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基因Ⅶ型NDV弱毒株感染性克隆的构建及病毒拯救

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基因Ⅶ型NDV弱毒株感染性克隆的构建及病毒拯救

作者：孟令宅河北农业大学

学位级别：硕士

新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的禽类的一种高度接触性、急性、烈性传染病,世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的传染病,我国将其列为一类动物疫病。NDV只有单一血清型,但存... 详细信息

新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的禽类的一种高度接触性、急性、烈性传染病,世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的传染病,我国将其列为一类动物疫病。NDV只有单一血清型,但存在多种基因型,目前我国主要流行的是Class Ⅱ类型中基因Ⅶ毒株,常规疫苗株B1、Clone30、La Sota及V4疫苗株属于基因Ⅰ型和Ⅱ型,不能有效防控基因Ⅶ型毒株。因此,应迫切研发与当前流行株基因型一致的新型疫苗。基于此,本研究对一株NDVHB株进行了全基因组测序,以此为基础建立了HB株的反向遗传操作平台,并对其F蛋白进行改造,旨在为研发基因Ⅶ型NDV弱毒疫苗提供科学依据。从河北省某发病鸡场的临床样本中检测到一株新城疫病毒,命名为HB,采用RT-PCR方法对HB株的全基因组序列进行分段扩增,并对其基因序列进行结构特性分析及同源进化分析。结果表明HB株基因组全长为15192 bp,基因组3’端存在长为55 nt的引导序列,5’端存在长为114 nt的尾随序列,主要编码的6种结构蛋白,包括基质蛋白（M）、融合蛋白（F）、血凝素-神经氨酸酶蛋白（HN）、核衣壳蛋白（NP）、磷蛋白（P）、以及RNA依赖性RNA聚合酶蛋白（L）,基因组排列顺序为3’-NP-P-M-F-HN-L-5’。全基因组遗传进化分析表明,HB株属于Class Ⅱ中的基因Ⅶ型毒株,与鸭源新城疫毒株BP01、Fujian/FP/02、MMd/CH/LGD/1/2005核苷酸的同源性最高（99.1%～99.2%）,进化树上处于同一分支;与中国广泛使用的V4,Mukteswar和La Sota等疫苗株核苷酸的同源性较低（82.9%～85.6%）,进化树上处于不同分支。基于F基因的系统进化树显示,HB株属于基因Ⅶd亚型,是目前我国流行毒株中的优势亚型毒株。通过与其它毒株的序列进行比对,发现在F蛋白的信号肽,七肽重复区和跨膜结构域中出现了 4、16和2个氨基酸突变,在HN蛋白的功能结构域和中和表位分别出现1和5个氨基酸突变,这些关键位点的突变与病毒的吸附性及免疫逃避有关。应用反向遗传操作技术将HB株全长cDNA分为外部基因质粒（M、F及HN）和内部基因质粒（NP、P及L）两部分构建,通过同义突变将L蛋白的3100位点处的碱基A突变为T作为遗传标记,用以与野毒进行区分;利用融合PCR技术将F蛋白的112～117裂解位点的氨基酸序列突变为弱毒株La Sota裂解位点序列,同时构建了三个辅助质粒PCI-NP,PCI-P,PCI-L,将内部基因质粒、外部基因质粒与三个辅助质粒共转染BSR-T7/5细胞进行病毒拯救,并通过细胞病变、遗传标记检测、基因测序及间接免疫荧光等试验技术对拯救病毒进行鉴定,结果表明,rHB株能在BHK-21细胞上引起典型的细胞病变（CPE）,引入的遗传标记在传代过程中可以稳定遗传,F蛋白裂解位点处氨基酸序列突变成功,病毒拯救成功。对拯救病毒的生长特性进行分析,表明rHB株与HB株在BHK-21细胞上具有相似的生长特性。NDV HB株感染性克隆的成功构建可为进一步研究NDV的致病机制和研发新型基因工程疫苗提供技术平台。

关键词：新城疫病毒基因Ⅶ型基因组反向遗传操作感染性克隆

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新城疫疫苗研究现状

动物医学进展 2021年第2期42卷 107-111页

作者：孟令宅庞洪泽赵卓赵款袁万哲河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省兽医生物技术创新中心河北保定071001 北京华夏兴洋生物科技有限公司北京102629

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类的一种急性烈性传染病,严重危害养禽业的发展。在疫苗接种免疫压力下,NDV演化出不同的基因型,且各基因型毒株之间不能较好地提供交叉保护,导致临床上多见非典型新城疫与高抗体家禽发生NDV感染... 详细信息

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类的一种急性烈性传染病,严重危害养禽业的发展。在疫苗接种免疫压力下,NDV演化出不同的基因型,且各基因型毒株之间不能较好地提供交叉保护,导致临床上多见非典型新城疫与高抗体家禽发生NDV感染。目前,疫苗免疫仍是预防该病的重要措施,随着其病原学与分子生物学技术的发展,研究者研发了不同类型的ND疫苗。论文就新城疫病毒的病原分子特征、传统疫苗及新型基因工程疫苗的研究现状及发展前景进行综述,旨在为我国新城疫的防控及新城疫疫苗的研发提供一定的参考。

关键词：新城疫病毒传统疫苗基因工程疫苗

猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株RT-PCR鉴别诊断方法的建立

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河北农业大学学报 2018年第6期41卷 98-103页

作者：孟令宅张哲刘陈针玉赵卓刘涛袁万哲河北农业大学动物医学院河北保定071001 北京生泰尔科技股份有限公司北京102600 北京华夏兴洋生物科技有限公司北京102629 石家庄市动物卫生监督所河北石家庄050000 河北省兽医生物技术工程技术研究中心河北保定071001

根据GenBank登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)、经典型猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)、与NADC 30-like猪繁殖与呼吸综合征病毒(NADC 30-like PRRSV)Nsp2基因的核苷酸序列,设计了1对用于扩增3种不同毒株的RT-PCR引物,... 详细信息

根据GenBank登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)、经典型猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)、与NADC 30-like猪繁殖与呼吸综合征病毒(NADC 30-like PRRSV)Nsp2基因的核苷酸序列,设计了1对用于扩增3种不同毒株的RT-PCR引物,建立了HP-PRRSV、C-PRRSV、NADC 30-like PRRSV等3种毒株RT-PCR鉴别诊断的方法,该方法可扩增出1072bp(C-PRRSV),985bp(HP-PRRSV)与682bp(NADC 30-like PRRSV)的特异性片段,而对猪瘟病毒,伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型检测均为阴性。敏感性试验结果表明,对HP-PRRSV,C-PRRSV、NADC 30-like PRRSV的最低核酸检出量分别为385,269,402pg,对来自临床的39份组织样品进行检测,检测阳性率为51%。该方法可用于3种不同PRRSV毒株临床快速检测与流行病学调查。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性经典型 NADC 30-like 鉴别

基于几何约束优化的重复控制器及PMSM电流谐波抑制应用

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电工技术学报 2024年第4期39卷 1059-1073页

作者：朱元朱醴亭肖明康孟令同济大学汽车学院上海201804

重复控制器凭借其具有多个谐振峰而广泛应用于电流谐波抑制领域,然而在实际电机控制系统中,由于系统采样频率固定而电流谐波频率随电机转速而变化,会导致重复控制器中出现分数阶延时环节,而该环节在实际控制器中无法实现。对此,该文针... 详细信息

重复控制器凭借其具有多个谐振峰而广泛应用于电流谐波抑制领域,然而在实际电机控制系统中,由于系统采样频率固定而电流谐波频率随电机转速而变化,会导致重复控制器中出现分数阶延时环节,而该环节在实际控制器中无法实现。对此,该文针对现有分数阶处理方法进行讨论,分析了插值逼近方法中插值系数对重复控制器整体频率特性的作用,据此提出基于几何约束优化的分数阶重复控制器,通过优化各插值系数,电机在全转速范围内都可以保证谐振频率和电流谐波频率相吻合,并且谐振峰值更符合电机谐波组成规律;还分析了滤波器所处反馈回路位置对频率特性的影响,作为组合滤波器设计依据;为保证系统稳定,对包含PI、重复控制器以及离散电机模型的电流控制系统进行稳定性分析,并作为控制参数选取依据。最后,通过台架实验验证了该文所提出的方法的谐波抑制性能是更优的。

关键词：分数阶延时环节重复控制器控制稳定性谐波抑制永磁同步电机(PMSM)

多尺度柔性钛酸钡/聚二甲基硅氧烷复合材料的制备及介电性能优化

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硅酸盐学报 2024年第4期52卷 1288-1300页

作者：胡海龙孟令晗约索夫中南大学航空航天技术研究院长沙410083

介电电容器具有重量轻、充放电速度快、功率密度高等优点,在航空航天储能器件领域的作用日益凸显。采用模板法与电泳沉积法相结合制备了多尺度结构的柔性复合电介质材料钛酸钡/聚二甲基硅氧烷(BTO/PDMS),研究了其微观无序、有序结构对... 详细信息

介电电容器具有重量轻、充放电速度快、功率密度高等优点,在航空航天储能器件领域的作用日益凸显。采用模板法与电泳沉积法相结合制备了多尺度结构的柔性复合电介质材料钛酸钡/聚二甲基硅氧烷(BTO/PDMS),研究了其微观无序、有序结构对介电性能的影响,并通过理论模拟对其介电与介电强度性能进行了系统分析,为提高复合电介质储能密度的研究提供了理论铺垫。结果表明:当BTO含量达到10.16%(质量分数)时,复合材料的相对介电常数在1000 Hz时提升到85(纯PDMS的相对介电常数仅为2.75);当BTO的体积分数在5%∼20%之间变化时,介电常数随BTO含量的增加呈线性增加;此外,通过调控BTO形貌的有序定向结构(如四方或蜂窝定向结构),介电性能得到提升,某些特定方向的介电强度性能显著提高;将聚偏氟乙烯(PVDF)和PDMS复合形成核壳结构,常数略有提升,填料与基体的介电性能差异减小,介电强度性能得到提升。

关键词：复合材料多尺度结构介电性能有限元理论柔性器件

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生态环境替代性修复责任研究

生态环境替代性修复责任研究

作者：孟令琪山东师范大学

学位级别：硕士

替代性修复责任在新时期生态文明建设中应当起到重要作用,但囿于法律规定不完善以及法律理念不统一等原因,司法实践中出现了适用混乱的局面和偏离环境修复目标的事实。替代性修复制度的完善应该坚持以修复为中心的环境司法理念,从替代... 详细信息

替代性修复责任在新时期生态文明建设中应当起到重要作用,但囿于法律规定不完善以及法律理念不统一等原因,司法实践中出现了适用混乱的局面和偏离环境修复目标的事实。替代性修复制度的完善应该坚持以修复为中心的环境司法理念,从替代性修复责任的立法目的即实现任何环境损害皆可修复的目标出发,实现环境公共利益最大化。第一章为生态环境修复责任和替代性修复责任的理论分析。首先明确生态环境修复责任的内涵及其特殊性,表明生态环境修复责任的独立必要性。其次从替代性修复责任的立法目的和我国修复责任的分类对其内涵进行论述。认为替代性修复责任的主要作用为完善环境修复方式,使任何环境损害都有对应的救济手段。第二章对替代性修复责任的立法和司法进行分析。在立法上,按照相关法律适用范围的不同分为国家规定和地方规定两个层面,总结出规律和可以作为将来相关法律修改的启示。在司法上,对收集到的替代性修复案例从案例分布和判决理由两个方面进行分析,总结出替代性修复责任的判决规律以及建立替代性修复方案的模型。第三章对替代性修复责任在理论和实践中存在的问题进行综合梳理。首先在理论上,民法中“恢复原状”与环境责任体系中“生态环境修复责任”混同,难以实现环境修复的目标。其次实践中,替代性修复责任的适用条件不清,司法解释中“无法完全修复”存在多种解读,更有环境侵权人不具有修复能力能否作为适用条件以及环境自我修复后是否需要开展替代性修复等特殊情形。最后,间接补偿型替代性修复方案以及替代性修复费用被高频率使用使得替代性修复方案有逐渐偏离环境修复目标的趋势。第四章对上文存在的问题提出相应的建议,是本文的重点章节。首先确定生态环境修复责任体系的独立性,以适应环境侵权的特殊性,进而实现环境修复的目的。其次对替代性修复的概念提出本文的观点。再次,确定替代性修复的适用情形,将“永久性损害”纳入替代性修复的范围,以实现环境修复的闭环;对于环境侵权人不具有修复能力的情形,应当区分法人和自然人主体,分别设置不同的判断标准;受损生态环境自我修复后应当以其他方式承担修复责任;“技改”不利于已受损环境的修复,因此不宜作为替代性修复方案。关于制定合理的替代性修复方案应当确定直接补偿型替代性修复优先于替代性修复费用和间接补偿型替代性修复。此外替代性修复方案还要符合目标可达性、技术可靠性、使受损生态环境具有较强的自我恢复能力。最后对替代性修复责任的履行进行程序设计,以保障其产生良好的修复效果。

关键词：生态环境修复责任替代性修复责任替代性修复方案

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ABS/BN导热复合材料的制备及性能研究

ABS/BN导热复合材料的制备及性能研究

作者：孟令功中北大学

学位级别：硕士

含芴基的磺化聚芳醚酮砜/功能化MOFs杂化型质子交换膜的制备与性能研究

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含芴基的磺化聚芳醚酮砜/功能化MOFs杂化型质子交换膜的制备与性...

作者：孟令鑫长春工业大学

学位级别：硕士

质子交换膜（PEMs）是决定质子交换膜燃料电池（PEMFCs）的电化学性能和寿命的重要因素之一。磺化芳香族聚合物因为具有优异的力学性能、化学稳定性和热稳定性成为最有希望被开发应用的PEMs材料。但是,高离子交换容量的磺化芳香族聚合... 详细信息

质子交换膜（PEMs）是决定质子交换膜燃料电池（PEMFCs）的电化学性能和寿命的重要因素之一。磺化芳香族聚合物因为具有优异的力学性能、化学稳定性和热稳定性成为最有希望被开发应用的PEMs材料。但是,高离子交换容量的磺化芳香族聚合物在拥有高H传导率的同时会导致PEMs的尺寸稳定性变差。因此,通过在磺化芳香族聚合物中引入具有孔径可调、易功能化和可容纳客体分子的金属有机物骨架（MOFs）有望获得具有高H传导率和优异尺寸稳定性的PEMs。本文从分子结构化设计出发,制备了含芴基的磺化聚芳醚酮砜（F-SPAEKS）,并设计了三种不同功能化MOFs,通过物理共混的方式制备了三种不同系列的杂化膜,研究每种功能化MOFs对杂化膜性能的影响。在ZIF-8的内部引入具有高效质子传导能力的1-丁基磺酸-3-甲基咪唑三氟甲烷磺酸盐离子液体（IL）并通过磺化聚多巴胺（SPDA）进行纳米衣包覆制备ZIF-8@IL-SPDA。通过在F-SPAEKS中引入ZIF-8@IL-SPDA制备了一系列的杂化膜。ZIF-8@IL-SPDA内部在IL的作用下能够形成长程有序的质子传输通道。同时,ZIF-8@IL-SPDA与聚合物主链之间的相互作用既能够促进膜内的质子传输又能够提高膜的力学性能。其中,FSZIS-1.5（ZIF-8@IL-SPDA在F-SPAEKS中的添加量为1.5wt%）具有最高的H传导率和电池性能。FSZIS-1.5的H传导率达到了149.87 m S cm（80 ~oC,100%RH）,功率密度为818 mW cm。并且其尺寸稳定性低于14%。为了进一步提高质子传输位点在MOFs上的稳定性和杂化膜的H传导率,以Ui O-66-NH为模板通过席夫碱反应将磷酸基团固定到MOFs上制备POH-Ui O-66-NH（PUIN）。并将PUIN引入到F-SPAEKS中制备杂化膜。通过PUIN与F-SPAEKS之间的静电相互作用和氢键网络构建了连续的质子传输通道促进质子传输并且增强了杂化膜的力学性能。其中,FSPUIN-5（PUIN在F-SPAEKS中的添加量为5wt%）的H传导率最高为174.22 m S cm（80 ~oC,100%RH）,FSPUIN-5的功率密度为504 m W cm。此外,FSPUIN-5在具有高的H传导率的同时其溶胀率仍低于14%。为了进一步通过增加MOFs的质子源来提高杂化膜的H传导率,通过1,3-丙磺酸内酯开环在PUIN上的氨基位点上引入磺酸基团制备了SOH-POH-Ui O-66-NH（SPUIN）。SPUIN上的-SOH与-POH能够增加杂化膜内的质子传输位点和质子源。将SPUIN引入F-SPAEKS中制备了一系列杂化膜。其中,FSSPU-7（SPUIN在F-SPAEKS中的添加量为7wt%）表现出了最优异的电化学性能。在80 ~oC和100%相对湿度下FSSPU-7的H传导率被提高到了247.38 m S cm,功率密度也达到了1140m W cm。同时,FSSPU-7的溶胀率低于17%。以上的结果表明,通过在F-SPAEKS中引入功能化MOFs有望制备出电化学性能和理化性能优异的PEMs。

关键词：燃料电池质子交换膜磺化聚芳醚酮砜功能化MOFs 质子传导率

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基于翼型风洞实验的湍流模型参数同化研究

基于翼型风洞实验的湍流模型参数同化研究

作者：孟令庭扬州大学

学位级别：硕士