25×MLXIPL-0.19×IDUA+0.33×ALG1-0.28×AURKA+0.26×HDAC4。以RS值的中位值0.83作为cut-off值,将患者分为高风险组(225例)和低风险组(225例),高风险组的总体生存时间为(6.72±0.55)年,明显少于低风险组的(13.60±1.03)年(P<0.001);且高风险组的10年、20年生存率明显低于低风险组(24.1%vs.50.9%;0 vs.25.2%;P值均<0.001);RS值对黑色素瘤患者的10年和20年生存预测的ROC曲线下面积分别为0.730、0.749。多因素Cox回归分析显示,RS值是黑色素瘤预后的独立预测因素。结论所构建的皮肤黑色素瘤预后风险评分模型可以有效地对患者进行预后风险评价,为后续筛选与糖酵解相关的预后较差患者并进行针对性治疗的研究提供基础。

关键词：黑色素瘤预后糖酵解 Cox回归分析比例危险度模型癌症基因组图谱

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残耳软骨合页状翻转耳屏再造术的临床效果

中华整形外科杂志 2021年第12期37卷 1314-1319页

作者：王爽何乐人顾勤浩尚巧利杨晨中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院整形七科 100144 浙江省人民医院整形外科杭州310014

目的探讨小耳畸形患者再造耳修整术三期手术时,利用残耳软骨合页状翻转再造耳屏的临床效果。方法回顾性分析2018年1月至2019年1月中国医学科学院整形外科医院整形七科收治的残耳Ⅲ型单侧先天性小耳畸形患者资料。患者耳再造二期手术时... 详细信息

目的探讨小耳畸形患者再造耳修整术三期手术时,利用残耳软骨合页状翻转再造耳屏的临床效果。方法回顾性分析2018年1月至2019年1月中国医学科学院整形外科医院整形七科收治的残耳Ⅲ型单侧先天性小耳畸形患者资料。患者耳再造二期手术时保留残耳组织,三期手术时利用残耳组织进行合页状翻转重建耳屏,并结合中厚皮片移植模拟外耳道进行矫治。术后随访观察再造耳屏宽度、隆起高度,以及耳屏形态对称性。结果共纳入31例小耳畸形患儿,男19例,女12例,年龄6~14岁,平均8岁;右耳16例,左耳15例。术后再造耳屏及移植皮片血运良好,切口均一期愈合。随访3~6个月,正常侧耳屏宽度为(1.05±0.12)cm,患侧为(0.98±0.17)cm,差异无统计学意义(P=0.328);正常侧耳屏高度为(0.53±0.08)cm,患侧为(0.55±0.08)cm,差异无统计学意义(P=0.741)。再造耳屏立体感强、形态稳定,外耳门模拟形态良好,患者可佩戴耳机进行活动,满足日常生活需要。结论利用残耳软骨进行合页状翻转再造耳屏可起到完善耳廓三维结构形态的作用,联合耳屏后耳甲腔植皮模拟外耳门,可使再造耳更加逼真,同时利用残耳软骨合页状翻转所形成的软骨弹力可实现佩戴耳机的功能。

关键词：先天性小耳畸形耳修复外科手术耳屏再造

扩张包膜对移植后肋软骨生物力学影响的实验研究

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中华整形外科杂志 2015年第3期31卷 205-208页

作者：周佳宇尚巧利杨庆华何乐人蒋海越中国医学科学院整形外科医院整形七科北京100144 河南省人民医院整形外科

目的探讨扩张器包膜对自体异位移植后兔肋软骨生物力学性能的影响.方法在10只3月龄新西兰大白兔背部脊柱两侧对称埋置15 ml扩张器各4枚,持续扩张1个月后,取出扩张器,一侧去除扩张器包膜为去包膜组,一侧保留扩张器包膜为带包膜组,同时... 详细信息

目的探讨扩张器包膜对自体异位移植后兔肋软骨生物力学性能的影响.方法在10只3月龄新西兰大白兔背部脊柱两侧对称埋置15 ml扩张器各4枚,持续扩张1个月后,取出扩张器,一侧去除扩张器包膜为去包膜组,一侧保留扩张器包膜为带包膜组,同时取右侧第7、8肋软骨,去除肋软骨膜后一分为二,分别放置于背部对称扩张囊腔内,分别于术后4、8周取左右对称部位的肋软骨,进行组织学观察.根据试验机要求制成相应大小标准试件进行生物力学测试,对测试结果进行统计学分析处理.结果 8周后,平均极限抗拉强度：去包膜组为（4.954＋2.8） MPa,带包膜组为（2.939＋0.842） MPa;平均压缩强度：去包膜组为（58.74±13.77） MPa,带包膜组为（47.61±11.41） MPa,去包膜组的抗拉强度及压缩强度均高于带包膜组,差异均有统计学意义（P＜0.05）,表明去包膜组肋软骨各项生物力学性能优于带包膜组.结论去除扩张器包膜对移植后肋软骨生物力学性能的保持优于保留扩张器包膜组.

关键词：肋软骨移植,自体扩张包膜生物力学

扩张包膜对自体移植肋软骨影响的初步组织学观察

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中国修复重建外科杂志 2014年第6期28卷 741-744页

作者：尚巧利蒋海越周佳宇何乐人杨庆华北京协和医学院中国医学科学院整形外科医院整形七科北京100144

目的初步探讨扩张包膜对兔肋软骨自体异位移植后生长的影响。方法取3月龄新两兰大白兔16只，雌雄不限，体重2．2～2．5kg；于背部对称埋置15mL扩张器各2枚，注水30mL并维持扩张1个月后，取出扩张器，左侧去除扩张器包膜（实验组），右... 详细信息

目的初步探讨扩张包膜对兔肋软骨自体异位移植后生长的影响。方法取3月龄新两兰大白兔16只，雌雄不限，体重2．2～2．5kg；于背部对称埋置15mL扩张器各2枚，注水30mL并维持扩张1个月后，取出扩张器，左侧去除扩张器包膜（实验组），右侧保留扩张器包膜（对照组）；同时取右侧第7、8肋软骨，去除肋软骨膜，大体称重后均分段分别植于扩张囊腔。术后4、8周取软骨标本行人体观察、称重，HE及Masson染色观察其组织形态学变化。结果扩张器埋置术后沌水过程中1从实验动物死亡，余15只存活至实验完成。术后4、8周，两组软骨均无明显变化，但实验组软骨与周嘲组织贴合较对照组更紧密。术后4、8周，实验组移植前后软骨重量差分别为（0．0034±0．0027）、（0．0058±0．0014）g，与对照组（0．0003±0．0019）、（0．0039±0．0053）g相比显著增加，差异均有统计学意义（t=-4．331，P=0029；t=6688，P=0．008）；且实验组术后8周软骨重量差高于4周，但对照组显著低于4周（t=3．098，P=0．001；t=2．491，P=0．009）。组织学观察示，与正常软骨相比，实验组及对照组术后4、8周软骨活力均增强；但对照组软骨活力略差于实验组，且8周软骨中央有局灶性无细胞区，软骨细胞数目减少；实验组中胶原纤维蓝染较对照组深。结论去除扩张包膜有利于自体肋软骨生长，为临床上扩张皮瓣下移植软骨时扩张包膜的处理提供了实验依据。

关键词：自体肋软骨移植扩张包膜组织学观察兔

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先天性上睑下垂的手术治疗

中华医学美学美容杂志 2016年第3期22卷 191-192页

作者：尚巧利蒋海越中国医学科学院整形外科医院整形七科北京100144

上睑下垂，即双眼平视前方时上睑覆盖角膜上缘及瞳孔，上睑覆盖角膜上方超过2mm，它的诊断主要是依靠临床症状。而先天性上睑下垂系上睑下垂中较常见的一种，为原发性，在出生后即可发病，部分病例有家族遗传史。上睑下垂不仅影响外观... 详细信息

上睑下垂，即双眼平视前方时上睑覆盖角膜上缘及瞳孔，上睑覆盖角膜上方超过2mm，它的诊断主要是依靠临床症状。而先天性上睑下垂系上睑下垂中较常见的一种，为原发性，在出生后即可发病，部分病例有家族遗传史。上睑下垂不仅影响外观，严重者因上睑部分或全部遮盖瞳孔，导致形觉剥夺性弱视，严重影响视功能0]，患者往往采取蹙额扬眉或昂头姿势视物，致使额部皱纹增多增深，眉毛上抬，及不良的仰头习惯，甚至造成颈部肌肉和颈椎畸形，因此原则上应给予及时矫治。上睑下垂矫正的目的是提高下垂的上睑，恢复正常的睑裂高度，使视轴摆脱下垂上睑的干扰，防止弱视，既要达到生理功能的恢复，又要求达到美容的目的。

关键词：先天性上睑下垂手术治疗形觉剥夺性弱视家族遗传史临床症状额部皱纹颈椎畸形颈部肌肉