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2020年云南省鸡呼吸系统疫病病因分析

家畜生态学报 2024年第3期45卷 68-74页

作者：张振兴李占鸿王斌宋建领云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 威信县动物疫病预防控制中心云南威信657900

为了分析云南省2020年度鸡呼吸系统疫病病因,分别在昆明、红河、曲靖、大理、楚雄、昭通等地111个养鸡场采集疑似发生呼吸系统疫病鸡肺脏、脾脏、喉气管等组织混合样品111份。采用PCR检测方法对疑似样品进行副鸡禽杆菌、鸡毒支原体(MG)... 详细信息

为了分析云南省2020年度鸡呼吸系统疫病病因,分别在昆明、红河、曲靖、大理、楚雄、昭通等地111个养鸡场采集疑似发生呼吸系统疫病鸡肺脏、脾脏、喉气管等组织混合样品111份。采用PCR检测方法对疑似样品进行副鸡禽杆菌、鸡毒支原体(MG)、滑液囊支原体(MS)、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、禽流感病毒(AIV)、鼻气管鸟杆菌(ORT)等传染性疾病病原核酸检测,对部分核酸样品进行测序验证。结果表明,副鸡禽杆菌、MG、MS、NDV、IBV、ILTV、ATV、ORT的检测阳性率分别为18.92%(21/111)、10.81%(12/111)、5.41%(6/111)、4.50%(5/111)、2.70%(3/111)、39.64%(44/111)、9.00%(10/111)、18.92%(21/111);混合感染占32.43%(36/111),2种、3种和4种病原混合感染分别占18.92%(21/111)、11.71%(13/111)和1.80%(2/111)。由此可见,云南省2020年度鸡呼吸系统疾病由多种原因引起,其中以副鸡禽杆菌、ILTV、ORT为主。

关键词：鸡呼吸系统疫病进化分析阳性率

猪肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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畜牧与兽医 2013年第5期45卷 71-74页

作者：宋建领高华峰信爱国孙强王娟李华春云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

根据GenBank登录的猪肺炎支原体黏附素P97基因(U50901)序列,设计1对特异性引物和1条探针,优化了猪肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法。25μL反应体系,引物MhpF/MhpR(20μmol/L)各0.5μL,探针MhpP(20μmol/L)0.5μL为反应最佳工作浓度,... 详细信息

根据GenBank登录的猪肺炎支原体黏附素P97基因(U50901)序列,设计1对特异性引物和1条探针,优化了猪肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法。25μL反应体系,引物MhpF/MhpR(20μmol/L)各0.5μL,探针MhpP(20μmol/L)0.5μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的log值之间的线性相关系数为0.997。特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异地检测猪肺炎支原体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、乙型脑炎病毒,猪细小病毒、猪圆环病毒等病原检测无交叉反应;针对猪肺炎支原体阳性质粒标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数在0.78%～1.16%之间。用建立的实时荧光定量PCR检测方法,对40份临床样品检测,结果表明肺脏拭子与肺脏悬液阳性率完全一致,而鼻腔拭子检出率较低。

关键词：猪肺炎支原体荧光定量PCR DNA标准品

H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆与表达

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中国病毒学 2006年第1期21卷 43-46页

作者：宋建领张富强王金萍胡媛媛云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

根据已知H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因(na)序列设计、合成克隆引物。自H5N1亚型病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTMDNAPolymerase)扩增na基因,采用Invitrogen定向表达系统(ChampionTMpETdir... 详细信息

根据已知H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因(na)序列设计、合成克隆引物。自H5N1亚型病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTMDNAPolymerase)扩增na基因,采用Invitrogen定向表达系统(ChampionTMpETdirectionalTOPOexpressionsystem)进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组神经氨酸酶,分子量约53.8kDa。分析重组NA的免疫反应性和免疫原性,结果表明:重组NA能与H5N1亚型病毒抗血清发生特异性结合,且其免异动物后能诱导机体产生特异性抗体,具有良好的抗原性。

关键词：禽流感病毒 H5N1亚型神经氨酸酶表达

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加强生物安全措施降低动物疫病发生风险

上海畜牧兽医通讯 2015年第3期 79-80页

作者：字永陈宋建领云南省凤庆县畜牧局动物卫生监督所云南凤庆675900 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

随着国内养殖业的不断发展,发生了越来越多的动物传染性疫病,这给养殖业造成了巨大的损失。高致病性禽流感、猪蓝耳病等时有发生,部分养殖场出现了不明原因的产蛋下降,呼吸系统疫病频发,免疫抑制性疫病常常在临床上出现,甚至一些细菌性... 详细信息

随着国内养殖业的不断发展,发生了越来越多的动物传染性疫病,这给养殖业造成了巨大的损失。高致病性禽流感、猪蓝耳病等时有发生,部分养殖场出现了不明原因的产蛋下降,呼吸系统疫病频发,免疫抑制性疫病常常在临床上出现,甚至一些细菌性疫病投用大量抗生素治疗效果均不明显,上述问题严重影响了云南的养殖业经济效益。虽然很多动物疫病使用疫苗免疫起到了一定的预防作用,但是不能完全有效预防动物疫病的发生。

关键词：疫病发生动物疫病生物安全措施高致病性禽流感风险预防作用疫苗免疫细菌性疫病

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猪瘟的诊断与新出现的诊断技术

动物科学与动物医学 2003年第8期20卷 56-57页

作者：高华峰宋建领云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

猪瘟是目前危害养猪业发展的一种主要传染病,被国际兽疫局列为“A”类传染病。本文主要介绍目前国际上对该病的诊断方法以及今后可能用于该病的各种诊断技术。

关键词：猪瘟诊断技术免疫荧光试验细胞分离培养血清学试验

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减蛋综合征病毒套式PCR检测技术的研究

中国兽医科技 2000年第12期30卷 5-8页

作者：李文贵俞乃胜宋建领云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201 云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

从GeneBank的 1段含六邻体蛋白基因、蛋白酶基因、DNA结合蛋白基因的序列中 ,应用Primer软件设计了 2对引物。用这 2对引物在分别对反应体系成分和聚合酶链反应 (PCR)试验条件进行优化后 ,成功地建立了减蛋综合征病毒(EDSV)套式PCR检测... 详细信息

从GeneBank的 1段含六邻体蛋白基因、蛋白酶基因、DNA结合蛋白基因的序列中 ,应用Primer软件设计了 2对引物。用这 2对引物在分别对反应体系成分和聚合酶链反应 (PCR)试验条件进行优化后 ,成功地建立了减蛋综合征病毒(EDSV)套式PCR检测技术。对鹌鹑源EDSVQAVC 94株、AV xb西北分离株、AV 1 2 7国际标准株扩增结果 ,第一轮PCR得到约2 90bp的特异性片段 ,第二轮PCR得到约 90bp的片段 ,与预期的 2 89bp、89bp的设计相符合。而传染性腔上囊病病毒(IBDV)疫苗株B87、鸡新城疫病毒 (NDV)Ⅳ系疫苗株 (LaSota)和正常尿囊液等对照的扩增结果均未显示任何扩增条带 ,有很好的特异性。所建立的套式PCR检测方法具有特异、灵敏、快速的优点 ,其灵敏度比常规PCR灵敏 10 0倍 ,可检测出 0 .0 1fg的DNA模板。

关键词：减蛋综合征病毒套式PCR 诊断

牛呼吸道疾病综合征3种病菌三重TaqMan荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医科学 2024年第12期54卷 1586-1594页

作者：李富祥赵文华高华峰宋建领云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室

为建立牛呼吸道疾病综合征3种常见病原菌多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）、溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica）和牛支原体（Mycoplasma bovis）的三重TaqMan荧光定量PCR检测方法，根据3种病原菌的16S rRNA基因序列设计... 详细信息

为建立牛呼吸道疾病综合征3种常见病原菌多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）、溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica）和牛支原体（Mycoplasma bovis）的三重TaqMan荧光定量PCR检测方法，根据3种病原菌的16S rRNA基因序列设计特异性引物和探针，通过反应体系和扩增程序优化，建立了3种病原菌的三重TaqMan荧光定量PCR检测方法。特异性试验结果显示，利用建立的方法对多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌和牛支原体DNA样品的检测为阳性，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肠道沙门菌等牛常见24种细菌DNA样品的检测为阴性，表明该方法特异性较强；敏感性试验结果显示，该方法对重组质粒pMD-Past、p MD-Mann和p MD-Myco的最低检出限分别为38、45和28 copies/μL，表明该方法敏感性较高；重复性试验结果显示，该方法变异系数≤2.15%，表明该方法重复性较好。利用建立的三重TaqMan荧光定量PCR方法和文献报道的TaqMan荧光定量PCR方法平行检测43份呼吸道疾病病牛的DNA样品，结果显示，两种方法检测多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌和牛支原体的总符合率分别为100%、97.7%和100%。结果表明，本研究建立的三重TaqMan荧光定量PCR方法为牛呼吸道疾病综合征3种常见病原菌的高通量快速检测提供了有效的技术支撑。

关键词：多杀性巴氏杆菌溶血性曼氏杆菌牛支原体牛呼吸道疾病综合征 TaqMan荧光定量PCR

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2016年-2020年云南省部分猪场猪瘟免疫抗体检测与分析

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动物医学进展 2023年第1期44卷 141-144页

作者：张振兴王斌朱丽华宋建领云南省畜牧兽医科学院/云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 威信县动物疫病预防控制中心云南威信657900 玉龙县龙蟠乡畜牧产业发展服务中心云南玉龙674100

为了解2016年1月-2020年12月云南省猪场猪瘟疫苗免疫效果,采集云南省11个州(市)198个猪场猪瘟疫苗免疫后14 d~21 d血清样本4622份。应用ELISA方法进行猪瘟病毒抗体检测,分析不同州(市)、不同年份的猪瘟病毒抗体阳性率。结果显示,4622份... 详细信息

为了解2016年1月-2020年12月云南省猪场猪瘟疫苗免疫效果,采集云南省11个州(市)198个猪场猪瘟疫苗免疫后14 d~21 d血清样本4622份。应用ELISA方法进行猪瘟病毒抗体检测,分析不同州(市)、不同年份的猪瘟病毒抗体阳性率。结果显示,4622份血清样品中,阳性样品4078份,阴性样品544份,总体猪瘟病毒抗体阳性率为88.23%。其中,保山市猪瘟病毒抗体阳性率最高,其次为大理州和西双版纳州,猪瘟病毒抗体阳性率分别为98%、95.57%和95.26%;德宏州猪瘟病毒抗体阳性率最低,为60.81%。不同年份连续5年猪瘟病毒抗体检测中,猪瘟病毒抗体阳性率呈现波浪形变化,其中2017年度猪瘟病毒抗体阳性率最高,全年共检测血清样品1156份,阳性样品1054份,猪瘟病毒抗体阳性率为91.18%;2018年度猪瘟病毒抗体阳性率最低,全年度共检测血清样品845份,阳性样品720份,猪瘟病毒抗体阳性率为85.21%。结果表明,云南省猪场的总体猪瘟病毒抗体阳性率较高,但是各州(市)猪瘟病毒抗体阳性率存在差异,各年度猪瘟病毒抗体阳性率不稳定。为了有效防控猪瘟疫情发生,建议定期做好猪瘟病毒血清学、病原学监测,实时调整猪瘟疫苗免疫程序,对猪瘟病毒抗体阳性率低的猪场加强一次猪瘟疫苗免疫。

关键词：猪瘟免疫抗体检测酶联免疫吸附试验

H5N1和H9N2亚型禽流感病毒型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的建立

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中国兽医科技 2005年第11期35卷 879-882页

作者：宋建领张富强胡媛媛王金萍云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

采用禽流感病毒多克隆抗体及型特异性单克隆抗体,研究建立了型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5N1和H9N2亚型禽流感病毒。优化了反应条件,确定了包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,对该方法的敏感性、特异性、重复性... 详细信息

采用禽流感病毒多克隆抗体及型特异性单克隆抗体,研究建立了型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5N1和H9N2亚型禽流感病毒。优化了反应条件,确定了包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,对该方法的敏感性、特异性、重复性及稳定性进行了分析,并与病毒分离鉴定的结果进行了比较。结果表明,该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于临床样品及鸡胚、细胞培养物中禽流感病毒的检测。

关键词：禽流感病毒型特异性抗原捕捉ELISA