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玉米大斑病菌丝氨酸棕榈酰转移酶StLCB1和StLCB2对致病性的调控作用

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玉米大斑病菌丝氨酸棕榈酰转移酶StLCB1和StLCB2对致病性的调控作...

作者：孙贺贺河北农业大学

学位级别：硕士

玉米大斑病(Northern Corn Leaf Blight)是玉米上最主要的叶斑病之一,常造成玉米严重减产,导致经济上的重大损失。病害传播过程中,玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)主要依靠分生孢子粘附于寄主叶片表皮,萌发产生芽管后,其末端膨大形... 详细信息

玉米大斑病(Northern Corn Leaf Blight)是玉米上最主要的叶斑病之一,常造成玉米严重减产,导致经济上的重大损失。病害传播过程中,玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)主要依靠分生孢子粘附于寄主叶片表皮,萌发产生芽管后,其末端膨大形成附着胞。附着胞内不断积累膨压,并分泌胞壁降解酶,最终形成侵入钉,在机械压力作用下穿透寄主表皮,完成侵染过程。鞘脂是真核细胞的基本成分,其代谢产物赋予膜重要的结构特性,也是多种细胞过程的调节分子。鞘氨醇(Sphingosine,Sph)是鞘脂代谢途径的关键中间产物,由丝氨酸棕榈酰转移酶(Serine palmitoyl transferase,SPT)催化合成,SPT也是该合成途径的限速酶。本课题组前期发现,丝氨酸棕榈酰转移酶特异性抑制剂多球壳菌素(Myriocin)处理可引起大斑病菌附着胞发育异常。本研究获得了病菌附着胞形成过程中的代谢组数据,发现在附着胞形成时期鞘氨醇含量显著上升。因此,利用鞘氨醇激酶特异性抑制剂SKI Ⅱ处理以增加鞘氨醇的积累,并创制了限速酶SPT催化亚基LCB1的过表达突变体和LCB2的RNAi突变体,对鞘脂与大斑病菌致病性调控的关系进行研究。主要研究成果如下:1.在JGI公布的玉米大斑病菌基因组数据中搜索到ID为167454的LCB1编码基因,命名为StLCB1。该基因全长3987bp,CDS序列大小为1527 bp,编码509个氨基酸;ID为73160的LCB2编码基因,命名为StLCB2。其全长为3974bp,CDS序列大小为1974bp,编码658个氨基酸。2.鞘氨醇激酶抑制剂(SKI Ⅱ)处理病菌分生孢子,结果表明,在分生孢子发育的第6h时,附着胞的形成率在一定范围内随着抑制剂浓度的增加而增加,浓度过高反而抑制附着胞的发育。在500μmol/L SKI Ⅱ的作用下效果最好,附着胞形成率为93.2%,均高于对照组的75.5%。在致病性试验中,实验组的早期侵染点数为353高于对照组的侵染点数182。说明鞘氨醇和鞘氨醇-1-磷酸之间的平衡对分生孢子侵染结构的发育有重要的影响。3.通过PEG介导的原生质体转化技术,将StLCB1过表达和StLCB2沉默载体分别转化玉米大斑病菌野生型菌株01-23,经过潮霉素B抗性筛选、PCR、qRT-PCR和Western-blot验证,获得2株3HA::eGFP::StLCB1超表达突变体,命名为pBARKS1-StLCB1-1和pBARKS1-StLCB1-2。经过潮霉素B抗性筛选、PCR、半定量RT-PCR、qRT-PCR验证,获得3株StLCB2沉默突变体,分别命名为RNI-StLCB2-1、RNI-StLCB2-30 和 RNI-StLCB2-49。qRT-PCR 分析表明,pBARKS1-StLCB1突变体中StLCB1的表达量分别为WT的3.1和4.3倍。RNI-StLCB2沉默突变体中StLCB2的表达量分别为WT的0.51,0.35和0.47倍。4.与WT菌株相比,StLCB1过表达突变体的气生菌丝致密,菌落黑褐色,胞内黑色素含量是WT的1.39倍;胞外黑色素含量是WT的1.34倍。菌丝隔膜平均间距是WT的1.71倍;StLCB2沉默突变体气生菌丝细长致密,呈毡状,菌落呈现灰白色,胞内黑色素含量是WT的0.18倍;胞外黑色素含量是WT的0.35倍左右。几乎不产生分生孢子,菌丝隔膜平均间距是WT的4倍左右,且生长速度减缓。说明StLCB1和StLCB2基因可以调控大斑病菌的菌丝生长和分生孢子发育。5.通过玻璃纸诱导,观察附着胞形成、穿透情况,并利用感病寄主检测其致病性。结果表明,在诱导第24h时,StLCB1过表达突变体附着胞形成率为51.3%,高于WT附着胞形成率30.2%,在诱导第48h时,穿透率为30.1%低于WT的66.4%;StLCB2沉默突变体在诱导24h时,菌丝末端膨大率仅为3.86%,在诱导第48h时,其穿透率为6.72%,均远远低于WT。在感病寄主B73玉米自交系上,接种了StLCB1过表达和StLCB2沉默突变体的玉米叶片早期侵染点数分别为137和37,均低于接种WT的侵染点数253个;接种12d后,玉米叶片上均出现黄褐色坏死状病斑,突变体的叶片发病面积较小,尤其是StLCB2沉默突变体。说明StLCB1和StLCB2基因在调控附着胞发育和致病性方面发挥了重要作用。6.对突变体和WT的鞘氨醇含量进行测定,结果发现StLCB1突变体的鞘氨醇含量相比WT略有升高,但不明显;StLCB2沉默突变体的鞘氨醇含量下降至WT的0.79倍。qRT-PCR检测发现,在StLCB1超表达突变体中,StLCB2基因的表达量没有明显变化;在StLCB2沉默突变体中,StLCB1基因的表达量下降至WT的0.65倍。说明StLCB1和StLCB2并不存在功能冗余,而是相互影响,协同调控鞘

关键词：玉米大斑病菌 SPT 鞘氨醇侵染能力

玉米大斑病菌蛋白激酶A催化亚基StPKA-C1/C2的表达与互作蛋白筛选

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农业生物技术学报 2022年第10期30卷 1976-1986页

作者：武建颖张燕孙贺贺赵玉兰董金皋申珅郝志敏华北作物改良与调控国家重点实验室河北农业大学生命科学学院/河北省植物生理与分子病理学重点实验室河北农业大学植物保护学院

蛋白激酶A (protein kinase A, PKA)是真核细胞cAMP信号转导途径的核心元件，通过磷酸化多种活性蛋白调节丝状真菌的生长、发育及致病等生理过程。为明确玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)PKA可能的互作蛋白，进一步解析其作用的分子... 详细信息

蛋白激酶A (protein kinase A, PKA)是真核细胞cAMP信号转导途径的核心元件，通过磷酸化多种活性蛋白调节丝状真菌的生长、发育及致病等生理过程。为明确玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)PKA可能的互作蛋白，进一步解析其作用的分子机制，本研究以玉米大斑病菌cDNA作为模板，扩增StPKA-C1/2基因编码区的完整序列，构建pGS21T-StPKA-C1/2原核表达重组载体。利用大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统以异丙基β-D-硫代腺苷(isopropyl β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)作为诱导物诱导表达并通过亲和层析法纯化获得融合蛋白GST-StPKA-C1/2。通过GST pull-down实验筛选玉米大斑病菌中与StPKA-C1/C2有互作关系的蛋白质，利用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)对所得蛋白质进行分析。结果表明，与StPKA-C1/2互作的蛋白中已有功能注释的蛋白包括催化活性蛋白、酶调节活性蛋白、运输活性蛋白、电子载体蛋白、分子伴侣蛋白、结构分子蛋白及代谢酶等。Venn分析发现，与StPKAC1与StPKA-C2共有互作蛋白52个，仅与StPKA-C1互作的蛋白有17个，仅与StPKA-C2互作的蛋白有18个。其中，靶蛋白SETTUDRAFT＿168881作为延伸因子(elongation factor G, EFG)家族中的一员，可能调控菌丝生长。靶蛋白SETTUDRAF＿37808属于丝束蛋白(Fimbrin)家族，可能参与调控肌动蛋白细胞骨架、氧化应激反应和形态发生，推测StPKA-C1/2通过与这些靶蛋白相互作用发挥重要生物学功能。本研究初步明确了玉米大斑病菌StPKA-C1/2的潜在互作蛋白，为进一步解析玉米大斑病菌PKA调控病菌致病性的分子机制提供了理论基础。

关键词：玉米大斑病菌蛋白激酶A (PKA) 原核表达 GST pull-down 互作蛋白

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抗(感)谷瘟病谷子品种内生菌多样性分析

华北农学报 2022年第5期37卷 187-193页

作者：刘佳悦贾丽霞王苗苗孙东辉孙贺贺郝志敏李志勇河北省农林科学院谷子研究所河北石家庄053000 河北农业大学生命科学学院河北保定071001 河北省农林科学院农业信息与经济研究所河北石家庄050051 邢台现代职业学校河北邢台054000

为了揭示不同品种以及不同器官中内生菌的多样性特征,初步明确内生菌群落结构与宿主品种及器官类型的相关性。以感谷瘟病品种沙湾谷子、冀谷22和抗谷瘟病品种小青谷、石榴子为材料,分别取植株的茎、叶片、叶鞘,通过基于16S rDNA V3—V4... 详细信息

为了揭示不同品种以及不同器官中内生菌的多样性特征,初步明确内生菌群落结构与宿主品种及器官类型的相关性。以感谷瘟病品种沙湾谷子、冀谷22和抗谷瘟病品种小青谷、石榴子为材料,分别取植株的茎、叶片、叶鞘,通过基于16S rDNA V3—V4区的高通量测序进行微生物多样性分析。结果显示,感病品种与抗病品种内生菌物种组成具有一定差异性,所用供试样本中,门水平优势类群均为变形菌门、放线菌门,拟杆菌门、绿弯菌门、粘菌门、厚壁菌门次之。Alpha多样性分析表明,感病品种(沙湾谷子、冀谷22)叶片内生菌丰富度较高;PCoA分析则表明,器官类型比品种对内生菌群落结构影响更大。物种组成分析表明,感病品种沙湾谷子及冀谷22含有与小青谷、石榴子(抗谷瘟病)差异较大的内生菌群,感谷瘟病品种(沙湾谷子、冀谷22)叶片都具有Entotheonellaeota;抗谷瘟病品种则在叶鞘中均具Hydrogenedentes。明确了感、抗谷瘟病品种谷子及各个品种的不同器官内生菌的多样性及群落结构具有一定差异,器官类型比品种对内生菌群落结构的影响更大。

关键词：谷子谷瘟病内生菌多样性

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坚持人民至上的民主逻辑及其实现

学习与探索 2024年第4期 17-23页

作者：孙贺傅孝天吉林大学马克思主义学院

坚持人民至上深刻彰显了社会主义民主政治的本质,内嵌着人民当家作主的民主逻辑。人民民主的核心要义内在规定了人民至上生成的理论必然,只有政治上实行人民民主的马克思主义政党才能在长期执政过程中形成人民至上的理论认识和政治主张... 详细信息

坚持人民至上深刻彰显了社会主义民主政治的本质,内嵌着人民当家作主的民主逻辑。人民民主的核心要义内在规定了人民至上生成的理论必然,只有政治上实行人民民主的马克思主义政党才能在长期执政过程中形成人民至上的理论认识和政治主张;坚持人民至上落实到实践中是依靠民主制度维系和保证的,人民当家作主制度安排为坚持人民至上奠定了政治前提;在长期实践中形成的全过程人民民主丰富和拓展了人民至上的实现方式,厚植了坚持人民至上的民主底色。

关键词：坚持人民至上人民民主人民当家作主

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Our New School Life

中学生英语 2013年第27期 14-14页

作者：孙贺贺杨淑玲山东省汶上县汶上镇第二中学九年级一班山东省汶上县汶上镇第二中学

编者注:为了提高同学们的英语写作水平,使大家在中考中立于不败之地,应广大师生的要求,我们开辟了"学生习作名师点评"栏目。同学们如果想让自己的英语习作得到名师的点评,请邮寄给我们。老师们如果发现自己学生的优秀习作需推荐的话,请... 详细信息

编者注:为了提高同学们的英语写作水平,使大家在中考中立于不败之地,应广大师生的要求,我们开辟了"学生习作名师点评"栏目。同学们如果想让自己的英语习作得到名师的点评,请邮寄给我们。老师们如果发现自己学生的优秀习作需推荐的话,请按栏目要求邮寄给我们。

关键词： School 山东省学生习作 Our New School Life 汶上县汶上镇

中国式现代化中的“科技—现代化”理论与实践创新

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复旦马克思主义评论

复旦马克思主义评论 2024年第1期 47-58+230-231页

作者：孙贺吉林大学马克思主义学院

现代化是近代以来人类社会的共同选择,科技革命是影响现代化进程的关键变量,人类现代化的历史遵循“科技—现代化”的演进逻辑。中国共产党历来突出科技在中国式现代化进程中的地位和作用,不断深化对“科技—现代化”理论的认识边界,持... 详细信息

现代化是近代以来人类社会的共同选择,科技革命是影响现代化进程的关键变量,人类现代化的历史遵循“科技—现代化”的演进逻辑。中国共产党历来突出科技在中国式现代化进程中的地位和作用,不断深化对“科技—现代化”理论的认识边界,持续推进“科技—现代化”理论创新,在理论与实践有机互动中不断赋予“科技—现代化”理论以鲜明的中国特色,推动中国式现代化进入全面建设社会主义现代化国家新征程。“科技—现代化”理论框架不仅解释了中国式现代化何以可能的问题,还对中国式现代化的未来予以深刻启示。新时代新征程,要坚持党对“科技—现代化”的集中统一领导,发挥新型举国体制优势,牢牢占领科技制高点,推动中国式现代化行稳致远。

关键词：中国式现代化 “科技—现代化” 新型举国体制

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以科学完备的激励体系促进干部担当作为

国家治理 2024年第7期 14-21页

作者：孙贺吉林大学马克思主义学院

新时代以来,为把干部的积极性引导好、发挥好、保护好,我们党在实践探索中构建了以大力培养造就新时代好干部的基础性激励、把新时代的好干部充分选用起来的公平性激励、在重大斗争中发现干部的鼓励性激励、坚持严管就是厚爱的约束性激... 详细信息

新时代以来,为把干部的积极性引导好、发挥好、保护好,我们党在实践探索中构建了以大力培养造就新时代好干部的基础性激励、把新时代的好干部充分选用起来的公平性激励、在重大斗争中发现干部的鼓励性激励、坚持严管就是厚爱的约束性激励、推动干部能下能出的逆向性激励和保护干部干事创业的积极性的包容性激励等为主要内容的激励体系,贯穿干部培养、选用、发现、管理、调整、保护的各个方面和全过程,体现了鲜明的问题导向和系统思维,为做好新时代干部激励工作提供了基本遵循。

关键词：干部队伍建设激励体系担当作为

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本科提前批：招生类别丰富，录取规律明显

招生考试通讯(高考版) 2024年第1期 34-37页

作者：孙贺东北大学招生办公室

本科提前批在志愿设置、录取时间、录取规则及院校（专业）等方面与普通批次有着较大差别。受就业大环境的影响，近年来，本科提前批受到了众多考生及家长的格外关注，把握好提前批的录取规律和机会，不仅能够让考生升入理想的院校和专...

本科提前批在志愿设置、录取时间、录取规则及院校（专业）等方面与普通批次有着较大差别。受就业大环境的影响，近年来，本科提前批受到了众多考生及家长的格外关注，把握好提前批的录取规律和机会，不仅能够让考生升入理想的院校和专业，而且能够实现考生高考分数的效益最大化和综合素质的最有利发挥。

关键词：

建筑经济管理中全过程工程成本造价的重要性和应用研究

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中国集体经济 2024年第17期 63-66页

作者：孙贺青岛昆泉建设工程有限公司

建设项目规模不断扩大,对于各项技术要求也逐渐严格,使得建筑市场领域内竞争日趋激烈,建筑经济管理在企业发展中的重要性越来越明显。在现代建筑工程项目成本控制中,全过程造价管理的应用效果优势明显,能够全程把控建筑工程的各个环节,... 详细信息

建设项目规模不断扩大,对于各项技术要求也逐渐严格,使得建筑市场领域内竞争日趋激烈,建筑经济管理在企业发展中的重要性越来越明显。在现代建筑工程项目成本控制中,全过程造价管理的应用效果优势明显,能够全程把控建筑工程的各个环节,保障工程的整体效益,提升建筑经济管理水平。基于此,文章主要分析了全过程工程成本造价管理在建筑经济管理中的重要性,探讨了建筑造价管理中存在的风险,并提出全过程造价管理在经济管理中的应用。

关键词：建筑经济管理全过程工程成本造价控制重要性分析应用研究