应用dsRNA干扰技术对旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因功能的初步研究

作     者：于鹏成 刘畅 吴丽佳 伊娜娜 孙益春 张金鹏 魏雅婷 杨莹 庞紫璇 路义鑫 YU Peng-cheng;LIU Chang;WU Li-jia;YI Na-na;SUN Yi-chun;ZHANG Jin-peng;WEI Ya-ting;YANG Ying;PANG Zi-xuan;LU Yi-xin

作者机构：东北农业大学动物医学学院黑龙江省动物源性人兽共患病重点实验室黑龙江哈尔滨150030 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2020年第50卷第5期

页      面：589-595页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31372427) 家畜疫病病原生物学国家重点实验室(中国农业科学院兰州兽医研究所)开放课题资助项目(SKLVEB2019KFKT011) 国家重点研发计划项目(2017YFD0501200) 

主　　题：旋毛虫 Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂 dsRNA 

摘      要：为研究旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的功能,通过电转法将dsRNA导入旋毛虫体内,应用实时荧光定量PCR和Western-blot检测经dsRNA-TsKaSPI电转法处理后肌幼虫TsKaSPI基因转录和表达水平。体外培养观察TsKaSPI基因沉默对肌幼虫存活的影响。将dsRNA导入后的幼虫经口接种小鼠,观察TsKaSPI基因沉默对幼虫存活、发育及雌虫生殖力的影响。实时荧光定量PCR和Western-blot检测结果显示,旋毛虫肌幼虫经30μg/mL dsRNA电转处理后TsKaSPI基因的转录和表达分别降低63.36%和69.24%(P0.05)。将dsRNA电转处理的肌幼虫接种小鼠后6 d肠道成虫和35 d肌幼虫的减虫率分别为36.22%和31.87%。PBS组、dseGFP对照组和dsRNA-TsKaSPI处理组的感染小鼠收集到的雌虫新生幼虫量分别为49.20±5.93、49.40±4.62、50.80±4.32(P0.05)。结果表明,dsRNA可明显抑制Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的转录和表达及幼虫在小鼠体内的存活和发育。