检索结果-南通市图书馆

作者：孙益春东北农业大学

学位级别：硕士

肝片吸虫病是由片形科(Fasciolidae)、片形属(Fasciola)的肝片吸虫(Fasciola hepatica)寄生于人和牛、羊等肝脏、胆管内,引起肝炎、胆管炎以及全身性营养障碍的一种寄生虫病,世界卫生组织(WHO)已将其列为重要的人兽共患病之一。据统计,... 详细信息

肝片吸虫病是由片形科(Fasciolidae)、片形属(Fasciola)的肝片吸虫(Fasciola hepatica)寄生于人和牛、羊等肝脏、胆管内,引起肝炎、胆管炎以及全身性营养障碍的一种寄生虫病,世界卫生组织(WHO)已将其列为重要的人兽共患病之一。据统计,全球超过3亿只的牛、羊感染肝片吸虫,大大降低了畜产品的产量,不仅严重影响畜牧业发展,还给畜牧业带来巨大经济损失,肝片吸虫病每年造成的经济损失超过32亿美元。所以,肝片吸虫病的早期诊断以及防治尤为重要。因此,本试验在课题组前期蛋白组学研究的基础上,用筛选到的具有作为早期诊断抗原潜力的甘油醛三磷酸脱氢酶(GAPDH)、组织蛋白酶L1(Catl-1)作为研究对象,根据Gen Bank中已发表的Fh GAPDH(THD20231.1)和Fh Catl-1(AY573569.1)序列为参考,设计两对特异性引物。提取肝片吸虫成虫总RNA,经过PCR方法扩增出了Fh GAPDH和Fh Catl-1基因,将目的基因定向克隆入p MD18-T载体中,经双酶切、PCR及质粒测序鉴定正确后,表明成功克隆了Fh GAPDH和Fh Catl-1基因。序列分析结果显示:Fh GAPDH基因由起始密码子到终止密码子的核苷酸长为1014 bp,编码337个氨基酸;Fh Catl-1基因由起始密码子到终止密码子的核苷酸长为981 bp,编码326个氨基酸。生物信息学分析结果显示:Fh GAPDH蛋白质等电点为7.65,为碱性氨基酸,亲水性平均系数小于零,B细胞抗原表位分析其具有良好的抗原性,属亲水性蛋白,主要以α螺旋和无规则卷曲为二级结构,且该蛋白不存在信号肽和跨膜区域,空间结构预测结果显示模板与序列一致度为71.99%,GMQE可信度良好,QMEAN4匹配度高度一致。Fh Catl-1蛋白质等电点为6.15,为酸性氨基酸,亲水性平均系数小于零,B细胞抗原表位分析其具有良好的抗原性,属亲水性蛋白,在1-15氨基酸该蛋白存在信号肽,不存在跨膜区域,空间结构预测结果显示模板与序列一致度为95.48%,GMQE可信度极好,QMEAN4匹配度高度一致。将鉴定正确的目的基因片段从克隆载体上切下,分别与表达载体p Cold I、p ET-28a连接,经双酶切鉴定正确后,表明成功构建原核表达载体p Cold I-Fh GAPDH和p ET-28a-Fh Catl-1,表达Fh GAPDH和Fh Catl-1重组蛋白,蛋白大小分别为36.47k Da和36.60 k Da。Western bloting结果显示,肝片吸虫抗体能够特异性识别两种重组蛋白,表明重组蛋白具有良好的反应性。为制备多克隆抗体以及评价重组蛋白免疫兔子诱导的免疫效果,将纯化后的Fh GAPDH、Fh Catl-1、Fh GAPDH+Fh Catl-1重组蛋白分别与佐剂融合免疫兔子,间隔14 d免疫一次,免疫前和每次免疫后7 d后通过耳缘静脉采血,检测血清中特异性抗体水平的变化,三免之后,当抗体效价达到10以上,便可心脏采血,收集的血清即为多抗。随后取脾淋巴细胞与重组蛋白共培养,检测Th1/Th2细胞因子的变化。血清中特异性抗体检测结果显示,重组蛋白免疫后的兔子均可产生混合的Th1/Th2免疫应答,Ig G、Ig G、Ig G抗体水平均增加,且Ig G(Th2)增加更显著,Fh GAPDH+Fh Catl-1组诱导的免疫效果最好。ELISA检测脾淋巴细胞产生的细胞因子,结果显示IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ因子水平均有所上升,其中IFN-γ、IL-12因子水平显著上升,IL-4、IL-10因子水平极显著上升。Fh GAPDH+Fh Catl-1组IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ分泌量最高。用纯化后的Fh GAPDH、Fh Catl-1、Fh GAPDH+Fh Catl-1重组蛋白作为包被抗原,建立3种检测肝片吸虫血清抗体的间接ELISA方法。采用棋盘法优化反应的最佳血清稀释度和最佳抗原包被浓度,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行优化。结果表明:(1)Fh GAPDH包被浓度每孔为0.375 ng/μL,血清稀释度为1:400;最佳抗原包被时间为37℃2 h,最佳封闭液为1%BSA;最佳二抗孵育时间60 min,P/N值最大为5.561,最佳底物作用时间为15 min。(2)Fh Cal-1包被浓度每孔为1.5 ng/μL,血清稀释度为1:200;最佳抗原包被时间为37℃2 h,最佳封闭液为1%BSA,最佳二抗孵育时间45 min,P/N值最大为5.037,最佳底物作用时间为15 min。(3)Fh GAPDH+Fh Catl-1包被浓度为0.75 ng/μL,血清稀释度为1:200,最佳抗原包被时间为4℃过夜,最佳

关键词：肝片吸虫甘油醛三磷酸脱氢酶组织蛋白酶L1 免疫间接ELISA 胶体金

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不同阅读任务对高职英语专业学生词汇附带习得的影响研究

不同阅读任务对高职英语专业学生词汇附带习得的影响研究

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作者：孙益春宁波大学

学位级别：硕士

“投入量假设”是由Laufer和Hulstijn（2001）提出的，它包含动机和认知两个范畴。“投入量”由需要、搜寻和评估三个因素组成。该假设认为阅读中的词汇附带习得与阅读任务有密切关系，任务促使学习者对词汇认知加工的投入量越大，词汇... 详细信息

“投入量假设”是由Laufer和Hulstijn（2001）提出的，它包含动机和认知两个范畴。“投入量”由需要、搜寻和评估三个因素组成。该假设认为阅读中的词汇附带习得与阅读任务有密切关系，任务促使学习者对词汇认知加工的投入量越大，词汇习得的效果就越好。本研究主要以“投入量假设”为理论框架，考察了高职英语专业学生完成不同投入量的阅读任务后对英语词形知识附带习得的效果,旨在通过实证研究探讨这些阅读任务对词形知识习得和保持的影响，并验证“投入量假设”在解释附带习得词形知识的合理性。本实验持续时间为两周，受试来自宁波大红鹰学院高职学院英语专业130名大二学生，被随机分成四组，分别完成四项不同的阅读任务：阅读理解、选词填空（附注释）、选词填空（不附注释）以及猜词并完成阅读理解。完成任务后进行了一次即时测试和一次延时测试，受试在事先不知情的情况下做了一个关于十个目标词的单词拼写测试，两次测试间隔时间为一个星期。实验数据由SPSS19.0统计软件进行分析。实验结果部分证实了“投入量假设”。学习者可以通过阅读任务，附带习得一部分词形知识，并且投入量大的阅读任务比投入量小的任务更有助于词形知识的习得。但延时测试的结果显示四个组的词形知识的保持均受到严重的损耗，并且四个组均值之间没有显著差异，这说明投入量的大小并不一定对词形附带习得的保持效果产生影响。通过比较投入量小的输出任务和投入量大的输入任务以及相同投入量指数的输出型任务和输入型任务，得出输出型任务确实比输入型任务更能促进词形知识的习得，但是效果不是很显著。基于上述发现，本文对英语词汇教学提出了一些建议：词汇学习依赖于有意学习和附带习得的结合。教师应根据目标词所掌握程度的不同设计不同的阅读任务，如在帮助学生掌握词形等产出型词汇知识时，可以设计构词法等专门的词汇练习，而阅读理解、选词填空和造句等意义加工的练习，则较适合学习接受型词汇知识。为了有利于词汇习得，教师要为学习者提供更多的机会接触目标词。同时，要达到较好的习得效果，学习者必须及时复习和巩固所学的产出型词汇知识。本文的研究结论对第二语言词汇习得能起到一定的帮助作用，但为了使“投入量假设”不断完善和成熟，还需进行更多深入的实证研究。

关键词：投入量阅读任务词汇附带习得词形知识

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浅谈西湖景点名称的翻译

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中国科技信息 2008年第11期 297-298页

作者：孙益春宁波大红鹰职业技术学院国际交流系

笔者以西湖景区的景点名称为例,对西湖景区作了实地调查,查找了相应的文字宣传资料,收集了一些西湖景点名称的翻译,同时通过分析研究,找出了翻译中存在的一些问题,并且列举了一些主要的翻译方法。

关键词：西湖景点名称翻译方法文化

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简论英语习语来源及翻译

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大学时代（B版） 2006年第7期 92-93页

作者：孙益春宁波大红鹰职业技术学院国际交流系浙江宁波315175

英语习语是英语语言的重要组成部分，习语有着丰富的来源，反映了一个民族的社会，生活，文化等各个领域。只有了解其来源才能更好的理解其内涵。本文对英语习语的来源作了初步的探索，并且通过一些实例的翻译，介绍了几种英语习语的翻... 详细信息

英语习语是英语语言的重要组成部分，习语有着丰富的来源，反映了一个民族的社会，生活，文化等各个领域。只有了解其来源才能更好的理解其内涵。本文对英语习语的来源作了初步的探索，并且通过一些实例的翻译，介绍了几种英语习语的翻译方法。

关键词：英语习语词源翻译

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语境词汇教学与大学新生词汇产出能力的研究

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南昌高专学报 2011年第2期26卷 91-93页

作者：孙益春宁波大红鹰学院浙江宁波315016

大学新生的词汇产出能力普遍偏低,特别是新词汇的出现频率很低。针对这种现象,作者将语境词汇教学应用于大学新生英语课堂中。实验证明语境词汇教学能够提高大学新生的词汇产出能力。教师可以采纳语境词汇教学,培养学生用英语进行思维... 详细信息

大学新生的词汇产出能力普遍偏低,特别是新词汇的出现频率很低。针对这种现象,作者将语境词汇教学应用于大学新生英语课堂中。实验证明语境词汇教学能够提高大学新生的词汇产出能力。教师可以采纳语境词汇教学,培养学生用英语进行思维的能力,提高词汇的产出能力。

关键词：语境词汇教学大学新生词汇产出能力

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试论英语商标词的翻译原则和方法

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吉林省教育学院学报 2008年第8期24卷 106-107页

作者：孙益春宁波大红鹰职业技术学院国际交流系浙江宁波315175

本文根据翻译学的理论和方法以及商标词的翻译实践,主要论述了商标词在翻译过程中应遵循的文化原则和产品信息原则,并且例举了常用的四种翻译方法:直译、音译、意译和转译。

关键词：商标词英汉文化翻译原则翻译方法

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浅析高职高专英语教学中课堂导入的原则和方法

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武汉工程职业技术学院学报 2010年第3期22卷 78-80页

作者：孙益春宁波大学浙江宁波315211 宁波大红鹰学院外国语学院浙江宁波315175

导入是英语课堂教学的一个重要环节,高职高专的学生英语基础薄弱,又缺乏积极性,因此恰当而巧妙的课堂导入就显得尤为重要。为了激发学生的学习兴趣和求知欲望,为了英语课堂的顺利进行,结合高职高专学生的特点和自身的教学经验,主要讨论... 详细信息

导入是英语课堂教学的一个重要环节,高职高专的学生英语基础薄弱,又缺乏积极性,因此恰当而巧妙的课堂导入就显得尤为重要。为了激发学生的学习兴趣和求知欲望,为了英语课堂的顺利进行,结合高职高专学生的特点和自身的教学经验,主要讨论了高职高专英语课堂导入时应注意的一些基本原则,即课堂导入应该具有灵活性、启发性、趣味性和针对性,并结合实例介绍了课堂导入的具体方法,即启发提问式导入、背景知识导入、故事导入、多媒体导入等。

关键词：英语课堂导入高职高专原则方法

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基于TPX和CatB4重组蛋白的绵羊肝片吸虫病间接ELISA诊断方法的建立

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中国兽医科学 2021年第5期51卷 581-587页

作者：魏雅婷孙益春郑芦珊杨莹张金鹏庞紫璇路义鑫东北农业大学动物医学学院黑龙江省动物源性人兽共患病重点实验室黑龙江哈尔滨150030

为了建立早期快速诊断绵羊肝片吸虫病的血清学方法,原核表达肝片吸虫TPX和CatB4重组蛋白。分别以TPX、CatB4重组蛋白作为包被抗原,建立2种检测肝片吸虫血清抗体的间接ELISA方法。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,... 详细信息

为了建立早期快速诊断绵羊肝片吸虫病的血清学方法,原核表达肝片吸虫TPX和CatB4重组蛋白。分别以TPX、CatB4重组蛋白作为包被抗原,建立2种检测肝片吸虫血清抗体的间接ELISA方法。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了筛选。蛋白免疫印迹结果显示,重组蛋白具有良好的抗原活性。这2种间接ELISA方法批内和批间重复试验的最大变异系数均小于10%,且这2种方法与华支睾吸虫、日本血吸虫和捻转血矛线虫阳性血清均无交叉反应。对来自黑龙江省各地区的95份绵羊血清进行检测,阳性率分别为18.95%和22.11%。结果表明,本研究中建立的2种间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,为肝片吸虫病的早期诊断和流行病学调查提供了必要手段。

关键词：肝片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶组织蛋白酶B4 间接ELISA

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基于GAPDH重组蛋白建立羊肝片吸虫病间接ELISA检测方法

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中国兽医杂志 2022年第2期58卷 34-38页

作者：孙益春魏雅婷郑芦珊杨莹张金鹏庞紫璇路义鑫东北农业大学动物医学学院黑龙江省动物源性人兽共患病重点实验室黑龙江哈尔滨150030

为了建立早期羊肝片吸虫病的血清学快速检测方法,本试验成功克隆并表达肝片吸虫GAPDH重组蛋白,Western blot结果显示,该重组蛋白具有良好的抗原活性。用肝片吸虫GAPDH重组抗原包被,建立肝片吸虫病血清抗体的间接ELISA方法;随后优化反应... 详细信息

为了建立早期羊肝片吸虫病的血清学快速检测方法,本试验成功克隆并表达肝片吸虫GAPDH重组蛋白,Western blot结果显示,该重组蛋白具有良好的抗原活性。用肝片吸虫GAPDH重组抗原包被,建立肝片吸虫病血清抗体的间接ELISA方法;随后优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时筛选其他反应条件。结果显示,间接ELISA方法批内和批间重复试验的最大变异系数均小于10%,GAPDH重组抗原与华枝睾吸虫、日本血吸虫和捻转血矛线虫阳性血清均无交叉反应。对来自黑龙江省各地区的96份羊血清进行检测,阳性率为16.67%(16/96)。结果表明本试验建立的方法具有良好的敏感性和特异性,能够为早期诊断羊肝片吸虫病提供参考。

关键词：羊肝片吸虫 GAPDH 间接ELISA

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应用dsRNA干扰技术对旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因功能的初步研究

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中国兽医科学 2020年第5期50卷 589-595页

作者：于鹏成刘畅吴丽佳伊娜娜孙益春张金鹏魏雅婷杨莹庞紫璇路义鑫东北农业大学动物医学学院黑龙江省动物源性人兽共患病重点实验室黑龙江哈尔滨150030

为研究旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的功能,通过电转法将dsRNA导入旋毛虫体内,应用实时荧光定量PCR和Western-blot检测经dsRNA-TsKaSPI电转法处理后肌幼虫TsKaSPI基因转录和表达水平。体外培养观察TsKaSPI基因沉默对肌幼虫存活... 详细信息

为研究旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的功能,通过电转法将dsRNA导入旋毛虫体内,应用实时荧光定量PCR和Western-blot检测经dsRNA-TsKaSPI电转法处理后肌幼虫TsKaSPI基因转录和表达水平。体外培养观察TsKaSPI基因沉默对肌幼虫存活的影响。将dsRNA导入后的幼虫经口接种小鼠,观察TsKaSPI基因沉默对幼虫存活、发育及雌虫生殖力的影响。实时荧光定量PCR和Western-blot检测结果显示,旋毛虫肌幼虫经30μg/mL dsRNA电转处理后TsKaSPI基因的转录和表达分别降低63.36%和69.24%(P0.05)。将dsRNA电转处理的肌幼虫接种小鼠后6 d肠道成虫和35 d肌幼虫的减虫率分别为36.22%和31.87%。PBS组、dseGFP对照组和dsRNA-TsKaSPI处理组的感染小鼠收集到的雌虫新生幼虫量分别为49.20±5.93、49.40±4.62、50.80±4.32(P>0.05)。结果表明,dsRNA可明显抑制Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的转录和表达及幼虫在小鼠体内的存活和发育。

关键词：旋毛虫 Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂 dsRNA

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