低氧诱导因子-1α在小耳畸形耳软骨细胞中的表达及差异分析

作     者：尚巧利 何乐人 Shang Qiaoli;He Leren

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院外耳整形再造一科北京100144 

出 版 物：《中华整形外科杂志》 (Chinese Journal of Plastic Surgery)

年 卷 期：2023年第39卷第4期

页      面：428-434页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100213[医学-耳鼻咽喉科学] 10[医学] 

基　　金：首都卫生发展科研专项(2022-2-4042) 中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2021-I2M-1-001) 

主　　题：先天性小耳畸形 低氧诱导因子 氧浓度 出生缺陷 

摘      要：目的探索低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在不同严重程度的先天性小耳畸形与正常耳软骨细胞中的表达及与氧浓度的关系。方法收集2021年9月1日至2022年10月31日中国医学科学院整形外科医院收治的单侧先天性小耳畸形患者耳软骨标本,耳垂型小耳6例(实验组1),甲腔型小耳6例(实验组2),正常耳6例(实验组3)。分别提取原代耳软骨细胞,将P2代细胞分别置于氧浓度为21%、10%、5%和1%的培养箱中培养12 h,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测HIF-1α在mRNA水平的表达,采用免疫荧光染色法检测HIF-1α蛋白在软骨细胞中的表达情况。采用GraphPad Prism 8.0软件进行统计学分析,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK检验,以P0.05为差异有统计学意义。结果 RT-qPCR结果显示,氧浓度21%、10%、5%、1%条件下各组耳软骨细胞的HIF-1α mRNA相对表达量:实验组1分别为0.031 8±0.006 0、0.043 4±0.001 0、0.049 5±0.000 9、0.030 5±0.001 0,实验组2分别为0.036 9±0.000 6、0.047 4±0.000 8、0.054 1±0.000 4、0.034 1±0.001 8,实验组3分别为0.041 6±0.000 4、0.055 6±0.000 6、0.070 1±0.001 9、0.077 2±0.000 9,其中,21%、5%氧浓度培养条件下3组间差异有统计学意义(P0.01)。免疫荧光染色显示,在5%氧浓度时,实验组1和实验组2中HIF-1α蛋白部分位于细胞核,部分位于细胞质,实验组3中HIF-1α蛋白位于细胞核中。结论 HIF-1α在耳垂型、甲腔型先天性小耳畸形及正常耳软骨细胞中均有表达,表达量与畸形严重程度呈负相关;氧浓度在21%到1%之间变化时,HIF-1α mRNA在耳垂型和甲腔型先天性小耳畸形中的变化趋势相似,表达量与畸形严重程度呈负相关,且峰值出现在5%氧浓度,1%氧浓度时表达下降,但在正常耳软骨细胞中表达持续增加;5%氧浓度时小耳畸形耳软骨细胞中HIF-1α蛋白的核内外分布情况与正常耳软骨细胞不同。