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作者：宋荣峰江西医学院

学位级别：硕士

Objective Serosa metastatic carcinomas usually cause malignant serous cavity effusions. The differentiation between malignant and benign effusions is sometimes difficult but very important in clinical practice. Laboratory tests are essential to the differentiation, but current available tests can not solve the problem satisfactorily. Ras gene is an important proto-oncogene, and its mutations are frequently found in many malignant tumors. Detecting ras gene mutations and expression in effusions is probably useful in differentiating malignant effusions from benign ones. In the present study, point mutations of codon 12 of K-ras and H-ras gene in the effusion supernatants were detected by polymerase chain reaction with restriction fragment length polymorphism （PCR-RFLP） and P21ras expressions in the effusion exfoliative cells were detected by immunocytochemistry, and their values in diagnosis of malignant effusions were evaluated. Methods Fresh specimens of serous cavity effusions were obtained. Exfoliative cells and supernatants were collected after centrifugation, respectively. Two cell smears were prepared for Papanicolaou staining and cytological diagnosis, by which the specimens were divided into benign and malignant effusions. Genome DNA in the supernatants was conventionally extracted by proteinase K digestion followed by phenol/chloroform extraction. The DNA fragments containing codon 12 of K-ras and H-ras gene were amplified by PCR, respectively, and were cleaved by restriction endonuclease Mva I or Msp I, respectively. Digestive products were purified and identified by ＜WP=6＞ means of polyacrylamide gel electrophoresis and silver staining. On the other hand, some of exfoliative cells were processed with a "standardized" procedure: removing red cells （when existing）, fixed in 1% paraformaldehyde, resuspended in a solution of 1% BSA-PBS, adjusting the cell concentration to 2×106 cells per milliliter, and finally cell smears were

关键词：目的恶性肿瘤的浆膜转移常引起恶性浆膜腔积液,后者有时与良性浆膜腔积液难以鉴别,但正确鉴别两者具有重要的临床意义。良恶性浆膜腔积液的鉴别主要依赖实验室检查,但现有的实验诊断技术有时不能满意地解决这一问题。ras基因是重要的原癌基因,其突变常见于多种恶性肿瘤,检测ras基因突变及其蛋白表达情况可能对鉴别良恶性积液具有重要的临床价值。本研究采用PCR-RFLP技术检测浆膜腔积液上清液中K-ras和H-ras基因12位点的突变状况,采用免疫细胞化学染色技术检测浆膜腔积液脱落细胞P21ras蛋白表达状况,探讨它们对恶性浆膜腔积液诊断中的价值。方法收集新鲜浆膜腔积液标本,常规离心后收集上清和脱落细胞。取部分脱落细胞涂片,作巴氏染色进行常规细胞学诊断,将积液分为良性与恶性两组。以上清为材料,采用常规蛋白酶K消化、酚/氯仿抽提法提取基因组DNA,然后采用PCR技术分别扩增包含K-ras和H-ras基因12位点的DNA片段,并对扩增产物分别用限制性内切酶Mva I和Msp Ι进行酶切消化,对消化产物纯化后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色显示结果。同时,对脱落细胞作“标准化”处理,包括去除红细胞(存在时)、1%多聚甲醛-PBS固定、用1%BSA-PBS制备细胞悬液、调整细胞浓度为2×106/ml,然后制备细胞涂片进行免疫细胞染色,一抗为鼠抗人ras单克隆抗体,二抗为生物素标记的羊抗鼠IgG,辣根酶标记链霉卵白素为酶系统,DAB显色,高倍光镜下判读结果。结果 108例浆膜腔积液标本中,恶性积液53例,良性积液55例。101例K-ras和H-ras基因12位点扩增获得成功(93.5%),其中52例恶性积液中K-ras和H-ras基因12位点突变率分别为55.8%和30.8%,49例良性积液中突变率分别为10.2%和4.1%,两种不同性质积液上清的K-ras和H-ras基因的突变率差异均有显著性统计学意义(P<0.001)。K-ras和H-ras基因12位点突变诊断恶性积液的特异性为89.8%和95.9%,阳性预测值为85.3%和88.9%,阴性预测值65.8%和56.6%,诊断符合率72.3%和62.4%。 53例恶性积液中有39例肿瘤细胞P21ras蛋白免疫细胞化学染色阳性(73.6%),且多为强阳性或阳性 55例良性积液中有12例可见P21ras蛋白免疫细胞化学染色阳性(21.8 %),且皆为阳性或弱阳性。两组间染色的阳性率及阳性强度的差异均有显著性统计学意义(P<0.001)。P21ras蛋白免疫细胞化学染色诊断恶性积液的特异性为78.2%,阳性预测值76.5%,阴性预测值75.4%,诊断符合率达75.9%。将ras基因突变和P21ras蛋白免疫细胞化学染色进行并联式和串联式联合分析,对诊断恶性积液的敏感性为88.7%和49.1%,特异性为69.1%和96.4%,阳性预测值为73.4%和92.9%,阴性预测值为86.4%和63.9%,诊断符合率为78.7%和73.2%。并联式联合分析可提高诊断敏感性,串联式分析则提高诊断的可靠性。结论 1.恶性浆膜腔积液上清中K-ras基因12位点突变频率较高,对诊断恶性浆膜腔积液有一定的临床价值。 2.恶性浆膜腔积液上清中H-ras基因12位点突变频率较低,对诊断恶性浆膜腔积液的临床价值较小。 3.浆膜腔积液中脱落肿瘤细胞P21ras蛋白免疫细胞化学染色多为阳性,良性细胞多为阴性,对恶性体腔积液的诊断有较大的价值。 4.ras基因突变和P21ras蛋白表达联合检测,有助于提高诊断恶性积液的敏感性或特异性,提高恶性积液的检出率或诊断可靠性。 5.浆膜腔积液标本离心后取微量上清,采用常规酚/氯仿法即可提取出基因组DNA,能成功用于PCR-RFLP分析。

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胃癌恶性腹水患者的临床特征及预后分析223例

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世界华人消化杂志 2013年第27期21卷 2826-2831页

作者：张慧卿谢梅何波芦珊万以叶宋荣峰江西省肿瘤医院江西省南昌市330029

目的:探讨胃腺癌恶性腹水的临床病理特征和预后因素.方法:回顾性研究2008-01/2012-12收治的223例胃腺癌恶性腹水患者临床的资料,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,预后因素的单因素分析采用Log-rank检验,多因素分析采用Cox回归模型.结果:... 详细信息

目的:探讨胃腺癌恶性腹水的临床病理特征和预后因素.方法:回顾性研究2008-01/2012-12收治的223例胃腺癌恶性腹水患者临床的资料,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,预后因素的单因素分析采用Log-rank检验,多因素分析采用Cox回归模型.结果:223例患者,占我院同期收治胃癌病例的6.2%(223/3612),中位年龄52岁(20-81岁),青年胃癌50例(22.4%),老年胃癌38例(17.0%).近端胃癌22例(9.9%),全胃癌12例(5.4%).177例(79.4%)患者病理分化程度为低分化腺癌或未分化腺癌.97例(43.5%)患者在诊断胃癌时即有腹水,122例(54.7%)患者有胃癌手术史,148例(66.4%)患者接受了化疗.无一例其他疾病导致的死亡,中位总生存期4.9 mo,1年生存率12.6%(28/223).单因素分析显示:ECOG评分、以腹水起病,胃癌手术史、胆红素水平、合并其他部位转移以及是否接受化疗是影响患者预后的因素(均P<0.05).多因素分析显示,ECOG评分,以腹水起病,接受化疗,合并其他部位转移是影响患者预后的独立因素(均P<0.05).结论:以腹水起病、行为评分差和合并其他部位转移的胃癌恶性腹水患者预后较差,进行腹腔化疗和全身化疗能延长患者的生存时间.

关键词：胃癌恶性腹水总生存期预后化学治疗

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以浆膜腔积液上清为标本检测ras基因第12密码子突变及其意义

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中国肿瘤临床 2007年第15期34卷 888-890页

作者：张焜和宋荣峰付曲波祝金泉陈江吕农华朱萱王崇文南昌大学第一附属医院消化疾病研究所南昌市330006 江西省肿瘤医院赣南医学院第一附属医院

有研究显示，体液中的游离核酸呵直接用于肿瘤的分子诊断，且效果优于以体液巾的脱落细胞为实验材料，近年来随着肿瘤发病率的上升，恶性浆膜腔积液的比例不断升高，但部分恶性积液的诊断一直闲扰人们。ras基闪第12密码子突变广泛存在... 详细信息

有研究显示，体液中的游离核酸呵直接用于肿瘤的分子诊断，且效果优于以体液巾的脱落细胞为实验材料，近年来随着肿瘤发病率的上升，恶性浆膜腔积液的比例不断升高，但部分恶性积液的诊断一直闲扰人们。ras基闪第12密码子突变广泛存在于多种恶性肿瘤，是研究肿瘤基凶诊断较为理想的“通用”靶基因之一。

关键词：游离DNA ras基因突变 PCR—RFLP 浆膜腔积液

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E—cadherin和Calretinin免疫细胞化学染色对恶性浆膜腔积液的诊断价值

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胃肠病学 2002年第B11期7卷 23-24页

作者：靳文剑宋荣峰等江西医学院第一附属医院消化科330006

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多西他赛联合顺铂治疗蒽环类耐药的转移性乳腺癌31例临床观察

多西他赛联合顺铂治疗蒽环类耐药的转移性乳腺癌31例临床观察

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第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：万以叶宋荣峰江西省肿瘤医院内三科江西省肿瘤医院内三科

目的:研究观察国产多西他赛联合顺铂治疗蒽环类药物化疗失败的转移性乳腺癌的疗效及安全性。方法:31例蒽环类药物治疗失败的转移性乳腺癌患者接受多西他赛联合顺铂方案治疗,多西他赛75mg／m3第一天;顺铂80mg／m2 分成三天使用,每周期评... 详细信息

目的:研究观察国产多西他赛联合顺铂治疗蒽环类药物化疗失败的转移性乳腺癌的疗效及安全性。方法:31例蒽环类药物治疗失败的转移性乳腺癌患者接受多西他赛联合顺铂方案治疗,多西他赛75mg／m3第一天;顺铂80mg／m2 分成三天使用,每周期评价疗效同时记录不良反应。结果所有患者均可评价疗效和不良反应,完全缓解（CR）2例, 部分缓解（PR）14例,有效率（CR+PR）51．6％,（16／31）。无严重不良反应导致死亡的患者,中性粒细胞减少是主要不良反应,Ⅲ-Ⅳ度占54．8％,脱发发生率42％。结论:多西他赛联合顺铂是治疗蒽环类耐药的转移性乳腺癌的有效方案, 其不良反应能够耐受。

关键词：乳腺癌化学治疗多西他赛顺铂

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复方苦参注射液合并化疗治疗晚期乳腺癌临床观察

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江西医药 2009年第4期44卷 343-344页

作者：宋荣峰万以叶程楚江西省肿瘤医院肿瘤内科南昌330029

目的观察复方苦参注射液合并化疗治疗晚期乳腺癌的疗效。方法将118例复发转移性乳腺癌患者随机分为两组,单纯化疗组采用长春瑞滨联合吉西他滨方案治疗:长春瑞滨25mg/m2静滴,第1、8d;吉西他滨1000mg/m2静滴30min,第1、8d;每3周为1周期。... 详细信息

目的观察复方苦参注射液合并化疗治疗晚期乳腺癌的疗效。方法将118例复发转移性乳腺癌患者随机分为两组,单纯化疗组采用长春瑞滨联合吉西他滨方案治疗:长春瑞滨25mg/m2静滴,第1、8d;吉西他滨1000mg/m2静滴30min,第1、8d;每3周为1周期。每周期评价疗效同时记录不良事件。岩舒加化疗组,岩舒注射液20ml加入5%葡萄糖注射液250ml静脉滴注,20d为1个周期,连用2个周期,同时加用化疗药,方案同化疗组。结果生存质量改善情况,岩舒加化疗组生存质量改善率为43.7%,单纯化疗组为18.52%,两组比较有显著性差异(P<0.05);疼痛缓解情况,岩舒加化疗组有效率80%,单纯化疗组为33.33%,两组比较有显著性差异(P<0.05);岩舒加化疗组有效率略高于单纯化疗组,但统计学无显著性差异。结论复方苦参注射液合并化疗治疗晚期乳腺癌疗效较好,毒副反应较轻。

关键词：复方苦参注射液晚期乳腺癌吉西他滨长春瑞滨

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多西紫杉醇联合奥沙利铂及氟尿嘧啶治疗晚期胃癌的疗效分析

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江西医药 2010年第3期45卷 205-206,212页

作者：宋荣峰万以叶程楚江西省肿瘤医院内三科南昌330029

目的观察多西紫杉醇联合奥沙利铂和5-氟尿嘧啶治疗进展期胃癌的临床疗效及不良反应。方法96例进展期胃癌采用多西紫杉醇75mg/m2,第1d静脉输注1h;奥沙利铂100mg/m2,第1d静脉输注3h;亚叶酸0.2g/m2,第1d静脉输注2h;5-氟尿嘧啶2.4g/m2用便... 详细信息

目的观察多西紫杉醇联合奥沙利铂和5-氟尿嘧啶治疗进展期胃癌的临床疗效及不良反应。方法96例进展期胃癌采用多西紫杉醇75mg/m2,第1d静脉输注1h;奥沙利铂100mg/m2,第1d静脉输注3h;亚叶酸0.2g/m2,第1d静脉输注2h;5-氟尿嘧啶2.4g/m2用便携式微量输液泵持续静脉输注48h,21d为1个周期。治疗2个周期后评价疗效和不良反应。结果96例患者均可评价,获得完全缓解(CR)3例,部分缓解(PR)39例,稳定(SD)33例,进展(PD)21例,总有效率(RR)为43.8%(42/96),中位疾病进展时间(TTP)7.5个月,中位生存期11.4个月。主要不良反应为骨髓抑制、腹泻、四肢末梢感觉异常,其中Ⅱ～Ⅲ度白细胞减少为65.7%(63/96),Ⅱ～Ⅲ度血小板减少为34.4%(33/96),Ⅰ～Ⅱ度神经毒性为56.3%(54/96),Ⅰ～Ⅱ度腹泻为18.8%(18/96)。结论多西紫杉醇联合奥沙利铂、5-氟尿嘧啶方案治疗进展期胃癌疗效肯定,且毒副反应可以耐受,患者临床受益。

关键词：胃癌多西紫杉醇奥沙利铂 5-氟尿嘧啶

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替吉奥联合奥沙利铂方案治疗晚期小肠腺癌的临床观察

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中国癌症杂志 2014年第1期24卷 46-51页

作者：张慧卿何波芦珊王艳华宋荣峰万以叶江西省肿瘤医院内三科江西南昌330029

背景与目的：化疗是晚期小肠腺癌的主要治疗手段，目前尚无标准治疗方案。本研究旨在评估替吉奥联合奥沙利铂治疗晚期小肠腺癌的疗效与安全性。方法：收集29例经替吉奥联合奥沙利铂治疗的晚期小肠腺癌患者的临床资料，并进行回顾性分析... 详细信息

背景与目的：化疗是晚期小肠腺癌的主要治疗手段，目前尚无标准治疗方案。本研究旨在评估替吉奥联合奥沙利铂治疗晚期小肠腺癌的疗效与安全性。方法：收集29例经替吉奥联合奥沙利铂治疗的晚期小肠腺癌患者的临床资料，并进行回顾性分析。化疗方案：第l天，静脉滴注奥沙利铂130mg／m^2；第1～i4天，口服替吉奥40mg／m^2，每日2次，21d为1个周期。结果：患者完成中位化疗周期数4（2-9）个，均可评估疗效，其中完全缓解（completeresponse，CR）2例（6．9％），部分缓解（partialresponse，PR）9例（31．0％），客观有效率（responserate，RR）为37．9％，疾病控制率（diseasecontrolrate，DCR）为65．5％。无～例患者失访，中位随访时间为14．7个月。患者中位无进展生存时间（progreSSfreesurvival，PFS）为5．4个月（95％CI：3．6～7．2），中位总生存时间（overal1survival，OS）为13．2个月（95％CI：6．7-19．7）。亚组分析显示，替吉奥联合奥沙利铂方案非一线化疗、体力状况（EasternCooperativeOncologyGroup，ECOG）评分〉1分，转移部位〉2个的患者中位0s明显缩短（P〈O．05）。化疗的主要不良反应为骨髓抑制、胃肠道反应、乏力、周围神经病变和皮疹，以轻度为主，均可耐受。结论：本研究，结果显示，替吉奥联合奥沙利铂治疗晚期小肠腺癌有效率高、耐受性好，值得进一步研究。

关键词：晚期小肠癌化疗替吉奥奥沙利铂

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表皮生长因子及其受体对结肠癌干细胞的增殖调控

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胃肠病学 2013年第12期18卷 714-719页

作者：冯燕君刘倩方一宋荣峰万以叶刘建胜王海伟杜艳芝张济夏璐上海交通大学医学院附属瑞金医院消化内科 200025 江西省肿瘤医院肿瘤内三科中国科学院上海生命科学研究院/上海交通大学医学院健康科学研究所

肿瘤干细胞是肿瘤组织中一小部分具有自我更新、多向分化以及高度增殖能力的肿瘤细胞。研究发现表皮生长因子(EGF)可促进肿瘤干细胞增殖。目的:探讨EGF及其受体(EGFR)在结肠癌干细胞增殖调控中的作用。方法:结肠癌细胞株HT29、HCT116培... 详细信息

肿瘤干细胞是肿瘤组织中一小部分具有自我更新、多向分化以及高度增殖能力的肿瘤细胞。研究发现表皮生长因子(EGF)可促进肿瘤干细胞增殖。目的:探讨EGF及其受体(EGFR)在结肠癌干细胞增殖调控中的作用。方法:结肠癌细胞株HT29、HCT116培养于无血清培养基中,以EGF、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子(IGF)分别干预细胞。MTT法检测EGFR抑制剂吉非替尼对结肠癌细胞球细胞的增殖抑制作用,体外实验检测EGFR抑制剂吉非替尼、PD153035对细胞球形成的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。体内实验检测结肠癌细胞球和细胞株的成瘤能力,real-time PCR检测两者干细胞标记LGR5、Musashi-1和分化标记CK20表达。结果:EGF组HCT116细胞形成的细胞球数量显著高于空白对照、bFGF、IGF组(P<0.05)。吉非替尼能抑制HCT116细胞球细胞增殖和细胞球形成,并诱导细胞凋亡,作用呈浓度依赖性。HCT116细胞球成瘤时间较细胞株显著缩短,移植瘤体积显著增大(P<0.05)。LGR5、Musashi-1在细胞球中的表达显著高于细胞株,而CK20在细胞株中的表达显著高于细胞球(P<0.05)。结论:EGF对结肠癌细胞株HCT116、HT29形成细胞球具有促进作用。EGFR抑制剂可抑制结肠癌细胞球增殖并诱导细胞凋亡,相关作用可能与调控LGR5、Musashi-1和CK20表达有关。

关键词：结肠肿瘤结肠癌干细胞细胞球表皮生长因子细胞增殖细胞凋亡

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恶性浆膜腔积液脱落细胞中P21 ras蛋白表达状况及其意义

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世界华人消化杂志 2007年第8期15卷 893-896页

作者：宋荣峰张焜和靳文剑陈江祝金泉吕农华江西省肿瘤医院内科江西省南昌市330029 南昌大学第一附属医院消化病研究所江西省南昌市330006

目的:检测浆膜腔积液脱落细胞P21 ras蛋白表达状况,探讨其对恶性浆膜腔积液的诊断价值．方法:将新鲜浆膜腔积液离心后收集脱落细胞。取部分细胞涂片进行常规细胞学诊断,据此将积液分为良性与恶性两组．对余下脱落细胞作“标准化”处理,... 详细信息

目的:检测浆膜腔积液脱落细胞P21 ras蛋白表达状况,探讨其对恶性浆膜腔积液的诊断价值．方法:将新鲜浆膜腔积液离心后收集脱落细胞。取部分细胞涂片进行常规细胞学诊断,据此将积液分为良性与恶性两组．对余下脱落细胞作“标准化”处理,包括去除红细胞、多聚甲醛固定、调整细胞浓度、制备细胞涂片,然后进行P21 ras蛋白免疫化学染色(SP法)．结果:共108例浆膜腔积液,恶性53例,良性55例．39例恶性积液P21 ras蛋白免疫化学染色阳性(73．6％),且多为强阳性或阳性;12例艮性积液P21 ras蛋白染色阳性(21．8％),且多为弱阳性或阳性,两组间阳性率(X2=29．02,P<0．001)及阳性强度(Uc=6．786,P<0．001)的差异均有显著性统计学意义．P21 ras蛋白免疫化学染色诊断恶性积液的敏感度为73．6％,特异度为78．2％,诊断符合率达75．9％．结论:浆膜腔积液中脱落细胞P21 ras蛋白免疫化学染色在肿瘤细胞多为阳性,良性细胞多为阴性,对恶性体腔积液的诊断有较大的价值．

关键词： P21 ras蛋白浆膜腔积液免疫细胞化学染色

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