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基于全合成纳米抗体技术的黄曲霉毒素B1抗体制备及优化

基于全合成纳米抗体技术的黄曲霉毒素B1抗体制备及优化

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作者：王云芹重庆三峡学院

学位级别：硕士

真菌毒素是由不同真菌种类产生的次生代谢物,主要是曲霉、赤霉、镰刀菌和青霉。据联合国粮食及农业组织（FAO）报道,世界上25%的食物受到真菌毒素污染。然而,最近的一项研究表明,全世界60～80%的作物受到真菌毒素的感染,这一数字超过了... 详细信息

真菌毒素是由不同真菌种类产生的次生代谢物,主要是曲霉、赤霉、镰刀菌和青霉。据联合国粮食及农业组织（FAO）报道,世界上25%的食物受到真菌毒素污染。然而,最近的一项研究表明,全世界60～80%的作物受到真菌毒素的感染,这一数字超过了粮农组织给出的数字。曲霉属包括4个亚属339种。曲霉产生的真菌毒素被称为黄曲霉毒素。黄曲霉毒素是由各种类型的曲霉,特别是黄曲霉和寄生曲霉产生的次生代谢物,具有较强致癌作用。目前已经分离鉴定出来的黄曲霉毒素及其衍生物有20多种,其中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的毒性作用最强,被世界卫生组织的国际癌症研究机构（ARC）划分为Ⅰ类致癌物质。为了避免AFB1的污染风险,几乎世界上所有的国家和地区都制定了AFB1的强制限量标准。为了避免受到黄曲霉毒素B1的污染,检测所有食物中AFB1的含量显得特别重要。当前有很多检测技术可应用于检测AFB1,主要包括理化分析方法和免疫学方法等。其中,免疫学方法由于其精确度高,特异性强,操作简便等优点被广泛地用来检测AFB1,但它需要高灵敏度和特异性的抗体。随着分子生命工程的持续发展,重组抗体特别是单链抗体（Single chain Fv antibody fragment,Sc Fv）由于其易于改造、批次间差异小、制备时间短和表达量高等优点成为研究板块。但是,单链抗体与其亲本单克隆抗体相比,亲和力较低此外稳定性较差,从而导致在应用上具有局限性。研究抗原抗体间的不同反应,阐明单链抗体亲和力的影响机制,可为在基因水平上改造单链抗体,进一步提高其亲和力提供理论指导。本研究通过全合成噬菌体展示库筛选制备黄曲霉毒素B的纳米抗体,进一步结合计算机辅助建模设计实现抗体优化,主要内容及实验结果如下:（1）基于噬菌体展示技术利用实验室前期建成的全合成抗体库筛选制备黄曲霉毒素B1抗体基因G5,在此基础上对其进行表达,以期获得大量与AFB1结合的单链抗体,随后通过创建表达载体,再将修饰表达载体转化至感受态细胞BL21（DE3）中,进行诱导后获得可翻译的蛋白即纳米抗体,用于生物活性的鉴定实验。ELISA检测分析G5对AFB1-BSA的结合率以及AFB1对G5结合的抑制率,综合分析抗体亲和力。结果表明,G5对AFB1-BSA的EC约为0.95μmol/LAFB1与抗体竞争结合AFB1-BSA的IC约为43μmol/L,亲和力较好。（2）考虑到G5可能存在亲和力不高、特异性不强的问题,提出了一种基于计算机引导的同源建模和分子对接的体外亲和力成熟方法来优化抗体,通过计算机辅助搜寻目标序列同源建模模板、再进行目标序列与同源模板的多重序列比对,同时对同源模型的构建和模型评估、优化,最终获得一个可靠的三维结构。从抗体-抗原复合结构上来看,根据该试验构建模型G5与AFB1的分子对接,进行相互作用力分析。对接结果按照复合物能量值排序,能量越低表明该结构越稳定。通过打分,最佳G5-AFB1复合物能量分值为-6.29 kcal/mol。G5-AFB1复合物结构选择单链抗体的互补决定区（Complementarity Determining Regions,CDRs）区进行分析,AFB1与纳米抗体结合的氨基酸残基位点为:TYR103、VAL102、ARG101、ILE51、THR52、THR58,并且AFB1与残基ARG101形成较稳定的氢键网络体系。其中氢键键长越短,作用力越强;同时还与残基TYR103、VAL102、ILE51、THR52、THR58形成了疏水作用。再通过Py Mol可视化分析复合物5A内的氨基酸残基,选择最合适的残基ARG101进行突变,突变为IEL101,利用重叠延伸（genesplicingbyoverlapextension PCR,SOE PCR）获得突变基因及其对应的蛋白G5-1,经目的蛋白经纯化后,EC50值为0.196μmol/L,亲和力提高了9倍;IC50值为10.27μmol/L,抑制率提高了4倍,证明优化目的达到。

关键词：黄曲霉毒素B1 噬菌体展示技术全合成纳米抗体库优化分子对接

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金属有机骨架的改性及制备其涂层用于固相微萃取VOCs

金属有机骨架的改性及制备其涂层用于固相微萃取VOCs

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作者：杨晓芹河北大学

学位级别：硕士

挥发性有机化合物（VOCs）是一种能在大气中参加光化学反应,对环境和人体健康有一定危害的有机化合物,其主要来源是煤炭、石油和天然气等能源相关的工业过程。人体呼出气体分析是近年来的科研热点,其中的VOCs有望在临床诊断中发挥革命... 详细信息

挥发性有机化合物（VOCs）是一种能在大气中参加光化学反应,对环境和人体健康有一定危害的有机化合物,其主要来源是煤炭、石油和天然气等能源相关的工业过程。人体呼出气体分析是近年来的科研热点,其中的VOCs有望在临床诊断中发挥革命性作用。人体的新陈代谢和生理状况与呼出气体中所含有的内源性VOCs密切相关,找到VOCs与某种疾病的关系就可以实现疾病的早期诊断。然而,环境和生物样品中目标物的浓度极低,通常在ppt至ppb级别,因此分析方法的开发面临更高的硬性要求,特别是在样品具有高湿度以及复杂基质影响的情况下。通常,在分析检测VOCs之前,可以将VOCs组分进行富集。固相微萃取（SPME）作为一项快速高效的样品前处理技术,具有较低的溶剂消耗、被测目标物选择性高、操作方便、易于与检测仪器联用等优势,已被成功用于对气体、液体和固体样品中的挥发性有机化合物和半挥发性有机化合物进行分析。SPME领域的研究热点主要聚焦于制备涂层（高富集效率和高选择性）。金属有机骨架（MOFs）具有结构多样、比表面积高和可定制性等优点,引起SPME领域科研工作者的普遍关注。但单一的MOFs材料做萃取涂层在使用过程中仍存在一些难题,如水稳定性差、富集效率低及选择性有限等。本论文旨在与其它材料复合实现MOFs改性,然后制备涂层用于固相微萃取VOCs,最终进行检测。其主要创新点与研究内容如下:1.通过Sonogashira偶联反应在MOF-199表面生长MONs疏水层合成MOF-199@MON,采用胶粘法将其制备成SPME涂层,并对涂层进行水接触角表征、TGA、TEM、XRD和SEM。探究了影响SPME效率的因素,并在最优条件下与单MOFs和商品化纤维进行比较。由于MONs结构中丰富的共轭芳香族骨架增强了纤维涂层的疏水性能,很大程度上降低了MOF-199骨架的坍塌,最终MOF-199@MON涂层纤维成功用于对水环境中苯系物（BTEX）的提取。2.采用水热合成法将不同比例的聚乙二醇（PEG）引入MIL-88（Fe）中合成尺寸大小不同的PEGx@MIL-88（Fe）,采用胶粘法将其涂覆成SPME纤维以提高对肺癌患者呼出气中极性醛类的富集效率。优化了影响SPME效率的因素,并在最优条件下与单MOFs和商品化纤维进行比较。由于引入PEG可能形成氢键进一步提高了PEG10@MIL-88（Fe）对极性醛类物质的吸附效率,最终PEG10@MIL-88（Fe）涂层纤维成功用于对肺癌患者呼出气中极性醛类的提取。3.通过表面活性剂合成法制备了NH2-Ui O-66@ZIF-67,采用溶胶-凝胶法制备SPME涂层以提高其对结直肠癌患者呼出气中非极性烷烃类和极性醛类的富集效率。优化了影响SPME效率的因素,然后与两种单一MOFs和商品化纤维进行对比。在疏水性能与孔径大小的双重作用下,NH2-Ui O-66@ZIF-67具有比单一MOFs更强的吸附能力。最终NH2-Ui O-66@ZIF-67涂层纤维成功用于对结直肠癌患者呼出气中非极性烷烃类和极性醛类的富集,为MOFs@MOFs准确测定呼出气中VOCs提供依据。

关键词：挥发性有机化合物气相色谱-质谱固相微萃取金属有机骨架复合物

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HALP评分与急性脑梗死的相关性研究

HALP评分与急性脑梗死的相关性研究

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作者：赖芹南昌大学

学位级别：硕士

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遮阴影响玉米节根结构性碳水化合物合成的生理机制

遮阴影响玉米节根结构性碳水化合物合成的生理机制

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作者：刘升芹中国科学院大学(中国科学院东北地理与农业生态研究所)

学位级别：硕士

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介词框架“在X看来”的偏误研究

介词框架“在X看来”的偏误研究

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作者：宋雅芹南昌大学

学位级别：硕士

《HSK考试大纲》及《国际中文教育中文水平等级标准》分别将介词框架“在X看来”列为三级语法点和五级语法点,证明该介词框架在对外汉语教学中具有重要性。但是经过对HSK动态作文语料库和全球中介语语料库对该介词框架的检索,我们发现... 详细信息

《HSK考试大纲》及《国际中文教育中文水平等级标准》分别将介词框架“在X看来”列为三级语法点和五级语法点,证明该介词框架在对外汉语教学中具有重要性。但是经过对HSK动态作文语料库和全球中介语语料库对该介词框架的检索,我们发现外国学习者在使用此介词结构进行语言表达时极易出现偏误。本文以BCC语料库为基础,对介词框架“在X看来”进行细致考察,并以HSK动态作文语料库和全球中介语语料库对该介词框架的检索结果为依据,对具体偏误情况进行统计整理,将偏误类型进行明确分类,根据偏误类型深度分析偏误成因,提出针对性的教学建议,以期为介词框架“在X看来”的对外汉语教学提供思路。本体研究方面,本文主要从构成、句法、语义、语用四个维度对介词框架“在X看来”进行细致考察。构成成分上,该介词框架主要由常项介词“在”、常项准助词“看来”以及变项“X”构成;句法上,该介词框架分布于句首及句中充当状语角色;语义上,该介词框架能够介引评价主体、话题范围和时间范围;语用上,该介词框架具有话题标记、篇章衔接、管界及插入语功能。偏误研究方面,本文在对HSK动态作文语料库和全球中介语语料库中涉及介词框架“在X看来”的语料搜集整理的基础上,对外国学习者使用该介词框架出现的偏误类型进行分类,总结出三种偏误类型,分别是介词框架整体偏误、介词框架部分误代以及介词框架不完整。出现偏误情况的原因主要包括介词框架本身、教材编写和外国学习者学习策略三个层面,针对偏误产生原因以及该介词框架的本体知识研究,本文从介词框架本身、教材编写和外国学习者学习策略三个方面提出了关于此框架的对外汉语教学建议,并为介词框架“在X看来”设计了针对性的教学方案。

关键词：介词框架 “在X看来” 偏误分析

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语文教科书社会性情感学习内容分析与教学策略研究 ——以小学四年级为例

语文教科书社会性情感学习内容分析与教学策略研究 ——以小学四...

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作者：田晓芹内蒙古师范大学

学位级别：硕士

社会性情感学习具体是指学生通过学校管理与教学的影响下,掌握并有效的将知识、技能与态度用于自我认知与自我管理、与他人交往、社会认知与社会参与,学会正确的处理与自我之间的关系,同时也要善于与他人交往,以及与社会关系之间的协调... 详细信息

社会性情感学习具体是指学生通过学校管理与教学的影响下,掌握并有效的将知识、技能与态度用于自我认知与自我管理、与他人交往、社会认知与社会参与,学会正确的处理与自我之间的关系,同时也要善于与他人交往,以及与社会关系之间的协调,产生积极情绪与良好道德的学习活动。20世纪90年代社会性情感学习是西方国家为了提高基础教育的质量并帮助学生适应21世纪的学习与生活提出的教学实践活动,同时也是当下提升我国基础教育阶段学生全面发展的重要方面。语文学科作为一门充满人文韵味且情感资源丰富的学科,承载着深厚的文化底蕴与情感表达,语文教科书往往蕴含着丰富的社会性情感学习内容。小学作为义务教育的初始阶段,也是培养学生社会性情感能力的重要奠基阶段,由此研究并挖掘语文教科书中的社会性情感学习内容并在课堂中加以渗透和强化具有极其重要的价值。本研究基于社会性情感学习相关理论基础上,深入分析小学语文课堂教学渗透社会性情感学习内容可行性,并以小学四年级语文教科书为研究对象,采用文献研究法、文本分析法,对小学四年级语文教科书社会性情感学习内容进行分析,梳理出教科书中不同维度社会性情感学习内容分布情况。通过问卷调查法对小学语文教师在实际教学中渗透社会性情感学习内容的现状展开调查,挖掘其中的成效和问题,针对取得的成效与存在的问题,提出小学语文课堂教学渗透社会性情感学习内容的策略。研究发现,就教科书中社会性情感学习内容分布来看,教科书社会性情感学习内容数量充实丰富、注重强化社会维度的社会性情感学习内容等。就教师渗透社会性情感学习内容取得的成效来看,教师对渗透社会性情感学习内容的认可度高、教师对文学体裁蕴含的社会性情感学习内容把握较好、教师注重学生正向的情感体验;就存在的问题来看,教师对社会性情感学习了解不够深入、教师对社会性情感学习内容挖掘利用不足、教师对渗透社会性情感学习内容目标缺乏关注、教师在部分语文实践活动渗透社会性情感学习内容不足等问题。为强化小学语文教学社会性情感学习内容的渗透,研究从教学理念、教学目标、教学内容、教学环节、教学评价等方面提出教学策略。

关键词：语文教科书社会性情感学习内容分析教学策略

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城市公众对人-野生动物冲突信息响应机制研究

城市公众对人-野生动物冲突信息响应机制研究

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作者：谢雨芹东北林业大学

学位级别：硕士

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基于枯草芽胞杆菌R31构建合成菌群对香蕉枯萎病防控效果的研究

基于枯草芽胞杆菌R31构建合成菌群对香蕉枯萎病防控效果的研究

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作者：黄艾芹仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

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MRI纹理分析联合影像特征对乳腺癌分子分型的预测价值

MRI纹理分析联合影像特征对乳腺癌分子分型的预测价值

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作者：刘天芹湖北医药学院

学位级别：硕士

背景:目前乳腺癌已超越宫颈癌成为女性最多见的恶性肿瘤,严重威胁女性健康。乳腺癌异质性较高,不同分子亚型的乳腺癌在病程发展、治疗方案的选择以及治疗效果上存在很大差异。磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）在临床上已... 详细信息

背景:目前乳腺癌已超越宫颈癌成为女性最多见的恶性肿瘤,严重威胁女性健康。乳腺癌异质性较高,不同分子亚型的乳腺癌在病程发展、治疗方案的选择以及治疗效果上存在很大差异。磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）在临床上已成为乳腺癌主要的影像学检查方法,影像医师单凭肉眼无法观察、分辨出乳腺癌的异质性。随着医学影像技术的不断发展,纹理分析可解决上述问题,它通过提取肿瘤的纹理特征,反映出肿瘤细胞及分子水平特征,为鉴别乳腺癌的分子分型提供了一种无创选择。目的:利用乳腺磁共振T2WI脂肪抑制序列（T2weighted imaging fat suppression,T2WI-FS）及动态对比增强（dynamic contrast enhanced,DCE）图像进行纹理分析及影像特征分析,研究MRI纹理特征联合影像特征鉴别乳腺癌分子分型的可行性及价值。方法:收集我院2022年1月～2023年10月符合纳入及排除标准的127例乳腺癌患者病例资料,手术前都行乳腺MRI检查,术后根据免疫组化结果可有4种分型,分别为Luminal A型、Luminal B型、HER-2过表达型（Human epidermal growth factor,HER-2）和三阴性乳腺癌（Triple-negative breast cancer,TNBC）。利用卡方检验、Fisher确切概率法、方差分析分析4组分子亚型的临床病理特征及MRI影像特征,对有差异的影像特征进行两两比较。手动分割T2WI-FS序列及DCE-MRI图上的病灶导入后处理软件并提取纹理特征,采用方差分析及Kruskal-Wallis检验分析4组分子亚型的纹理参数,对差异有统计学意义的的纹理参数再用Mann-Whitney U检验或t检验进行两组间比较。绘制ROC曲线评价MRI影像特征及纹理特征的诊断效能,后用Logistic回归分析建模,绘制ROC曲线,评价各模型的诊断效能。结果:1.入组的127例患者中,不同临床特征（年龄、绝经情况、脉管浸润、淋巴结转移、组织分级、病理类型、合并DICS情况）差异均无统计学意义（P>0.05）。2.乳腺癌四组分子亚型间有4项MRI影像特征（病灶直径、边界、边缘、强化方式）差异有统计学意义。病灶大小在Luminal A型与非Luminal A型组间差异有统计学意义,病灶边界及边缘在Luminal B型与非Luminal B型组间差异有统计学意义,病灶边缘在HER-2过表达型与非HER-2过表达型组差异具有统计学意义,病灶边界及强化方式在TN型与非TN型组间差异具有统计学意义,其中TN型与非TN型组间病灶边界的鉴别诊断效能最高（AUC=0.698）。3.四组分子亚型间有7项纹理参数有统计学意义,分别为5项DCE-MRI纹理参数及2项T2WI-FS纹理参数,基于DCE-MRI图像的纹理参数鉴别意义更大。基于不同分子分型2组间的比较:Luminal A型与非Luminal A型组间5项纹理参数差异有统计学意义,其中基于DCE图的峰度鉴别诊断效能最高（AUC=0.843）;Luminal B型与非Luminal B型组间2项纹理参数差异有统计学意义,其中基于T2WI-FS图的熵鉴别诊断效能最高（AUC=0.681）;HER-2过表达型与非HER-2过表达型只有1项纹理参数（基于DCE-MRI图的峰度）差异有统计学意义;TN型与非TN型组间有6项纹理参数差异有统计学意义,其中基于T2WI-FS图的熵鉴别诊断效能最高（AUC=0.774）。4.根据Logistic回归建立纹理特征模型,结果鉴别Luminal A型与非Luminal A型的AUC为0.878,Luminal B型与非Luminal B型AUC为0.711,TN型与非TN型AUC为0.869,HER-2过表达型与非HER-2过表达型AUC为0.703。将纹理特征结合影像特征建立联合模型,结果AUC值分别为0.889、0.866、0.709、0.952。鉴别TN型与非TN型建立的联合模型诊断效能最高。结论:1.乳腺癌临床病理特征与分子分型相关性不大,乳腺癌MRI影像特征及纹理特征与分子分型有相关性,其中纹理特征的优势更大。2.基于DCE-MRI图的纹理参数比基于T2WI-FS图的纹理参数鉴别意义更大;在诸多纹理参数中,Luminal A型乳腺癌DCE-MRI的峰度预测效能最高。3.基于MRI纹理分析结合影像特征建立的联合模型在鉴别不同分子亚型乳腺癌方面有较大意义,其中三阴型乳腺癌的预测效能最高。

关键词：乳腺癌分子分型磁共振成像纹理分析

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MWS理论及其初步应用研究 ——以等腰三角形的教学设计为例

MWS理论及其初步应用研究 ——以等腰三角形的教学设计为例

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作者：李英芹曲阜师范大学

学位级别：硕士

新时代与数学学科发展需要全面发展的创新人才,课程改革要求克服传统教学中重知识灌输,轻学生自主构建知识的倾向。课堂教学要重视学生学习知识的过程,体会知识构建的过程,引入MWS理论指导教学,可以帮助学生体会知识生成的过程,让学生... 详细信息

新时代与数学学科发展需要全面发展的创新人才,课程改革要求克服传统教学中重知识灌输,轻学生自主构建知识的倾向。课堂教学要重视学生学习知识的过程,体会知识构建的过程,引入MWS理论指导教学,可以帮助学生体会知识生成的过程,让学生经历、体验和享受自主发展数学思维的过程。MWS理论最初是基于对几何教学的研究,提出一个基于认识论方法的理论框架,为分析几何学习的动态转化过程提供了科学的工具,同时也为研究几何的教与学提供了一个全面的视角。因此,将理论应用于几何教学具有很高的适切性。国内对该理论的研究较少,仍属于起步阶段。本研究尝试梳理介绍MWS理论并将其本土化,利用理论分析等腰三角形教学过程,指导等腰三角形教学设计研究。因此,本研究以此为切入点进行文献梳理与教学设计,研究问题主要有以下三方面:(1)梳理介绍MWS理论,厘定核心概念,明确分析框架;(2)基于MWS理论分析等腰三角形的课堂教学视频中存在的问题;(3)基于MWS理论进行等腰三角形的教学设计改进研究。为了解决以上问题,本研究采用文献研究法、质性分析法、比较研究法、课例研究法、访谈法、问卷调查法,对MWS理论、教学过程分析、教学设计展开研究,旨在探讨如何将MWS理论应用于等腰三角形教学设计研究,以改进等腰三角形教学设计。研究内容分为理论研究和教学过程分析、教学设计研究,具体包括以下四部分:(1)通过综合新时代与数学学科发展对人才的要求,课程改革的要求,当前课堂教学存在的弊端,提出本研究的问题、意义、方法与思路。(2)对国内外MWS理论和等腰三角形教学相关文献进行综述。(3)教学视频分析研究:基于MWS理论制定视频分析框架,对S省第七届师范类高校学生从业技能大赛中获初中数学组一等奖的三个等腰三角形教学视频、一个获得一师一优课G省省级优课荣誉的等腰三角形教学视频、一个一线教师的等腰三角形教学课堂实录共五个视频进行分析,利用NVivo软件对教学过程进行可视化分析,总结优点与不足,提出改进建议。(4)教学设计研究:分析MWS理论指导等腰三角形教学设计的可行性;给出MWS理论指导下等腰三角形的教学设计,利用NVivo软件对教学过程进行可视化分析;设计和编制教学设计评价问卷和教师访谈问卷,利用SPSS软件对问卷进行信效度检验后,使用问卷对MWS理论指导的等腰三角形教学设计进行评价调查,并利用EXCEL软件进行可视化分析。据此得出研究结论,一是MWS理论通过符号学、工具性和证明的论述性这三个不同发生定义的三个垂直平面将认识论与认知层面联系起来,可用于描述教学过程并分析教学过程在框架中出现的路径;二是应用MWS理论分析已有的等腰三角形性质的教学视频发现推理证明环节的不可或缺;三是通过调查问卷和访谈发现MWS理论指导的等腰三角形性质的教学设计切实可行。根据以上研究,提出如下教学建议:(1)等腰三角形教学设计应包含探索发现、推理证明、交流应用三个主要环节,重视对猜想的演绎推理和证明;(2)教材编写时应在等腰三角形性质的探究发现与应用解题之间添加推理证明环节;(3)教师要成为教学的研究者,应加强MWS等数学教学理论的学习与研究,提升自身的教育教学理念,提高教学设计能力。

关键词： MWS理论符号学-工具性工具性-论述性符号学-论述性等腰三角形

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